• 제목/요약/키워드: polyacrylamide gel electrophoresis

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Purification and characterization of hepatic lipase from Todarodes pacificus

  • Park, Jong-Won;Cho, Soon-Yeong;Choi, Suk-Jung
    • BMB Reports
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    • 제41권3호
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    • pp.254-258
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    • 2008
  • Lipase was purified from squid (Todarodes pacificus) liver in an attempt to investigate the possibility of applying the enzyme for biotechnological applications. Crude extract of squid liver was initially fractionated by the batch type ion exchange chromatography. The fraction containing lipase activity was further purified with an octyl-Sepharose column. Finally, lipase was purified by eluting active protein from a non-dissociating polyacrylamide gel after zymographic analysis. Molecular weight of the purified enzyme was determined to be 27 kDa by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. The enzyme showed the highest activity at a temperature range of $35-40^{\circ}C$ and at pH 8.0. The activity was almost completely inhibited at 1 mM concentration of $Hg^{2+}$ or $Cu^{2+}$ ion. Partial amino acid sequence of the enzyme was also determined.

An Active Monomeric Form of Bovine Milk Xanthine Oxidase

  • Lee, Chu-Hee;Nam, Doo-Hyun;Huh, Keun
    • Archives of Pharmacal Research
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    • 제17권5호
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    • pp.318-322
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    • 1994
  • Upon gel filtration, the commercial bovine milk xanthine oxidase preparation was fractionated into two preparations showing enzyme activity. Native polyacrylamide gel electrophoresis showed that one was in a dimeric form and the other was a monomer having molecular weight of 150 kDa. It was also found that this commercial enzyme existed mostly in an active monomeric form without loss of enzyme activity. The rabbit antisera produced against two enzyme preparations cross-reacted well each other. In SDS-polyacrylamide gtel electro-phoresis, however, both enzyme preparations yielded two smaller protein bands below 150 kDa, which appeared to bind with both antisera with high affinity but not to retain enzyme activity. It implies that bovine milk xanthine oxidase can lose its activity when monomeric subunit is further degraded.

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가잠의 연화병 바이러스에 관한 연구 II. 연화병 바이러스 Polypeptide의 성상 (Studies on Flacherie and Ina-flacherie Viruses of the Silkworm, Bambyx mori II. Some Properties of Polypeptide of Flacherie Virus)

  • 강석권;김근영
    • 한국잠사곤충학회지
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    • 제21권2호
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    • pp.7-10
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    • 1979
  • 1. 연화병 바이러스의 단백질을 SDS-polyacrylamide gel 전기영동으로 분석한 결과 분자량 37,500(FP I), 30,500(FP II) 및 26,500(FP III)에 상당하는 3종류의 polypeptide가 얻어졌으며, 이들의 비율은 FP I이 6.6%, FPII가 25.0% 및 FP III가 68.4%였다. 2. 연화병 바이러스의 단백질을 amino산 분석을 행한 결과, 17종의 amino산이 분리되었으며, 이 amino산 조성은 타곤충 바이러스의 amino산 조성과 유사하였다.

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한국산 애응애과 응애의 분류 및 동위효소에 관한 연구 (A Study on the Taxonomy and lsozymes of False Spider Mites (Acarina: Temwpalpidae) from Korea)

  • 이정상
    • 한국동물학회지
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    • 제31권2호
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    • pp.147-155
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    • 1988
  • 1986년 12월부터 87년 11월까지 채집된 애응애과 응애를 분류학적으로 정리한 바 Brevipalpus속의 B.californicus와 B.ovovatus 2종과 다음의 한국4미기록종을 얻었다: Aegyptobia nothus Pritchard and Baker,Pentomerismus taxi Hailer, P. oregonensis McGregor,Brevipalpus lewisi McGregor. 따라서, 한국산 애응애과 응애는 Tenuipalpus속의 T.zhizhilashiliae(감나무애응애)를 포함하여 4속 7종이 보고되는 셈이다. 또한 P. oregonensis,B.californicus,B.ovovatus 및 B.lewisi에 대하여 polyacrylamide slab gel electrophoresis로 esterase와 alkaline phosphatase pattern을 조사한 바 esterase는 band수와 이동도에서 종과 속간에 뚜렷한 차이를 보였다.

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Affinity Chromatography를 이용한 Cyclodextrin Glucanotransferase의 정제 (Purification of Cyclodextrin Glucanotransferase by Affinity Chromatography)

  • 안중훈;황진봉;김승호;김경은
    • 한국미생물·생명공학회지
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    • 제19권3호
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    • pp.313-314
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    • 1991
  • Bacillus stearothermophilus의 mutant가 생산하는 cyclodextrin glucanotransferase(CGTase)를 affinity chromatography법을 이용하여 정제하였다. 이 CGTase의 회수율은 95%이었고 specific activity는 26.2U/mg protein에서 485.5U/mg protein으로 증가하였다. 정제된 CGTase는 SDS-polyacrylamide gel 전기영동 결과 단일 band로 나타났다. CGTase는 affinity chromatography를 이용하여 one-step으로 정제할 수 있었다.

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Streptomyces diastatochromogens로부터 제한효소 SdiI의 분리정제 (Purification of Festriction Endonuclease,SdiI, from Streptomyces diastatochromogenes)

  • 배무;송은숙
    • 미생물학회지
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    • 제32권4호
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    • pp.297-300
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    • 1994
  • 토양에서 분리한 방선균에서 제한효소 활성을 조사하여 그 가운데 Streptomyces diastatochromogenes로부터 제한효소 활성을 확인하였다. 이 균주의 제한효소 SdiI을 균체 15g으로부터 streptomycin sulfate침전, ammonium sulfate 침전, hydroxylapatite colume chromatography, Sephacryl S-200 HR column chromatography, hydroxylapatite column chromatography의 단계를 거쳐 분리하였고, SDS-polyacrylamide gel-electrophoresis에 의하면 소단위체 분자량은 약 35,000Da으로 추정되었다.

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Fast visible dye staining of proteins in one- and two-dimensional sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gels compatible with matrix-assisted laser desorption/ionization-mass spectrometry

  • Jin, Li-Tai;Hwang, Sun-Young;Yoo, Gyurng-Soo;Choi, Jung-Kap
    • 대한약학회:학술대회논문집
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    • 대한약학회 2003년도 Proceedings of the Convention of the Pharmaceutical Society of Korea Vol.2-2
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    • pp.147.2-147.2
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    • 2003
  • A fast and matrix-assisted laser desorption/ionization-mass spectrometry compatible protein staining method in one- and two-dimensional sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis is described. It is based on the counterion dye staining method that employs oppositely charged two dyes, Zincon and Ethyl Violet to form an ion-pair complex. It is safe to use since the methanol used previously in staining solution was replaced with ethanol, which is not toxic. The protocol including fixing, staining and quick washing steps can be completed in 1 to 1.5 h depending upon gel thickness. (omitted)

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등전점 전기영동에 의한 서해산 해산어의 근형단백질의 전기영동에 관한 연구 (Electrophoretic Patterns of Sarcoplasmic Proteins in Mid-West Korean Sea Fishes by Thin Layer Polyacrylamide Gel Isoelectrofocusing)

  • 김종배;최선남;이근우;정용현
    • 한국식품영양과학회지
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    • 제20권5호
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    • pp.455-460
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    • 1991
  • 서로 비슷한 어종으로 약간의 저차 가공시에도 육안적 규별이 어려운 12개 어종의 등전점 전기영동 결과는 다음과 같다. 3종의 갑각류에서 대하와 중하는 밀새우와 다른 단백질 pattern이 pH 4.5 이하에서와 pH 5~7.5에서 서로 구별이 가능하였으며, pH 범위를 변경했을때, 중하와 대하 사이의 구별은 pH 5 부근에 있는 단백질띠로 나타났지만 크기나 형태적으로 거의 같은 대하의 치어에 대한 조사가 필요한 것으로 생각되었다. 민어속 어류에서도 참조기와 항강달이는 비슷한 등전점을 가지는 단백질의 분포가 pH 5~8 사이로 나타났다. 이 분포대에서 돌가자미와 도다리에서도 비슷한 현상을 보였으며, pH 6~7, pH 8~9 범위에서 박대와 도다리는 서로 다른 단백질 분포를 보였고, 참가자미와 돌가자미는 pH 4.5, pH 6.0과 pH 8.0이하에서 뚜렷이 다른 분포를 보였다. pH범위를 변경하여도 단백질 pattern의 구별이 어려운 참조기와 황강달이에서의 2차원 전기영동은 pH 5.0rhk pH 6.0부근에 있는 단백질들에서 추정분자량 11,700과 87,000으로서 등전점 전기영동시 pH 범위 변경 및 2차원 전개 전기영동을 병용할 경우 서해산 어종(중하, 대하, 밀새우, 참조기, 수조기, 황강달이, 참가자미, 도다리, 박대, 돌가자미, 병어, 아홉등가리)의 판별에 구성 단백질의 등전점 전기영동이 신속하고 효과적임을 알 수 있었다.

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Rhizopus속의 histones에 관한 연구 (Studies on the Histones of the Genus Rhizopus)

  • 민병례;이은영
    • 미생물학회지
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    • 제28권2호
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    • pp.128-133
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    • 1990
  • 고등한 진핵생물에서 nucleosome 구성에 중요한 역할을 하는 histone 단백질이 하등한 진핵생물에서도 존재하는지의 여부를 알아보기 위하여 실험을 하였다. 하등한 균류에 속하는 Rhizopus 속의 5종(R. acidus, R. arrhizus, R. formosaensis. R R. japoηicus, R. oryzae)을 재료로 하여 15% polyacrylamide acid-urea gel과 18% P이yacηlam ide SDS-gel을 이용하여 전기영동하였다. 분자량을 비교하기 위하여 marker protein으로 Cytochrome C와 함께 15% polyacrylamide SDS-gel을 이용하였으며 모든 gel에서 standard로써 calf thymus histone을 사용하여 electrophoreticmobility를 비교하였고 호 한 속내에서의 종간의 차이가 있는지를 설험하였다 실험결과는 한 속내에서 종에 따른 차이로 볼 수 없었으며 standard인 calf thymus histone HI. H2A, H2B, H3, H4와 유사한 electromobility흘 갖는 protein band를 확인할 수 있었으며 HI histone은 t성확하게 일치되지가않았다.따라서 하등한균류인Rhizopµs에서도고등 진핵생불과유사한단백질이 존재함을 주정할 수가 있었다.

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Gradient 2-D PAGE를 이용한 양수 프로테옴 분석 (Proteome Analysis of Amniotic Fluid by gradient 2-D PAGI)

  • 이은희;김재찬;변상요
    • KSBB Journal
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    • 제18권1호
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    • pp.35-38
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    • 2003
  • 양수 내에 존재하는 총 단백질을 이차원 전기영동을 이용하여 분리 분석하였고, gradient gel을 이용하여 양수 내에 소량으로 존재하는 미세 단백질까지 분리하였다. 양수 내에는 고농도로 존재하는 단백질이 있는데 이것이 serum albumin precursor임을 확인하였고, 8-18% gradient gel의 이용으로 분해능(resolution)이 향상되어 미세 단백질을 분리 분석할 수 있었다. 이차원 전기영동 후 MALDI-TOF를 이용하여 단백질을 identification하여 기존의 양수 protein database에 존재하는 단백질을 확인하였고, 존재하지 않는 새로운 단백질을 분리 분석하였다.