담배 식물체에서 Arabidopsis thaliana에 존재하는 3가지 다른 엽록소 a/b 결합 단백질 (cab) 유전자 promoter들의 발현을 조사하였다. 이들 promoter의 활성은 이들 promoter에 결합된 reporter gene의 식물인 CAT (chloramphenicol acetyltransfer-ase)의 활성으로 측정하였다. 담배엽에서 cab promoter의 활성은 cab1, cab2, cab3의 순이었고, 이들 잎에서 유도한 callus나 shoot에서도 동일한 양상을 보였다. 이들 3가지 promoter의 발현은 상부엽에서 하부엽보다 높은 활성은 보였으며 개체간의 높은 변이폭은 뿌리내리기를 통하여 무성증식된 식물체를 사용하여 줄일 수 있었다. 이들은 또한 기관 특이성을 보여 줄기 보다 잎에서의 활성이 높았고 뿌리에서는 거의 발현되지 않았다. 그러나 cab1 promoter의 경우, 다른 두 cab promoter들과는 다르게, 잎에 대한 줄기에서의 상대적인 활성이 높았으며, CAT 활성을 단위 단백질당을 표시하는 대신 단위 엽록소당 활성으로 나타내었을 때 줄기와 잎에서 활성의 차이가 관찰되지 않았다. 즉 cab2와 cab3는 광합성 기관 특이성을 보이는 반면 cab1의 경우는 이러한 특이성을 나타내지 않았다. 이러한 현상은 잎에서 유도한 shoot가 줄기와 잎으로 분화되는 과정에서도 관찰되었다.
To examine the effects of sequence variations near the transcriptional start site on the rate of formation of the open complexes at bacteriophage $\lambda P_{R}$ promoter, two mutant promoters were created by site-specific mutagenesis using synthetic oligonucleotides. Mutant I coatains changes at positions -3 and -4 from TT to CC, thus having a 6-bp long G/C stretch between -10 region and transciptional start site (+1). Mutant II has changes at positions -5 and -6 from GG to AA, thereby having a 9-bp long A/T stretch between positions -11 and -3. Selective filter binding assays were performed to measure the rate of formation of the open complexes between the wild-type or two mutant $P_{R}$ promoters on 664 bp fragments and E. coli RNA polymerase at two temperatures. At 37.deg.C, the wild-type and two mutants showed similar rates for the formation of open complex. The second order rate constant $k_{a}$ and $\tau _{int}$, as determined from the .tau.-plot analysis, were $(6.0\pm0.4)\times10^{6}M^{-1}sec^{-1}$ and $11\pm5$sec, respectively. At 18.deg.C, however, the wild-type and two mutant promoters showed differences in the kinetic parameters. k for the wild-type promoter was (2.2$\pm$0.1)\times 10^{6}M^{-1}sec^{-1}$ and $\tau _{int}$ was 76$\pm$sec. Mutant I and II exhibited differences mainly in the rate of isomerization ($\tau_{int,I}=91\pm$10 sec, int,II=34$\pm$ sec), whereas the second order rate constant $k_{a}$ was similar to the wild type value. This result implies that at $18^{\circ}C$, the isomerization rate is determined by both protein conformational change and DNA melting, which are separable kinetically according to the 3-step mechanism of Roe et al.(1984,1985), and that the base changes affected mainly the rate of DNA melting as predicted.lting as predicted.
비닐 아세트산염 합성에 대한 1족 알칼리금속 아세트산염의 촉진 효과를 조사하였다. Pd-Au/$SiO_2$ 촉매를 사용한 경우와 사용하지 않은 경우에 대해 에틸렌과 아세트산 간의 기체상 반응에 대해 생성물 선택성과 에틸렌 전환을 비교하였다. 촉진제가 촉매 표면을 안정화시켰으며, 생성물 선택성과 에틸렌 전환을 촉진하였다. 이 촉매 효과는 1족에서 위에서 아래로 내려갈수록 증가하였다. 이것은 아세트산염의 공통이온효과 때문이다.
휴면기간(休眠期間)이 긴 주목종자(朱木種子)의 습층처리(濕層處理)에 따른 종자내(種子內) 생장(生長) 촉진물질(促進物質)과 생장(生長) 억제물질(抑制物質), 당(糖), 전분(澱粉), 단백질(蛋白質) 및 지방(脂肪) 등(等) 성분(成分)의 소장(消長)과 발아촉진(發芽促進)과의 관계(關係)를 구명(究明)코자 본(本) 실험(實驗)을 수행(遂行)하였던바 그 결과(結果)는 다음과 같다. 1. 습층처리(濕層處理)에 의(依)하여 종자내(種子內) 배육(胚肉)에 있어서의 생장촉진물질(生長促進物質)은 증가(增加)하고 생장(生長) 억제물질(抑制物質)은 급감(急減)하여, 이 양자간(兩者間)의 상호작용(相互作用)이 처리(處理) 1년 이후 11월부터 이듬해 3월사이에 이루어져서 발아(發芽)를 촉진(促進)한다고 생각되며 한편 종피(種皮)에 있어서의 생장(生長) 촉진물질(促進物質)은 배육(胚肉)에 있어서와는 달리 거의 소장(消長)에는 변동(變動)이 없고, 생장(生長) 억제물질(抑制物質)의 양(量)은 급감(急減)하여 지는 것으로 미루어, 종피(種皮)와 발아촉진(發芽促進)과의 관계(關係)는 촉진물질(促進物質)보다 억제물질(抑制物質)의 소실(消失)에 영향(影響)되며 익년(習年) 11월부터 그 다음해 3월사이에 이루어진다고 생각된다. 2. 상치종자(種子)의 발아력(發芽力) 시험결과(試驗結果) 생장(生長) 억제물질(抑制物質)이 발아(發芽)를 좌우(左右)하는 것으로 보아 주목종자(朱木種子)의 발아(發芽)는 생장촉진물질(生長促進物質)보다 생장(生長) 억제물질(抑制物質)에 영향(影響)함이 크다고 생각된다. 3. 습층처리(濕層處理) 함으로서 배육내(胚肉內) 당(糖)과 조단백질량(粗蛋白質量)은 함수율(含水率)과 함께 증가(增加)하나 조지방(粗脂肪)과 전분량(澱粉量)은 감소(減少)하며 이들 성분(成分)의 소장(消長) 또한 발아촉진(發芽促進)과 밀접(密接)한 관계(關係)가 있는 것 같다.
The purpose of this study was to compare the intrinsic absorptivity of piperacillin in the jejunum and the nasal cavity, to investigate the effect of bile salts, fatty acids and their mixed micelles on the intestinal and nasal absorption of piperacilIin, to examine the reversibiIity of bile salt-fatty acid mixed micelles absorption promoting action and to design an effective intranasal drug delivery system for antibiotics. And absorption promoters used were bile salts [sodium cholate (NaC), sodium glycocholate (NaGC)], unsaturated fatty acids [oleic acid (OA), linoleic acid (LA)] and their mixed micelles (NaC-LA). The present study employed the in situ nasal and intestinal perfusion technique in rats. The apparent permeabilities $(P_{app})$ of piperacillin were $0.40{\pm}0.04{\times}10^{-5}cm/sec(mean{\pm}S.E)$ in the jejunum and $1.32{\pm}0.08{\times}10^{-5}\;cm/sec$ in the nasal cavity, which indicated that intrinsic absorptivity of piperacillin was greater in the nasal cavity than in the jejunum. When absorption promoters were used in the rat nasal cavity, the decreasing order of apparent piperacillin permeability $(P_{app},\;10^{-5}\;cm/sec)$, corrected for surface area of absorption, was NaC-LA $(4.62{\pm}0.16)$> NaC $(4.36{\pm}0.32)$>LA$(2.24{\pm}0.26)$ NaGC $(2.17{\pm}0.21)$>OA $(1.53{\pm}0.16)$. The increase in permeability of piperacillin was 3.5-fold in the rat nasal cavity and 1.5-fold in the rat jejunum for formulations containing NaC-LA mixed micelles as compared to those without absorption enhancer. The effect of NaC-LA mixed micellar solutions was synergistic and was greater than that with single adjuvant. The reversibility of nasal mucosal permeability was observed within approximately 2 hr after removal of NaCLA mixed micelles from the nasal cavity. These results suggest that NaC-LA mixed micelles can be used as nasal mucosal absorption promoters of poorly absorbed drugs.
Escherichia coli 의 superoxide 라디칼 유도발현성 유전자의 탐색을 위하여 먼저 superoxide 라디칼에 의하여 발현이 유도되는 프로모터를 탐색하였다. 이를 위햐여, 프로모터 탐색벡터인 pJAC4 를 이용하여 E. coli MG1655 균주로부터 프로모터 library 를 구성하였다. Ampicillin 농도구 배정판법을 이용하여 프로모터 세기가 다른 클론들을 구별하여 프로모터 세기가 약한 것부터 중간정도까지 383개의 클론을 선별하였다. 이들 프로모터 클론들의 superoxide 라디칼 유도발현성을 paraquat 를 첨가한 ampicilin 농도구배평판에서 조사하였다. 이중 3개의 클론이 paraquat 에 의하여 유도됨을 확인하였고, 유도배율은 1.4-4배 정도이었다. 이들 프로모터의 염기서열을 결정한 결과 기종의 database 에 등록되어 있는 E. coli 염기서열들과는 다른 새로운 유전자임을 알았다. 이들 프로모터에 대하여 primer 연장법과 SS1 뉴클리아제 분석을 총하여 전사개시 자리를 결정하였고, paraquat 처리시 mRNA 의 양이 증가함을 관찰하였다. 특히 클론5의 경우는 두개의 전사개시 위치를 가지고 있으며, paraquat 처리시 상위 부분의 전사개시자리가 성택적으로 사용됨을 알 수 있었다. 프로모터 서열을 검색한 결과, RNA 중합효소($E\sigma^{70}$)에 의햐여 인지되는 -10과 -35부위를 가진 클론은 클론 5 뿐이었고, 나머지는 보존된 염기서열을 찾을 수 없었다. 이는 이들 프로모터들이 독특한 부류에 속하는 종류들로서, 새로운 전사조절인자를 요구할 가능성을 시사한다.
The activity of promoter sequences was evaluated in garlic cells using the $\beta$-glucuronidase (GUS) gene as a reporter. Histochemical GUS assay indicated transient GUS activity in leaf, callus and root cells 48 hours after particle bombardment transformation. Quantitative fluorometric assays in extracts of transformed leaves demonstrated that the CsVMV promoter induced the highest level of gene expression, which was, on average, ten fold the level induced by CaMV35S and by the Arabidopsis Act2 promoters and two fold the level expression observed with a construct containing a double CaMV35S plus the untranslated leader sequence from AMV. No activity or very low levels were observed when cells were transformed with plasmids rontaining the typical monocot promoters, Actl, from rice or the Ubi-1, from maize. The green fluorescent protein (GFP) was also tested as a marker gene for garlic transformation. Intense fluorescence was observed in leaf, callus and root cells transformed with a construct containing the gfp gene under control of the CaMV35 Promoter. No fluorescence was detected when the gfp was under control of the Ubi-1 promoter.
GTP cyclohydrolase I (GTPCH) is a key enzyme in the de novo synthesis of tetrahydrobiopterin. Previously, the Drosophila melanogaster GTPCH gene has been shown to be expressed from two different promoters (P1 and P2). In our study, the 5'-flanking DNA regions required for P1 and P2 promoter activities were characterized using transient expression assay. The DNA regions between -98 and +31, and between -73 and +35 are required for efficient P1 and P2 promoter activities, respectively. The regions between -98 and -56 and between -73 and -41 may contain critical elements required for the expression of GTPCH in Drosophila. By aligning the nucleotide sequences in the P1 and P2 promoter regions of the Drosophila melanogaster and Drosophila virilrs GTPCH genes, several conserved elements including palindromic sequences in the regions critical for P1 and P2 promoter activities were identified. Western blot analysis of transgenic flies transformed using P1 or P2 promoter-lacZ fusion plasmids further revealed that P1 promoter expression is restricted to the late pupae and adult developmental stages but that the P2 promoter driven expression of GTPCH is constitutive throughout fly development. In addition, X-gal staining of the embryos and imaginal discs of transgenic flies suggests that the P2 promoter is active from stage 13 of embryo and is generally active in most regions of the imaginal discs at the larval stages.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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