• 한국균학회지
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• 제20권1호
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• pp.58-64
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• 1992

Trichoderma 속의 제균종중에서 10균주를 선별하여 protoplast 형성에 관한 제반조건을 검토하였으며 그 결과는 다음과 같았다. 보편적으로 protoplast 형성에 있어서 삼투안정제의 효과는 ${KCI}>(NH_4)_2{SO_4}>NaCl>mannitol>{MgSO}_4$ 순이었으며, 최적농도는 0.6-0.9M 사이에서 결정되었다. Protoplast형성을 위한 DRISELASE의 최적조건은 pH5.0, 효소농도 2%. 반응시간 4시간, 반응온도 $30^{\circ}C$ 이었다. NOVOZYM 234의 최적조건은 pH 5.5, 효소농도 1%,반응시간 3시간, 반응온도 $30^{\circ}C$ 이었다. Protoplast 생성은 대수증식기 초기와 증기사이의 균사체가 최적이었다. Protoplast 생성에 있어서는 DRISELASE가 효과적이었으나 T. longibruchiatum IAM 13107과 T. viride IAM 5141의 경우에는 NOVOZYM 234가 보다 효과적이었다.

• 자연과학논문집
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• 제11권1호
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• pp.55-63
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• 1999

효모세포의 원형질체 최적형성을 위한 stabilizer의 종류 및 농도, pH 그리고 lysis 방법을 조사하는 한편, intact cell과 protoplast사이의 효소활성도 및 poly-P 생합성율을 비교하였다. 그 결과 protoplast 형성에 있어 snail gut enzyme은 5시간, drisielase는 3시간 정도의 incubation 시간이 필요했으며, stabilizer로는 0.8 M mannitol, 6 M KCl이 좋았다. Protoplast는 intact cell에 비해 ALPase 활성은 22-27%, ACPase는 4-15% 정도 감소하였으며, poly-P 형성은 protoplast에서 유의한 증가가 일어나지 않았다.

• 미생물학회지
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• 제22권3호
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• pp.175-181
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• 1984

In order to develope a protoplast fusion system for industrial coryneform bacteria, the optimum conditions for the formation and regeneration of progoplast were examined for Brevibacterium flavum and Corynebacterium glutamicum and the protoplast fusion was performed. For the formation of the protoplast of B. flavum and C. glutamicum, the optimum time for penicillin G. treatment to obtain protoplast was mid-exponential growth phase ($O.D_{580}=0.6-0.8,\;8.0{\times}10^7-1.0{\times}10^8cell/ml$). At the optimum conditions (0.3units/ml penicillin G and $400{\mu}g/ml$ lysoyme for treatement), frequencies of protoplast formation and protoplast regeneration were 99% and 25%, respectively. Protoplast regeneration frequency was highest under the optimum conditions for the protoplast formation. Addition of 25mM $Mg^{2+}\;and\;50mM\;Ca^{2+}$ to the regeneration medium further increased the regeneration frequencies. The protoplast fusion frequencies of B. flavum and C. glutamicum in intraspecies fusion were $1.0{\times}10^{-8}\;and\;7.8{\times}10^{-4}$, of the regenerated protoplast respectively, when 33% of PEG (polythylene glycol) 6,000 was used as the fusing agent.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제23권3호
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• pp.359-364
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• 1995

Two lactic strains, Leuconostoc mesenteroides Lu5 and Pediococcus pentosaceus P1 isolated from Kimchi, were used to determine the optimum conditions for protoplast formation and regeneration. The maximum protoplast formation rate was obtained with both strains at early exponential growth phase and decreased rapidly during growth phase. For P. pentosaceus P1, 30 $\mu$g/ml of lysozyme treatment was sufficient to obtain over 90% of protoplast formation and 300 $\mu$g/ml for L. mesenteroides Lu5, showing great difference in sensitivity of these strains to lysozyme. For both strains, best results were obtained at pH 7, using 0.5 M sucrose as osmotic stabilizer. For regeneration of protoplast, the highest regeneration rate was obtained after 15 minutes of lysozyme treatment and declined drastically with prolonged digestion.

• ALGAE
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• 제20권3호
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• pp.239-249
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• 2005

Some marine coenocytic green algae could form protoplasts from the extruded protoplasm in seawater. The dissociated cell components of the coenocytic protoplasm could be reunited into live cells and, hence, the formation of new species by mixing protoplasms from different coenocytic cells has been predicted. Our results showed that an incompatibility barrier was present during protoplast formation in coenocytic algae to exclude foreign inorganic particles or alien cell components. No inorganic particles or alien cell components were incorporated into protoplast formed spontaneously in seawater. Even when the inorganic particles or alien cell and/or cell component were incorporated into protoplast in some experimental condition, they were expelled from the protoplast or degenerated within several days. A species-specific cytotoxicity was observed during protoplast hybridization between the protoplasms of Bryopsis spp. and Microdictyon umbilicatum. The cell sap of M. umbilicatum could destroy the cell components of Bryopsis spp., but had no effect on Chaetomorpha moniligera. Species C. moniligera and Bryopsis did not affect protoplast generation of either species. The wound-induced protoplast formation in vitro might have evolved in some coenocytic algae as a dispersal method, and the incompatibility barrier to alien particles or cell and/or cell component could serve as a protective mechanism for successful propagation.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제14권2호
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• pp.175-179
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• 1986

Cellulose분해력이 높은 Cellulomonas flavigena NCIB 12901의 원형질체 융합을 위한 원형질체의 형성조건을 조사하여 본 결과 배양기간에 따라 원형질체의 형성율이 매우 달라져 대수증식기 말기보다는 중기때의 세포를 lysozyme처리하는 것이 더 효율적이며 lysozyme 400$\mu\textrm{g}$/$m{\ell}$ 농도로 6시간처리 하여 95% 이상이 형성됨을 관찰할 수 있었다. 또한 원형질체 형성확인법으로 osmotic shock에 의한 원형질체 계수법은 spheroplast의 형성과 원형질체의 형성이 구별되어 지지 않으므로 그 결과가 전자현미경상으로 직접 관찰된 결과와 일치하지 않는 경우가 있어 전자현미경으로의 관찰이 뒤따라야 하는 것을 알 수 있었다.

• KSBB Journal
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• 제9권2호
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• pp.191-199
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• 1994

김치 발효에 주관여 미생물로 작용하는 Lactoba-cillus plantarum, Leuconostoc mesenteroides 균주에 세포 융합법을 적용시켜 우수한 형질의 재조합체를 얻기 위한 균주 개량의 방법으로 이용하고자 하여 그 기초가 되는 원형질 형성의 최적 조건을 조사하였다. Protoplast를 생성하기 위하여 세포벽 용균 효소로 lysozyme $40{\mu}$g/ml와 protoplast 형성률이 가장 좋은 생육시기인 15hr으로 결정하였다. $30^{\circ}C$, pH 7.5에서 현저한 흡광도 감소 경향과 protoplast 형성률도 우수하였다. 15% sucrose, 20mM $MgCl_2$, 6mM $CaCl_2$에서는 흡광도 감소 경향을 보이지 않았으나 protoplast 형성률은 다른 농도에서보다 증가하는 경향을 나타냈다. Plasma expander로 알려진 gela tin을 첨가하였을 경우에는 660nm에서 유의적인 흡광도 감소 경향을 보이지 않았으며 단지 proto-plast를 형성시키는데 있어서 중요한 보조적 역할을 수행하는 것으로 여겨진다. 균주 발육을 하기 위한 최소 저지 농도를 조사한 결과 marker로 이용할 수 있는 항생제는 erythromycin($15{\mu}$g/ml), ampicillin($50{\mu}$/ml), tetracyclin($30{\mu}$g/ml), chloramphe-nicol($30{\mu}$g/ml)이었다. Leu. mesenteroides는 모든 조건에서 L.plantarum보다 용균 작용과 protoplast 형성 효율이 낮아 L. plantarum에 준하여 protoplast 생성조건을 결정하였다.

• 미생물학회지
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• 제22권1호
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• pp.35-40
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• 1984

Streptomyces속 균주개발의 수단으로서 이용할 목적으로 원형질체 융합방법의 확립을 시도하였다. 특히 융합빈도를 높이고 실험을 간편화하는데 역점을 두었다. 원형질체의 형성 및 재생빈도는 균의 배양시간에 따라 변하였는데 대수기에서 수확한 균체로부터 가장 높은 빈도의 수율을 얻었다. 원형질체의 형성은 다른 용균효소를 사용하지 않고 Lysozyme 단독처리 만으로도 충분히 가능하였고 원형질체의 세포막 재생은 Monolay법 보다는 Overlay법이 훨씬 좋은 결과를 주었다. Monolay법은 1.8%, Overly법은 14%의 재생빈도를 나타냈다. 본 실험에서 PEG1000 (50% W/V)를 사용한 원형질체 융합방법으로 얻은 S. coelicolor의 재조합체의 빈도는 $1.8 {\times} 10^{-2}$이었다.

• 한국식품과학회지
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• 제16권3호
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• pp.363-367
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• 1984

Streptococcus lactis ATCC 11454 의 protoplast 생성 및 재생에 관하여 조사하였다. Protoplast의 생성은 용균효소로써 리소짐 단독처리 만으로 충분히 가능하였으며 균체의 배양은 20mM DL-트레오닌을 첨가한 배지를 사용하는 것이 좋았으며 생육시기와 리소짐 농도등이 중요한 영양인자였다. 배지조성의 최적화 및 protoplast를 배지에 접종하는 방법을 변형시킴으로써 약 20%정도의 재생효율을 얻을 수 있었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제29권1호
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• pp.12-17
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• 2001

Aspergil-lus coreanus NR-15 and Aspergilus oryzae NR-2-5 from traditional Korean Nuruk were selected as parental strains producing starch hydrolysis enzyme. Xll(Arginine-) mutant from A. coreanus NR 15-1 showed high glu-doamylase activity and total acid productivity. Z6(Adenine-) mutant from A. oryzae NR2-5 showed the highest $\alpha$-amylase activity. Therefore, both XII and Z6 mutants were selected and investigated for the optimal conditions of protoplast formation for protoplast fusion. Mixture of equal amount of cellulase and driselase(10mg/ml each) was the most effective as lytic enzymes. The optimal pH and temperature for protoplast formation were 5.0 and $30^{\circ}C$, respectively. The most effective reaction for protoplast formation time was 4 hours. The maximum of protoplst for- mation of Xll mutant and Z6 mutant were $6.54$\times$10^{7}$ protoplasts/ ml and $3.04$\times$10^{ 7}$ protoplasts/ml, and the regen-eration frequencies of the protoplasts were 11.3% and 11.6%, respectively. The size of the protoplasts from X11 and Z6 mutants were 3~6 $\mu\textrm{m}$ and 4~9$\mu\textrm{m}$, respectively.