Conditions of Protoplast Formation and Regeneration of Streptomyces mitakaensis

Streptomyces mitakaensis의 원형질체 형성 및 재생조건 연구

The optimal conditions for the protoplast formation and regeneration of Streptomyces mitakaensis have been investigated. S. mitakaensis cells were converted to protoplast by treating with 0.1 mg/$m\ell$ of lysozyme in phosphate-tris buffer (pH 7.2) to the cells grown at the late logarithmic growth phase in the GBYN medium (gycerol 20g, beef extract 5g, yeast extract 5g, NaCl 5g in 1 liter of distilled water) contained 0.5% glycine. Cell regeneration from protoplast was accomplished in 10 days post inoculation on the R2 regeneration agar medium and at 3 days post inoculation on the H2 regeneration liquid medium. The efficiency of the regeneration was 0.l% in 3 days at 35$^{\circ}C$.

Streptomyces mitakaensis 균주의 원형질체 형성과 정상세포로의 재생에 관한 최적조건을 연구했다. S. mitakaensis 균주를 GBYN 배지(glycerol 20g, beef extract 5g, yeast extract 5g과 NaCl 5g, 증류수 1,000$m\ell$)에 glycine 0.5% 함유된 배지에서 대수증식 기말까지 배양한 뒤에 lysozyme(1mg/$m\ell$)을 35$^{\circ}C$에서 60분간 처리를 했을 때에 원형질체 형성은 최고치를 나타냈다. 정상세포로의 재생은 R2 평판배지에 원형질체를 접종한 후 10일이 됐을 때에 재생이 되는 것을 관찰했고, H2액체 배지에서는 3일 후에 재생되는 것을 관찰했다. 세포재생 비율은 0. 1% 정도였다.