• 미생물학회지
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• 제22권3호
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• pp.175-181
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• 1984

In order to develope a protoplast fusion system for industrial coryneform bacteria, the optimum conditions for the formation and regeneration of progoplast were examined for Brevibacterium flavum and Corynebacterium glutamicum and the protoplast fusion was performed. For the formation of the protoplast of B. flavum and C. glutamicum, the optimum time for penicillin G. treatment to obtain protoplast was mid-exponential growth phase ($O.D_{580}=0.6-0.8,\;8.0{\times}10^7-1.0{\times}10^8cell/ml$). At the optimum conditions (0.3units/ml penicillin G and $400{\mu}g/ml$ lysoyme for treatement), frequencies of protoplast formation and protoplast regeneration were 99% and 25%, respectively. Protoplast regeneration frequency was highest under the optimum conditions for the protoplast formation. Addition of 25mM $Mg^{2+}\;and\;50mM\;Ca^{2+}$ to the regeneration medium further increased the regeneration frequencies. The protoplast fusion frequencies of B. flavum and C. glutamicum in intraspecies fusion were $1.0{\times}10^{-8}\;and\;7.8{\times}10^{-4}$, of the regenerated protoplast respectively, when 33% of PEG (polythylene glycol) 6,000 was used as the fusing agent.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제23권3호
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• pp.359-364
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• 1995

Two lactic strains, Leuconostoc mesenteroides Lu5 and Pediococcus pentosaceus P1 isolated from Kimchi, were used to determine the optimum conditions for protoplast formation and regeneration. The maximum protoplast formation rate was obtained with both strains at early exponential growth phase and decreased rapidly during growth phase. For P. pentosaceus P1, 30 $\mu$g/ml of lysozyme treatment was sufficient to obtain over 90% of protoplast formation and 300 $\mu$g/ml for L. mesenteroides Lu5, showing great difference in sensitivity of these strains to lysozyme. For both strains, best results were obtained at pH 7, using 0.5 M sucrose as osmotic stabilizer. For regeneration of protoplast, the highest regeneration rate was obtained after 15 minutes of lysozyme treatment and declined drastically with prolonged digestion.

• Archives of Pharmacal Research
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• 제10권3호
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• pp.158-164
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• 1987

To obtain a new strain of Ganoderma lucidum by protoplast fusion technique, its protoplast formation and regeneration were studied. Several factors affecting the protoplast formation and regeneration were investigated to find their optimum conditions. The mycelium was grown for four days on the cellophane membrane placed on G. Incidum complete medium (GCM). When various commercial lytic enzymes were examined for protoplast isolation, the combination of Novozym 234 and $\beta$glucuronidase was found to be effective. An osmotic stabilizer, 0.6 M sucrose in 20 mM phosphate buffer pH 5.8, gave the highest yield of protoplasts. Three-hour incubation in shaking incubator was most suitable for releasing protoplasts. To increase the protoplast yield, pretreatment with 2-mercaptoethanol was carried out. The regeneration frequency in GCM containing 0.6M MgSO$_4$ 7$H_2O$ was shown to be 0.66%.

• 한국균학회지
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• 제21권1호
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• pp.1-8
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• 1993

Phytophthora capsici에서 원형질체를 형성, 재생 시키는데 관여하는 요인에 대해 조사연구하였다. 삼투압조절제로서 0.35 M $CaCl_2$가 첨가된 Novozym 234를 6-9시간 처리하면 균사체에서 원형질체가 양호하게 나출되었다. 24시간 배양한 어린 균사체에서 가장 많이 원형질체를 나출시킬 수 있었으며, 또한 Novozym 234의 농도가 진할수록 효과적으로 원형질체가 나출되었다. 원형질체를 재생시키는데는 0.4 M mannitol과 0.1 M $CaCl_2$를 혼합한 것이 삼투압 조절제이었다. 원형질체의 재생률은 모든 영양소가 첨가된 Henninger 합성배지에서 가장 높았다. 아미노산이나 ${\beta}-sitosterol$은 원형질체의 재생에 영향을 미쳐 두 영양소가 빠지면 원형질체의 재생이 억제되었다. 특히 아미노산 중 L-aspartic acid와 L-glutamic acid는 원형질체의 재생을 촉진시켰다. 그러나, 미량원소는 원형질체의 재생에 영향을 주지 않았다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제21권2호
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• pp.101-106
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• 1993

The optimal conditions for the production and regeneration of L. helveticus protoplasts were examined. The protoplast formation of L. helveticus was most efficient obtained when the cells grown to mid and late logarithmic phase in MRS medium were used. The maximum number of protoplasts was obtained when lysozyme and mutanolysin were used to lysis the cell wall in 20mM HEPES buffer (pH 7.0) containing 1M sucrose. Regeneration was accomplished with a complex medium containing 10% sucrose, 10mM MaCl2, 20mM CaCl2, 5% gelatin and 0.5% bovine serum albumin. The regeneration frequency of the protoplasts was 10-20% after 5 days of incubation at 30C.

• 한국식품과학회지
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• 제16권3호
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• pp.363-367
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• 1984

Streptococcus lactis ATCC 11454 의 protoplast 생성 및 재생에 관하여 조사하였다. Protoplast의 생성은 용균효소로써 리소짐 단독처리 만으로 충분히 가능하였으며 균체의 배양은 20mM DL-트레오닌을 첨가한 배지를 사용하는 것이 좋았으며 생육시기와 리소짐 농도등이 중요한 영양인자였다. 배지조성의 최적화 및 protoplast를 배지에 접종하는 방법을 변형시킴으로써 약 20%정도의 재생효율을 얻을 수 있었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제15권2호
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• pp.89-94
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• 1987

Streptomyces mitakaensis 균주의 원형질체 형성과 정상세포로의 재생에 관한 최적조건을 연구했다. S. mitakaensis 균주를 GBYN 배지(glycerol 20g, beef extract 5g, yeast extract 5g과 NaCl 5g, 증류수 1,000$m\ell$)에 glycine 0.5% 함유된 배지에서 대수증식 기말까지 배양한 뒤에 lysozyme(1mg/$m\ell$)을 35$^{\circ}C$에서 60분간 처리를 했을 때에 원형질체 형성은 최고치를 나타냈다. 정상세포로의 재생은 R2 평판배지에 원형질체를 접종한 후 10일이 됐을 때에 재생이 되는 것을 관찰했고, H2액체 배지에서는 3일 후에 재생되는 것을 관찰했다. 세포재생 비율은 0. 1% 정도였다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제13권2호
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• pp.145-149
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• 1985

전분자원의 효율적 이용을 위한 방법의 일환으로 분리동정된 전분이용성 효모 H. anomala var. anomala FRI YO-32와 S. cerevisiae와의 세포융합가능성을 검토하기 위하여, 두 효모원형질체의 재생을 위한 최적조건들이 검토되었다. S. cerevisiae에 비하여 FRI YO-32균주의 원형질체가 삼투압안정성이 더 좋았으며 원형질체 재생에 영향을 주는 중요한 인자로서 agar와 삼투압안정제의 농도, 원형 질체 배양방법 등이 검토되었다. 또한 원형 질체 형성을 위한 효소처리 시간이 길어질수록 원형 질체 형성수율은 증가하나 재생효율은 감소하였다.

• 한국균학회지
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• 제23권4호통권75호
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• pp.305-309
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• 1995

Phanerochaete chrysosporium ME446의 원형질체 생성 및 재생을 위한 원형질체 분리에 알맞은 세포벽 분해효소로는 Novozym 234이였으며 삼투압 조절제로서는 0.6M sucrose, 처리시간은 $2.5{\sim}3$시간이었다. 균사체 배양일수는 대수기에 해당하는 42시간이었으며 원형질체 재생에 알맞은 배지로는 0.6M mannitol을 첨가한 poly-R 배지였다.

• 미생물학회지
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• 제22권1호
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• pp.35-40
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• 1984

Streptomyces속 균주개발의 수단으로서 이용할 목적으로 원형질체 융합방법의 확립을 시도하였다. 특히 융합빈도를 높이고 실험을 간편화하는데 역점을 두었다. 원형질체의 형성 및 재생빈도는 균의 배양시간에 따라 변하였는데 대수기에서 수확한 균체로부터 가장 높은 빈도의 수율을 얻었다. 원형질체의 형성은 다른 용균효소를 사용하지 않고 Lysozyme 단독처리 만으로도 충분히 가능하였고 원형질체의 세포막 재생은 Monolay법 보다는 Overlay법이 훨씬 좋은 결과를 주었다. Monolay법은 1.8%, Overly법은 14%의 재생빈도를 나타냈다. 본 실험에서 PEG1000 (50% W/V)를 사용한 원형질체 융합방법으로 얻은 S. coelicolor의 재조합체의 빈도는 $1.8 {\times} 10^{-2}$이었다.