Lee, Bong Choon;Cho, Sang-Yun;Bae, Ju Young;Kim, Sang Min;Shin, Dong Bum;Kim, Sun Lim
Research in Plant Disease
/
v.22
no.1
/
pp.32-37
/
2016
In this work, major outer capsid protein (P10) encoded by genome segment S10 of Rice black-streaked dwarf virus (RBSDV) was expressed in Escherichia coli. Genomic dsRNA was extracted from RBSDV-miryang isolate infected rice plants. Based on the sequence of S10 (RBSDV-miryang, GenBank JX994211), a pair of S10 specific primers were designed and used to amplify the fragment encoding the N-part of P10. We amplified the partial gene (S10 1-834 nt) of RBSDV P10 (1-278 aa) by RT-PCR. Amplified RBSDV S10 (1-834 nt) was cloned into the expression vector pET32a (+). Recombinant RBSDV S10 (1-834 nt) was expressed in E. coli BL21(DE3) and purified by nickel-nitrilotriacetic acid (Ni-NTA) affinity column. We successfully obtained P10 partial protein of RBSDV and the purified protein was used to immunize rabbits. The resulting polyclonal antiserum specifically recognized RBSDV from infected plant in both Western blotting and enzyme-linked immunosorbent assay. In this study, we provide purified RBSDV P10 (1-278 aa), which would be good material for the serological study of RBSDV-miryang isolates.
Piliated Lactobacillus rhamnosus (pLR) strains possess higher adherent capacity than non-piliated strains. The objective of this study was to isolate and characterize probiotic pLR strains in human fecal samples. To this end, mouse polyclonal antiserum (anti-SpaA) against the recombinant pilus protein (SpaA) of L. rhamnosus strain GG (LGG) was prepared and tested for its reactivity and specificity. With the anti-SpaA, a method combining the de Man, Rogosa, and Sharpe (MRS) agar plating separation and colony immunoblotting (CIB) was developed to isolate pLR from 124 human fecal samples. The genetic and phenotypic characteristics of the resultant pLR isolates were compared by randomly amplified polymorphic DNA (RAPD) fingerprinting, and examination of adhesion to Caco-2 cells, hydrophobicity, autoaggregation, and in vitro gastrointestinal tolerance. Anti-SpaA specifically reacted with three pLR strains of 25 test strains, as assessed by western blotting, immunofluorescence flow cytometry, and immunoelectron microscopy (IEM) assays. The optimized MRS agar separation plus anti-SpaA-based CIB procedure could quantitatively detect $2.5{\times}10^3CFU/ml$ of pLR colonies spiked in $10^6CFU/ml$ of background bacteria. Eight pLR strains were identified in 124 human fecal samples, and were confirmed by 16S RNA gene sequencing and IEM identification. RAPD fingerprinting of the pLR strains revealed seven different patterns, of which only two isolates from infants showed the same RAPD profiles with LGG. Strain PLR06 was obtained with high adhesion and autoaggregation activities, hydrophobicity, and gastrointestinal tolerance. Anti-SpaA-based CIB is a rapid and inexpensive method for the preliminary screening of novel adherent L. rhamnosus strains for commercial purposes.
Frost injury of crops is closely related to the epiphytic population dynamics of ice nucleation-active (INA) bacteria, and the injury can be reduced by decreasing the INA bacterial population. In order to predict the epiphytic population of INA bacteria on crops, a rapid and accurate detection method has to be developed. In the previous report, we produced some antibodies against INA proteins purified from the outer membrane of INA bacteria. However it was difficult to produce the antibodies because the purification procedures of the INA proteins were complicated, and the final yield was too low. We designed a specific peptide from the N-terminal region of INA protein by computer analysis and synthesized the peptide in vitro in this experiment. The peptide sequence was Asp-Ser-Por-Leu-Ser-Leu-His-Ala-Asp, that is corresponding to the highly conserved region in several INA proteins, with predicted beta turn, coiling, and hydrophilic region. A polyclonal anti-INA peptide antiserum produced specifically recognized INA bacteria as few as 10 colony-forming units (CFU) in the ELISA reactions and did not respond to other non-INA bacteria. Serological specificity of the anti-INA peptide antiserum will facilitate the forecasting of the INA bacterial population dynamics on crops.
US3 gene is a member of the human cytomegalovirus (HCMV) immediate early gene. Although the precise functions of the US3 gene in HCMV replication and pathogenesis are not known, it has been reported to play a role in inhibiting major histocompatibility class I antigen presentation. For further knowledge of US3 gene expression, rabbit polyclonal antiserum of the US3 gene product was used for indirect immunofluorescence assay. In permissive human foreskin fibroblast (HFF) cells, US3 gene expression was detectable as crescent or half-moon shape in the perinuclear region at immediate early times after virus infection. HFF cells infected with mutant HCMV lacking US3 open reading frames were negative for US3 immunofluorescence assay. Double immunofluorescence assay using monoclonal antibody to gamma adaptin (specific for the Golgi complex) and rabbit anti-US3 antiserum revealed that US3 gene product could be localized to the Golgi complex. At later time after HCMV infection, US3 gene products were detected as globular aggregates in the cytosol. These aggregates were positive for gamma adaptin and stained with preimmune serum, suggesting a nonspecific reaction to the Golgi complex. Northern blot analysis revealed that transcription of US3 was observed only during immediate early times after virus infection (until 6 h postinfection). Therefore US3 gene expression appears to be confined to immediate early time and its gene products are localized to the Golgi complex as crescent shaped forms in the perinuclear cytoplasm.
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
/
v.2
no.2
/
pp.161-166
/
2001
The storage proteins of the mulberry longicorn beetle, Apriona germari Hope, were purified and characterized. Three kinds of storage protein (SP1, SP2 and Sp3) were purified from the last instar larval hemolymph of A. germari by the FPLC techniques, anion exchange chromatography and gel permeation chromatography. The SP1, SP2 and SP3 have a native molecular weight of 480, 440 and 420 kDa, respectively. In the SDS-polyacrylamide gel electrophoresis analysis, these storage proteins are composed of a single protein subunit with molecular weight of 90, 85 and 80 kDa, respectively. This result showed that the storage proteins are hexameric protein. The SP1 and SP2 were stained with Schiffs reagent, but SP3 was not stained. It can be assumed that SP1 and SP2 are glycoprotein. Western blot analyses using the each of polyclonal antiserum against purified SP1, SP2 and SP3 showed that the three antibodies reacted with the each of SP bands, respectively. Also, antibodies against SP1 and SP3 cross-reacted with the SP3 and SP1, respectively. However, SP2 was not cross-reacted with these two antibodies. Also, antiserum against SP2 did not cross-reacted with the SP1 and SP3.
Kim, Seong-Ryul;Jin, Byung-Rae;Yang, Won-Jin;Kim, Jong-Gill;Kim, Keun-Young;Lee, Sang-Mong;Moon, Byung-Ju;Sohn, Hung-Dae
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
/
v.2
no.2
/
pp.167-172
/
2001
The vitellin of firefly, Pyrocoelia rufa, is composed of three polypeptides, designated Vn1 (175 kDa), Vn2 (160 kDa) and Vn3 (45 kDa) in SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. Three subunits of vitellin were presented in the female adult hemolymph, ovary and egg extracts, but not observed in the male. This vitellin was purified from the eggs of P. rufa by the FPLC techniques, anion exchange chromatography and gel permeation chromatography. In nature, vitellin of P. rufa has molecular weight of 400 kDa. Western blot analysis using polyclonal antiserum against purified vitellin showed that the antiserum was reacted with the three polypeptides, Vnl, Vn2 and Vn3 from the female adult hemolymph, ovary and egg extracts. Amino acid residues at N-terminus of three subunits were sequenced. The N-terminal sequences of large subunits, Vnl and Vn2, were similar to each other, But, the N-terminal sequences of small subunits Vn3, did not have any signnificant homology with large subunits.
Md. Samiul Haque;Mohammad Saiful Islam;Myung-Jo You
Parasites, Hosts and Diseases
/
v.61
no.4
/
pp.439-448
/
2023
Tick infestation causes a significant threat to human and animal health, requiring effective immunological control methods. This study aimed to investigate the potential of recombinant Haemaphysalis longicornis enolase protein for tick vaccine development. The exact mechanism of the recently identified enolase protein from the H. longicornis Jeju strain remains poorly understood. Enolase plays a crucial role in glycolysis, the metabolic process that converts glucose into energy, and is essential for the motility, adhesion, invasion, growth, and differentiation of ticks. In this study, mice were immunized with recombinant enolase, and polyclonal antibodies were generated. Western blot analysis confirmed the specific recognition of enolase by the antiserum. The effects of immunization on tick feeding and attachment were assessed. Adult ticks attached to the recombinant enolase-immunized mice demonstrated longer attachment time, increased bloodsucking abilities, and lower engorgement weight than the controls. The nymphs and larvae had a reduced attachment rate and low engorgement rate compared to the controls. Mice immunized with recombinant enolase expressed in Escherichia coli displayed 90% efficacy in preventing tick infestation. The glycolytic nature of enolase and its involvement in crucial physiological processes makes it an attractive target for disrupting tick survival and disease transmission. Polyclonal antibodies recognize enolase and significantly reduce attachment rates, tick feeding, and engorgement. Our findings indicate that recombinant enolase may be a valuable vaccine candidate for H. longicornis infection in experimental murine model.
Polyclonal antiserum R101 against aflatoxin $B_1$ ($AFB_1$) was raised in New Zealand white rabbits after injection of bovine serum albumin-$AFB_1$ conjugate. Competitive ELISA (enzyme linked immuno-sorbent assay) demonstrated that antiserum R101 has the highest binding for $AFB_1$ (50% inhibition at 170 fmol) and aflatoxicol II (50% inhibition at 112 fmol). It also reacts with other aflatoxins such as $AFB_2$, $AFG_1$, $AFG_2$, and aflatoxin metabolites ($AFM_1$, $AFM_2$, $AFP_1$, and $AFQ_1$), but it does not cross-react with $AFG_2a$. Using this antiserum, aflatoxins were quantitated in 100 urine samples of undergraduate students at the College of Pharmacy, Sung Kyun Kwan University, Republic of Korea. By ELISA, $AFB_1$ and its metabolites were detected in human urine samples (N=100, male=89, female=11, ages=20~31 yrs) with a range of 1.4~200.6 ng/kg/day (mean$\pm$SD=$18.11{\pm}33.01\;ng\;AFB_1/kg/day$ in males, $3.82{\pm}2.65\;ng/kg/day$ in females). Assuming that urinary excretion is about 7.6% of $AFB_1$ intake (Groopman et al., 1992), we estimated that Koreans were daily exposed to a total dietary $AFB_1$ of $240.20{\pm}438.67\;ng/kg/day$ in males and $50.35{\pm}29.88\;ng/kg/day$ in females, respectively. When the human monitoring data was applied to a linear regression model of Y=21.67X-10.04 {Y=liver cancer incidence per 100,000, X=Log $AFB_1$ intake (ng/kg/day), r=0.99} developed from previously reported epidemiological data, calculated liver cancer incidences attributed to $AFB_1$ exposure were 41.56/100,000 in males and 26.84/100,000 in females. The incidences were similarly correlated with liver cancer mortality rates of 43.43/100,000 in males and 11.23/100,000 in females in Korea. These results suggest that aflatoxin exposure may be an important risk factor for the high incidence of liver cancer in Korea.
Proceedings of the Korean Society of Plant Pathology Conference
/
1995.06b
/
pp.27-53
/
1995
In plant pathology there is an increasing necessity for improved cytological techniques as basis for the localization of cellular substances within the dynamic fine structure of the host-(plant)-pathogen-interaction. Low temperature (LT) preparation techniques (shock freezing, freeze substitution, LT embedding) are now successfully applied in plant pathology. They are regarded as important tools to stabilize the dynamic plant-pathogen-interaction as it exists under physiological conditions. - The main advantage of LT techniques versus conventional chemical fixation is seen in the maintenance of the hydration shell of molecules and macromolecular structures. This results in an improved fine structural preservation and in a superior retention of the antigenicity of proteins. - A well defined ultrastructure of small, fungal organisms and large biological samples such as plant material and as well as the plant-pathogen (fungus) infection sites are presented. The mesophyll tissue of Arabidopsis thaliana is characterized by homogeneously structured cytoplasm closely attached to the cell wall. From analyses of the compatible interaction between Erysiphe graminis f. sp. hordei on barley (Hordeum vulgare), various steps in the infection sequence can be identified. Infection sites of powdery mildew on primary leaves of barley are analysed with regard to the fine structural preservation of the haustoria. The presentation s focussed on the ultrastructure of the extrahaustorial matrix and the extrahaustorial membrane. - The integration of improved cellular preservation with a molecular analysis of the infected host cell is achieved by the application of secondary probing techniques, i.e. immunocytochemistry. Recent data on the characterization of freeze substituted powdery mildew and urst infected plant tissue by immunogold methodology are described with special emphasis on the localization of THRGP-like (threonine-hydrxyproline-rich glycoprotein) epitopes. Infection sites of powdery mildew on barley, stem rust as well as leaf rust (Puccinia recondita) on primary leaves of wheat were probed with a polyclonal antiserum to maize THRGP. Cross-reactivity with the anti-THRGP antiserum was observed over the extrahaustorial matrix of the both compatible and incompatible plant-pathogen interactions. The highly localized accumulation of THRGP-like epitopes at the extrahaustorial host-pathogen interface suggests the involvement of structural, interfacial proteins during the infection of monocotyledonous plants by obligate, biotrophic fungi.
Studies have demonstrated that PE_PGRS45 is constitutively expressed under various environmental conditions (such as nutrient depletion, hypoxia, and low pH) of the in vitro growth conditions examined, indicating that PE_PGRS45 protein is critical to the basic functions of Mycobacterium tuberculosis. However, there are few reports about the biochemical function and pathogenic mechanism of PE_PGRS45 protein. The fact that this M. tuberculosis gene is not easily expressed in E. coli may be mainly due to the high content of G+C and the use of unique codons. Fusion tags are indispensable tools used to improve the soluble expression of recombinant proteins and accelerate the characterization of protein structure and function. In the present study, His6, Trx, and His6-MBP were used as fusion tags, but only MBP-PE_PGRS45 was expressed solubly. The purification using His6-MBP tag-specific binding to the Ni column was easy to separate after the tag cleavage. We used the purified PE_PGRS45 to immunize New Zealand rabbits and obtained anti-PE_PGRS45 serum. We found that the titer of polyclonal antibodies against PE_PGR45 was higher than 1:256000. The result shows that purified PE_PGRS45 can induce New Zealand rabbits to produce high-titer antibodies. In conclusion, the recombinant protein PE_PGRS45 was successfully expressed in E. coli and specific antiserum was prepared, which will be followed by further evaluation of these specific antigens to develop highly sensitive and specific diagnostic tests for tuberculosis.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.