The principal objective of this study was to determine the optimal liquid culture conditions in shake flasks for maximal sporulation of Beauveria bassiana. The optimal initial pH for the spore production of B. bassiana using Potato Dextrose Broth was 5.2. The screening in shake flasks of carbon and nitrogen sources resulted in the identification of an optimal medium based on 3% sucrose and 1% casamino acid, with a C : N ratio of 22 : 4. Using this medium, a production level of $5.65{\times}10^7$ spores per ml was obtained after 5 days of culture. Using 3% corn meal, 2% corn steep powder, and 2% rice bran, the maximum spore concentration of $8.54{\times}10^8$/ml was achieved 8 days after inoculation at $25^{\circ}C$ in a rotary shaking incubator operated at 200 rpm. This represents a yield gain of approximately 2.89 times that of pre-optimization.
느타리버섯의 생산성 향상을 위하여 액체종균 배양액의 조건을 설정하고자 하였다. Potato dextrose 배양액에서 균체 생장을 위한 최적 pH는 6이었다. 대두박 0.3%와 설탕 및 포도당 함량을 달리한 15가지의 배양액('A'~'O')은 $22^{\circ}C$ 및 pH 6의 조건에서 14일동안 배양되었을 때 설탕과 포도당이 각각 함유된 배양액에서 흡광도는 증가되었다. 특히 5~20%의 포도당만 함유된 배양액('C', 'D', E' 및 'F')은 배양기간의 경과에 따라 흡광도가 증가되는 경향이었다. 배양액의 건조 균체량은 20%이하의 설탕이나 포도당이 단독으로 함유된 배양액에서 감소되었으나, 30%의 설탕('A') 또는 포도당 ('B')이 각각 함유된 배양액에서 건조 균체량은 증가되었다. 1100 mL의 톱밥배지 병재배 시 액체종균의 최적 접종량은 15~20 mL이었다. 고체종균 및 액체종균으로 느타리버섯을 재배하여 조직감을 비교한 결과 고체종균에 비해 액체종균으로 재배된 버섯에서 우수한 경향이었다.
Phyllosticta melochiae, an endophytic fungus isolated from the healthy leaves of Melochia corchorifolia, was screened for the production of an anticancer drug, taxol on modified liquid medium and potato dextrose broth medium in culture for the first time. The presence of taxol was confirmed by spectroscopic and chromatographic methods of analysis. The amount of taxol produced by this fungus was quantified by high performance liquid chromatography. The maximum amount of fungal taxol production was recorded as $274{\mu}g/L$. The production rate was increased to $5.5{\times}1,000$ fold than that found in the culture broth of earlier reported fungus, Taxomyces andreanae. The fungal taxol extracted also showed a strong cytotoxic activity in the in vitro culture of tested human cancer cells by apoptotic assay. The results designate that the fungal endophyte, P. melochiae is an excellent candidate for an alternate source of taxol supply and can serve as a potential species for genetic engineering to enhance the production of taxol to a higher level.
본 연구에서는 표고 교잡균주들의 생화학적 특성을 이해하기 위한 하나의 시도로서 교잡균주간의 laccase 효소의 활성을 비교하는 빠르고 간편한 방법을 모색하고자 균사체 배양 배지의 성상과 염색물질이 laccase 활성 검출에 미치는 영향을 조사 비교하였다. 고체배지와 액체배지 모두에서 발색시약이 Remazol Brilliant Blue R(RBBR)일 경우는 potato dextrose 성분 보다 malt extract 성분 배지를 사용하는 것이 표고버섯균 균사가 분비하는 세포외 laccase 활성 검출이 용이하였다. Guaiacol을 발색시약으로 사용하는 경우는 potato dextrose 성분과 malt extract 성분 배지 모두 세포외 laccase 활성 검출이 용이하였다. 2ml microfuge tube를 이용한 액체 배양 방법은 RBBR와 Guaiacol 모두 malt extract 성분배지에서 3일만에 표고 교잡균주간의 세포외 laccase 활성 검출과 정량적 비교를 가능케 하였다.
The medicinal fungus Phellinus linteus, in the family Hymenochaetaceae, has been used as a traditional medicine for the treatment of various diseases. In this study, the chemical constituents of the culture broth of P. linteus were investigated. P. linteus was cultured in potato dextrose broth medium, and the culture broth was extracted with ethyl acetate. The ethyl acetate-soluble portion was concentrated and subjected to ODS column chromatography, followed by Sephadex LH-20 column chromatography. Six compounds (1~6) were purified by preparative reversed-phase high-performance liquid chromatography. Spectroscopic methods identified their structures as caffeic acid (1), inotilone (2), 4-(3,4-dihydroxyphenyl)-3-buten-2-one (3), phellilane H (4), (2E,4E)-(+)-4'-hydroxy-${\gamma}$-ionylideneacetic acid (5), and (2E,4E)-${\gamma}$-ionylideneacetic acid (6). Compounds 1, 2, and 3 exhibited potent dose-dependent antioxidant activity.
Mycelium of Ophiostoma quercus albino strain cultured in liquid culture media was harvested, lyophilized, and stored for examining biocontrol efficacy against wood discoloration by staining fungi in the laboratory and field conditions. Dry weight of mycelium grown in brown sugar yeast extract broth(BYB) showed 3.8 times higher than that grown in potato dextrose broth(PDB). The optimum culture period in BYB was 4 weeks. In vitality test of the albino strain, the lyophilized mycelium stored in liquid nitrogen($-196^{\circ}C$) or in a refrigerator($4^{\circ}C$) kept the vitality until 13 months after storage; however, the mycelium stored at room temperature lost the vitality completely after 13 months. The mycelium stored in liquid nitrogen or in a refrigerator protected wood chips from the discoloration by pretreating mycelial suspension on pine wood chips. The mycelium stored at room temperature for 7 months also showed complete protection. These results suggest that the lyophilized mycelium have a biocontrol efficacy only if it keeps the least vitality. In the field conditions, both albino strain and $Woodguard^{(R)}$(commercial chemical protectant) showed significant differences(p=0.05) in discoloration rate as compared to the non-treated control when these were treated on the wood logs of Pinus rigida. The albino strain showed better protection than $Woodguard^{(R)}$. Isolation frequency of blue stain fungi from the chips of wood logs treated with the albino strain was 0% at three months after treatment, while that treated with $Woodguard^{(R)}$ was 76.7%. In another experiment, pre-treatment of mycelial suspension on the cut surface of wood logs also showed significant protection from wood discoloration. Spraying of both albino strain on the cut surface and insecticides on the bark also showed relatively good control effects as compared to insecticide alone on the bark or nontreated control.
This study was performed to investigate the possible effect of garlic produced in Korea on the inhibition/reduction of growth of A. parasiticus, a toxigenic strain. The effect was studied using different concentrations of freeze-dried garlic in potato-dextrose agar (PDA) and/or in yeast-extract sucrose (YES) broth at $25^{\circ}C$ for 15 days. While inhibition of the fungal growth due to increasing the concentration of garlic was observed, the more remarkable effect was observed on the ninth day. Reduction of fungal diameter as a result of addition of garlic on PDA was observed to range between 3.4% to 20.1 % while reduction of mycelial weight in YES broth ranged from 9.9% to 30.5%. The 0.5% and 1.0% concentrations of garlic significantly reduced fungal diameter in PDA on the 9th day, while 0.1 %, 0.5%, and 1.0% concentrations of garlic significantly reduced the mycelial weight in YES broth (p<0.05). Dose-response relationships were observed between the concentration of garlic and inhibition of growth both in solid culture and in liquid culture. This study indicates that garlic could be an effective inhibitor at a human consumption level of the growth of A. parasiticus. More research is needed to study the inhibitory effects of the main active component of garlic.
Lactobacillus casei KC-324 was tested for its ability to inhibit aflatoxin production and mycelial growth of Aspergillus flavus ATCC 15517 in liquid culture. flatoxin $B_{1}$ biosynthesis and mycelial growth were inhibited in both simultaneous culture and individual antagonism assays, suggesting that the inhibitory activity was due to extracellular metabolites. produced in cell-free supernatant fluids of the cultured broth of L. casei KC-324. In cell-free supernatant fluids of all media tested, deMan, Rogosa and Sharpe broth, potato dextrose broth, and Czapek-Dox broth+1% yeast extract showed higher antiaflatoxigenic activity. In these case, fungal growths, however, was not affected as measured by mycelial dry weight. The antiaflatoxigenic metabolites from L. casei KC-324 were produced over wide range of temperatures between $25^{\circ}C$ and $37^{\circ}C$. However, these metabolites were not thermostable since the inhibitory activity of the supernatant was inactivated within 30 minutes at $100^{\circ}C$ and $121^{\circ}C$. The inhibitory activity was not influenced by changing pH of supernatant between 4 and 10. However, the antiaflatoxigenic activity was slightly reduced at pH 10.
고구마 바이러스 무병묘의 기내급속증식을 위한 적정 생장 조절물질 및 sucrose 농도, 최소생장 기내보존(15℃)에 미치는 광의 영향과 생존율 및 기내생장 특성 등을 조사하였다. 고구마 무병묘의 마디배양은 0.2 mg·L-1 BA 첨가배지에서 줄기신장, 줄기직경, 잎수, 뿌리수, 생체중 및 건물중 등이 가장 양호하였다. 배양부위 및 배지물리성에 따른 적정 sucrose 농도는 마디배양은 5% sucrose를 첨가한 고체배지에서, 정단배양은 3% sucrose를 첨가한 액체배지에서 줄기두께, 잎수, 뿌리수, 뿌리길이, 생체중 및 건물중 등의 생육에 가장 효과적이었다. 15℃ 저온항온기에서 고구마 무병묘의 최소생장 기내보존은 암상태에서는 3개월 내에 모두 고사하였으나, 적색:청색(7:3) 혼합 LED (150±5 μmol·m-2·s-1 PPFD)에서는 5개월까지 100% 생존하였다. 따라서 고구마 무병묘의 최소생장 기내보존에는 광이 필요하며, 샬레에 밀식(10 개체/샬레)할 경우, 좁은 공간에서 대량보존이 가능하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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