• Title/Summary/Keyword: plasmid

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Moderate 호염성 세균의 Plasmid 유전자 분리 (Isolation of Plasmids from the Moderately Halophilic Bacteria)

  • 홍용기
    • 한국수산과학회지
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    • 제18권6호
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    • pp.557-562
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    • 1985
  • 천일염으로 부터의 $10\%$ NaCl 농도에서 생육할 수 있는 moderate 호염성 세균들을 대상으로하여 간단한 boiling 법으로 plasmid 유전자를 함유하는 6종을 선별하여 Alkaline-Lysis 법과 고분자 plasmid 추출법인 D. Portnoy & F. White 방법에 따라 plasmid를 추출하여 agarose gel 전기영동으로 확인하였고 각 균을 동정하였다. 그중 Vibrio sp. 14는 최소 7.2kbp, Alcaligenes sp.63은 6.4 kbp, Pseudomonas sp.11은 6.35 kbp, Flavohacterium sp.38은 8.5 kbp, Bacillus sp.16은 8.75 kbp, Alcaligenes sp.52는 6.8kbp 크기의 plasmid를 가지고 있는 것으로 나타났다.

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리포솜을 이용한 플라스미드 DNA의 봉입 (Entrapment of Plasmid DNA in Liposomes)

  • 송미향;이만형;용철순;오두만
    • Journal of Pharmaceutical Investigation
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    • 제26권4호
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    • pp.291-297
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    • 1996
  • Liposomes of $pSV-{\beta}-Galactosidase$ vector plasmid DNA with various lipid composition were prepared by the thin-film method. Size distribution, shape and the efficiency of plasmid DNA encapsulation were investigated. Effect of sonication time on the plasmid DNA entrapment in liposomes and stability at $4^{\circ}C$ were also examined. Sizes of neutral liposomes were about 100-200 nm and above $1\;{mu}m$, and those of cationic liposomes were about 400-600 nm and above $1\;{mu}m$. Shapes of liposomes entrapped plasmid DNA were spherical. Proper sonication time for better entrapment was below 15 minutes and stability at $4^{\circ}C$ was decreased rapidly after 1 day. Plasmid DNA entrapments of complex liposomes of various lipids were higher than those of liposomes made from one sort of lipid. Plasmid DNA entrapments of cationic liposomes were higher than those of neutral liposomes.

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Staphylococcus aureus DH1에서 분리한 R-plasmid pSBK203상의 복제개시 부위 ori에 관한 연구 (Replication origin (ori) of R-plasmid pSBK203 Isolated from Staphylococcus aureus DHI)

  • 민경일;변우현
    • 미생물학회지
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    • 제32권3호
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    • pp.186-191
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    • 1994
  • Staphylococcus aureus로부터 분리한 R-plasmid pSBK203의 복제개시 단백질인 Rep의 작용부위인 ori 및 dsDNA로의 전환을 위해 요구되는 minus origin부위를 밝히고자 시도하였다. Escherichia coli vecotr를 이용하여 pSBK203의 복제관련 부위를 최소한도로 포함하는 재조합 E.coli-Bacillus subtilis shuttle vector를 구성, 분리하고 여기에 포함된 pSBK203부위의 염기 서열을 분석함으로써 ori를 확인하였다. pSBK203의 복제개시 부위 ori는 rep의 구조 유전자 ORF내에서 약 50bp의 크기로 발견되었으며 지금까지 알려진 staphylococcal plasmid들중에서 pT181족 plasmid들의 ori와 높은 상동성을 갖는 것으로 분석되었다. 복제 과정에서 ssDNA로 먼저 만들어진 (+)쇄가 dsDNA로 전환되기 위해 필요한 신호로 작용하는 것으로 알려저 있는 minus origin (M-O)인 긴 palindrome 구조, 즉 pal 부위가 rep 우전자의 상류에서 2개 연이어 존재하는 것이 발견되었다. 이중에서 pOX6, pC194, 및 pE194 등과 같은 다른 staphylococcal plasmid들의 pal 부위와 비교적 높은 상동성을 갖는 paLA 는 plasmid 유지에 별 영향을 미치지 못하는 반면 다른 plasmid에서 유사 서열이 보고되지 않은 palA는 plasmid 유지에 필수적이라는 사실이 밝혀졌다.

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효모(酵母) 유전자(遺傳子) 발현용(發現用) Promoter 개발(開發)에 관(關)한 연구(硏究) (Studies on the Development of Yeast Promoter for the Gene Expression)

  • 정호권;박준희;심상국;정동효
    • Applied Biological Chemistry
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    • 제38권1호
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    • pp.7-12
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    • 1995
  • 본 연구는 lacZ' 유전자의 promoter 개발을 위하여 착수하였다. lacZ' 유전자의 heterologous promoter I과 II를 효모 염색체의 Bam HI DNA 단편에서 분리하였다. Promoter I의 크기는 2.5 Kb 정도이고 ${\beta}-galactosidase$ 활성은 124.6 U/mg protein이었으며 promoter II의 크기와 효소활성은 4.0 Kb와 168.8 U/mg이었다. 형질 전환체에서의 YEp plasmid 안정성은 52.7%에서 67.4% 정도였다. YEp plasmid로부터 YIp plasmid를 재조합하였으며 이 YIp plasmid는 대장균에서나 효모에서도 발현되었다. 효모로부터 분리한 promoter I과 II는 재조합된 YEp와 YIp plasmid의 promoter로서 이용 가능하였다.

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Bacillus thuringiensis var kurstaki HD-1의 내독소 단백질 유전에 관여하는 plasmid의 결정 (Determination of Plasmids Encoding Crystal Toxic Protein Gene in Bacillus thuringiensis var kurstaki HD-1)

  • 김철영;김상현
    • 한국잠사곤충학회지
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    • 제35권2호
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    • pp.120-128
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    • 1993
  • B. t k HD-1 균주에 0.002% SDS와 0.5$\mu$g/ml EtBr을 처리한 결과, 9개의 cry- 변이균주를 분리하였으며 또한 B. t k HD-1균주와 B. cereus 569균주를 혼합배양하는 방법으로 mating 실험을 수행하여 B. t k HD-1으로부터 일부 plasmid가 전이된 11개의 cry+ B. cereus와 2개의 cry=B. cereus를 분리하고 plasmid수와 분자량을 조사하였다. B. t k HD-1의 경우 9개의 plasmid가 존재하였고 일부 plasmid가 curing된 B. t k HD-1변이균주의 경우 29Md plasmid나 44Md plasmid가 반드시 존재하였으나, cry- 변이균주에는 29Md 이상의 모든 plasmid가 소실되어 내독소 단백질 합성에 관여하는 유전자가 기억된 plamid를 결정하였다.

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대장균을 이용한 Phenylalanine 생산에 있어서 온도조절형 발현 Vector의 안정성 (Phenotypic Stability of a Temperature-Controllable Expression Vector on Phenylalanine Production by Escherichia coli)

  • 강상모;박인숙
    • 한국미생물·생명공학회지
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    • 제19권5호
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    • pp.433-438
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    • 1991
  • Phenylalanine 고생산용 plasmid pSY130-14는 $\lambda$-phage 유래 온도감수성을 가지고 있으므로 $cI_{857}$ repressor와 PL과 PR을 온도를 올려 phenylalanine의 생산을 유도한다. pSY130-14를 갖는 E.coli AT2471은 kanamycin 무첨가, $38.5^{\circ}C$, 48시간에서 약 30%로 plasmid가 없어지며 첨가에서 안정성이 떨어졌다가 배양시간과 더불어 올라갔는데, 이것은 생육에 피요한 kanamycin gene과 ori만이 남는 것으로 생각된다.

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유산균 Plasmid DNA의 신속 간편한 분리방법 (Rapid and Simple Method for Isolating Plasmid DNA from Lactic acid Bacteria)

  • 배형석;백영진;김영기;유민;박무영
    • 한국미생물·생명공학회지
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    • 제13권3호
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    • pp.289-296
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    • 1985
  • 본 연구는 유산간균 및 유산구균으로부터 plasmid DNA를 신속하고 간편하게 분리하기 위한 방법에 관한 것이다. 세포벽 형성 억제 인자인 glycine을 0.5% 첨가한 TCM 배지에서 유산균을 배양하였고 plasmid DNA는 mutanolysin을 처리한 cells로부터 alkaline-detergent lysis 법으로 분리되었다. 유산간균은 효소 처리 때 mutanolysin의 농도를 30$\mu\textrm{g}$/$m\ell$로 하고 37$^{\circ}C$에서 5-10분간 반응되었을 때 plasmid DNA가 아주 잘 추출되었다. 유산구균의 경우는 그 최적 조건이 조금 달랐다. 본 방법은 L. casei, L. acidophilus, L. helveticus, S. lactis, S. faecalis, S. faecium과 S. cremoris 균주로부터 plasmid DNA를 신속하게 분리하는데 사용할 수 있었다. 본 방법을 이용하여 배양액 $1.5m\ell$로부터 분리된 plasmidsDNA가 gel상에서 쉽게 확인될 수 있었다.

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Plasmid-DNAgram : 녹색형광단백질 발현 Plasmid DNA 기반 분자컴퓨팅에 의한 언어 퍼즐 문제 해결 (Plasmid-DNAgram : Anagram Solving by Molecular Computing Based on GFP-Expressing Plasmid DNA)

  • 김수동;이은석;장병탁
    • 한국정보과학회 언어공학연구회:학술대회논문집(한글 및 한국어 정보처리)
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    • 한국정보과학회언어공학연구회 2003년도 제15회 한글 및 한국어 정보처리 학술대회
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    • pp.293-299
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    • 2003
  • 인간 게놈 프로젝트가 완료됨에 다라 생체서열과 언어 사이의 대응 관계가 부각되고 있다. 본고에서는 Lewis Carroll의 언어 유희 사례를 컴퓨터생물학의 측면에서 재조명하고, Carroll이 제시한 문제 중에서 간단한 anagram 문제의 해결을 다루고자 한다. 우선 DNA 컴퓨팅의 방법론을 적용한 DNAgram의 개념을 확장하여 plasmid-DNAgram의 개념을 새롭게 도입하였다. 이 개념을 형광단백질에 대한 DNAgram의 개념을 확장하여 plasmid-DNAgram의 개념을 새롭게 도입하였다. 이 개념을 형광단백질에 대한 FRET(fluorescent resonance energy transfer)분석기법의 응용 사례인 cameleon 형광단백질에 대한 FRET 분석기법에 적용함으로써 anagram 문제의 어휘론적, 구문론적, 의미론적, 화용론적 측면에 대응하는 바이오분자 컴퓨팅 방법론을 제안하였다.

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Plasmid Stability and Cloned-Gene Expression in Continuous Culture of Recombinant Escherichia Coli Under Derepressed Condition

  • Nam, Soo-Wan;Kim, Byung-Kwan;Kim, Jung-Hoe
    • Journal of Microbiology and Biotechnology
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    • 제4권1호
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    • pp.1-6
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    • 1994
  • Continuous culture was carried out with a recombinant Escherichia coli W3110/pCR185, which encodes trp-operon enzymes when the temperature is shifted from $37^{circ}C\;t;42^{\circ}C$. Under derepressed condition of $42^{\circ}C$. plasmlid stability and gene expression were analysed as function of the dilution rate. The stability of plasmid increased with the dilution rate, but maximal levels of gene expression (tryptophan concentration) and plasmid DNA content were obtained at the lowest dilution rate, $0.075\;hr^{-1}$. The plasmid instability, observed at low dilution rates, could be explained by the unbalanced biosynthetic state of the recombinant cell harboring a high copy number of plasmid.

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Staphylococcus epidermidis의 Tetracycline 내성 Plasmid의 분석 및 Conjugation에 의한 내성전달 (Analysis of Tetracycline Resistance Plasmids and the Conjugative Transfer of Tetracycline Resistancy in Staphylococcus epidermidis)

  • 정재규;박미경;김성광
    • 대한미생물학회지
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    • 제22권1호
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    • pp.95-99
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    • 1987
  • When tetracycline resistancy were cured by ethidium bromide treatment, some of the cured strains lost the tetracycline resistance plasmid while other strains kept the plasmids. Both strains of lost and remained plasmids were digested with restriction endonuclease Hind III and these cleaved plasmids were compared with that of parent strains, two plasmid remained strains showed same cleavage patterns between parent and cured strains, however, one plasmid lost strain showed dissimilarity with parent strain, but in the other one strain, among 4 plasmid lost colonies, 2 showed same but other 2 showed different patterns compared to parent strain. Tetracycline was transfered by conjugation in on set(Staphylococcus aureus donor versus Staphylococcus epidermidis, recipient) with relative high frequency but the other 2 sets showed a low degree of frequency and the other 2 sets exhibited no transfer.

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