Among poly aromatic hydrocarbons, dioxin and PCBs are the most controversial environmental pollutants in our modern life. These pollutants are known as human carcinogens, and liver is the most sensitive target in animal cancer models. Specific aims of the study were focused on the mechanism of carcinogenesis in hepatocytes and the structure-activity relation among these diverse environmental chemicals. Because key mechanisms of dioxin-induced carcinogenesis in human epithelial cell model are the alteration of signal transduction pathway and PKC isoforms, the alteration of the signal transduction pathways and other factors associated with carcinogenesis were studied. Rat hepatocytes cultured under the sandwich protocols were exposed with the various concentration of dioxins and PCBs, and signal transduction pathway, protein kinase C isoforms, oxidant stress, and apoptotic nuclei were evaluated. Since it is important to understand the structure-activity relation among these chemicals to properly assess the carcinogenic potentials, the study analyzed the parameters associated with carcinogenic processes, based on their structural characteristics. In addition, signal transduction pathways and PKC isoforms involved in inhibition of UV-induced apoptosis were also analyzed to elaborate the tumor promotion mechanism of these chemicals. Induction of apoptosis by UV irradiation was optimal at $60\;J/m^2$ in primary hepatocyte in culture. Compared to non coplanar PCBs such as PCB 114 and PCB 153, coplanar PCBs such as PCB 77 and PCB126 showed a stronger inhibition of apoptosis induced by UV irradiation. Production of reactive oxygen species (ROS) was more stimulated by non-coplanar PCBs than coplanar PCBs with the most potent induction of ROS by chlorinated non-coplanar PCB. As compared to the level of induction by PCB126, non-coplanar PCB153 showed a higher increase of intracellular concentrations. Besides the alteration of intracellular calcium concentration, translocation of PKC from cytosolic fraction to membrane fraction was clearly observed upon the exposure of non-coplanar PCB. Taken together, the present study demonstrated that there is a potent structure-activity relationship among PCB congeners and the mechanism of PAH-induced carcinogenesis is structure-specific. The study suggested that more diverse pathways of PAH-induced carcinogenesis should be taken into account beyond the boundary of Ah receptor dogma to assess the health impact of PAH with more accuracy.
The effects of estrogen and androgens on Vg gene expression were examined in primary hepatocyte culture and livers of the immature male trout. Specific primers of Vg cDNA were designed with already reported Vg gene nucleotide sequences. PCR product was sequenced and verified with Vg cDNA of rainbow trout. Total RNA was extracted from the cultured hepatocytes and livers of steroid-treated rainbow trout and then it was analyzed by reverse transcriptase- polymerase chain reaction (RT-PCR) analysis. The Vg mRNA and Vg protein synthesis were increased in rainbow trout in vivo and in vitro with E$_2$ and methyltestosterone (MT) There were dose and time-related effects of E$_2$ and MT on vitellogesis. Androgens such as progesterone androsterone and testosterone also stimulated Vg mRNA expression in vitro. The results show that androgens as well as E$_2$ can induce expression of Vg mRNA in trout in vivo and in vitro.
To establish whether or not androgens is responsible for the induction of vitellogenin(Vg) synthesis and secretion, primary hepatocytes prepared from immature eels were used. The results are follows: 1. Eel hepatocytes were prepared using a collagenase perfusion technique. The isolated cells attached efficiently to fibronectin-coated dishes and subsequently formed monolayers in serum-free medium. These cultures maintained in medium for 10 days with minimal cell loss. 2. Estradiol-17$\beta$(E2) alone was insufficient to induce Vg synthesis. The combination of E2 with methyltestosterone(MT) markedly stimulated Vg synthesis. High vg production occurred in MT concentration from 10-6~10-5M in the presence of E2 (10-6M). Testosterone and androsterone were also effective, but progesterone was not effective in inducing Vg synthesis. Neither MT alone nor testosterone and androsterone alone had any effect on Vg synthesis. 3. E2-primed hepatocytes showed Vg synthesis in both media with and without hormones 1 day after culture. In the cultures with the vehicle, MT, or progesterone, the rate of synthesis seemed to decrease with time. But the combination of E2 and MT showed an intense increase in Vg synthesis. Hepatocytes isolated from E2-primed eels also required androgens for continuating of Vg synthesis. 4. These results demonstrate that androgens act together with E2 in synthesis and secretion of eel Vg.
Effects of A23187 on estradiol$-17^{\beta}$-induced vitellogenin (VTG) induction were electrophore-tically examined in primary hepatocyte cultures in rainbow trout. hepatocytes were predultured for 2 days and then estradiol-$17^{\beta}$(E2, $2{\times}10^{-6}$M) and calcium ionophore (A23187, $10^{-7)$~$10^{-5}$ M) were added to the incubation medium. The hepatocytes were cultured for 7 more days. In addition, effects of A23187 on $E_2$-primed VTG production were investigated for 7 days. The addition of A23187 ($10^{-7)$~$10^{-5}$M) to the incubation medium specifically reduced VTG production by hepatocytes in a concentration-dependent way. The addition of A23187 significantly reduced the rate of $E_2$-primed VTG production to 18% of the control (E2 only) on Day 7. However, $E_2$-primed VTG production was reduced to 47% of the control by withdrawal of $E_2$ from the incubation medium. Therefore, these results suggest that intracellualr sequestered calcium could regulate VTG synthesis at the translational and/or post-translational stage.
Polyurethanes containing z-Iysine segments in the main chain (PULL) were synthesized from 4,4'-diphe-nylmethyl diisocyanate, poly(tetramethylene glycol), and z-Iysine oligomer as a chain extender. The PULL film was treated first with a $10\%$ HBr-acetic acid solution and subsequently with a saturated sodium bicarbonate aqueous solution to produce a primary amine group on the surface (PULL-N). Lactobionic acid (LA)-immobilized PULL (PULL-L) was prepared by the coupling reaction of the PULL surface amine groups and the LA carboxylic acid groups. The surface-modified PULLs were then characterized by attenuated total reflection-Fourier transform infra-red spectroscopy, electron spectroscopy for chemical analysis, atomic force microscopy, and contact angle goniometry. In the hepatocytes adhesion experiment, the cells poorly adhered to the PULL surface, although they adhered moderately well to the PULL-N surface. On the other hand, the cells adhered well to the PULL-L surface, suggesting the good affinity of the surface $\beta$-galactose moieties for hepatocytes. When hepatocytes were cultured in the presence of epidermal growth factor for 48 h, the cells rapidly aggregated on the PULL-L surface, whereas they aggregated only slowly on the other surfaces. The PULL prepared in this study has the potential to be used as a coating material for the enhancement of hepatocyte adhesion.
Effects of sera from several fish species and insulin on the development of cultured Silurus asotus hepatocytes were investigated. Hepatocytes with high viability (95%) were obtained from the livers of male catfish by two step collagenase perfusion. Isolated hepatocytes, initially showed a typical round-shape, firmly attached to the culture dish within 24 h. In the presence of catfish serum, hepatocytes attached each other, spread well on the dish and developed into monolayer after 3-4 days of incubation. Cells within the established monolayer became polygonal in shape and their nuclei and boundaries being clearly visible under the microscope. In contrast, when incubated in FBS-supplemented or serum-free medium, cells managed to form small clusters, each made of 2-10 cells. Cells in FBS-supplemented medium further developed into larger clusters. However, these clusters failed to develope into monolayer. In addition, when insulin was deprived from culture medium, formation of monolayer also failed. From these data, it can be concluded that the presence of both catfish serum and insulin is necessary for the formation of monolayer of catfish hepatocytes and the functional role of fish serum may differ from that of insulin and can not be displaced by FBS-supplementation.
The purpose of this study was to clarify the effect of silica on cytosolic free calcium mobilization and cell injury in primary cultured rat hepatocytes. Cytosolic free calcium concentration ([Ca$^{2+}$]) was measured employing calcium sensitive fluorescent dye, Fura-2 / AM, and cell injury was evaluated by determination of cellular ATP contents. Silica increased [Ca$^{2+}$], in a concentration-dependent manner in hepatocytes (10$^{-5}$ ~10$^{-2}$ M). Silica caused a biphasic increase in [Ca$^{2+}$], which was composed of an initial rapid rise and following sustained phase. $Ca^{2+}$ removal from the medium resulted in abolishment of initial and sustained phase of silica (10$^{-2}$ M)-induced [Ca$^{2+}$], in hepatocytes. The pretreatment with nifedipine (1 $\mu$M) attenuated silica-induced [Ca$^{2+}$], increases. Silica decreased cellular ATP contents in a dose-dependent manner. This silica-induced cell injury was attenuated by the pretreatment with EGTA (100 $\mu$M) and nifedipine (1 $\mu$M). This study suggests that the elevation of [Ca$^{2+}$], caused by silica may be due mainly to influx through a plasma membrane $Ca^{2+}$ channel and hepatotoxicity by silica relate with alteration of calcium homeostasis.ium homeostasis.
Fibroblast growth factors (FGFs) are known to induce multiple functions in early development, including mesoderm formation, gastrulation movement and antero-posterior patterning. The induction of mesoderm from Xenopus presumptive ectoderm and the combination effect on inducing organs of bFGF(basic FGF) and HGF (Hepatocyte Growth Factor) were studied. Explants were cultured in the combined solution for 3 days to normal embryo arrive at St. 43. These effects on combined dose were examined by histological experiment and by immunohistochemical method. The concentrations of growth factors were tested in 0, 0.5, 1, 10 and also tested in 50 ng/ml of bFGF, and 0, 1, 10, 50 and 100ng/ml of HGF respectively. The synergistic effects were seen in the combined-dose of bFGF and HGF rather than in single dose. Various organs were differentiated and highest inducing effects were seen at the combined concentration of 1 ng/ml of bFGF and 10ng/ml of HGF, and at the concentration 10ng/ml of bFGF and 1 ng/ml of HGF. The bFGF induces various organs from cultured animal cap explants and the effects are time and dose-dependent. HGF is also a potent mitogen for renal tubular cells and for mature hepatocytes in primary culture. Eyes were developed in high percentage at the combined concentration of 1 and 10ng/ml of bFGF, and 1 and 10 ng/ml of HGF. From the induced eye and normal embryonic eye, RPE65 was commonly detected by monoclonal antibodies 40All and 25F5 and the localization of RPE65 was seen by AP reaction.
Effect of 2,4-Dichlorophenoxy acetic acid (2,4-D) on vitellogenin (VTG) production and estrogen ($E_2$)-estrogen receptor (ER) binding affinity were examined in primary hepatocyte cultures of rainbow trout, Oncorhynchus mykiss. Hepatocytes were pre-cultured for 2 days; subsequently, $E_2$( 2$\times$$10^{-6}$/ M) and 2,4-D ($10^{-9}~10^{-6}/M$) were simultaneously added to the incubation medium. They were cultured for more than 5 days. VTG and $E_2$-ER binding affinities were analyzed by SDS-PAGE and ELISA, respectively. 2,4-D concentration used had no appreciable effect on the morphology, viability, and DNA content of hepatocytes in culture. It had also no effect on VTG production. However, it interfered with $E_2$-ER binding affinity, which was reduced with increasing concentration of 2,4-D. The affinity was inhibited by 25 and 30% at $10^{-7}$ M and $10^{-6}$ M of 2,4-D, respectively. This result suggested that although 2,4-D had no effect on VTG production, it acted as reno-estrogenic contaminant in ER.
Hepatocytes of Anguilla japonica have been prepared using a collagenase perfusion technique. The isolated cells attached efficiently to fibronectin-coated culture dishes and subsequently formed monolayers in serum-free medium. These cultures maintained in appropriate medium at least for 10 days with minimal cell loss. The effects of estradiol and pituitary hormones on vitellogenin (Vg) synthesis were examined in primary hepatocyte culture of the immature eels. In fish, as in other oviparous vertebrates, estrogen is a major inducer of Vg synthesis. However, $estradiol-17\beta(E_2)$ alone was insufficient to induce Vg synthesis in cultures of eel hepatocytes. Combination of $E_2$ with growth hormone (GH) and/or prolactin (PRL) markedly stimulated Vg synthesis. Even in cultures exposed to $E_2$ or precultured without hormones for 8 days, $E_2$ alone could not fully induce Vg synthesis. The synthesis of Vg was dramatically increased when hepatocytes were cultured in medium supplemented with $E_{2}+GH+PRL$ for 6 days. At this point, even though GH and/or PRL were eliminated from the medium, Vg synthesis was not influenced by these factors during culture of further 3 days. These results indicate that pituitary hormones, in particular GH and PRL, play important roles in the regulation of Vg synthesis in primary cultures of eel hepatocytes.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.