The transient and rapid expression system of a foreign protein in planta is a very useful technique in biotechnology application. We have investigated optimum condition of Agrobacterium-infiltration technique in which expression level of foreign proteins were maximized without detrimental effects on plants using GFP and Cucumber mosaic virus 2b protein, which is known as an enhancer of gene expression and a suppressor of post-transcriptional gene silencing(PTGS). The optimum expression level of both RNA and protein of GFP with minimum leaf impairment was obtained at $OD_{600}$=0.2 of Agrobactrium inocula. The steady-state levels of GFP RNA and protein generally peaked at 3 and 7 days post-infiltration(dpi), respectively. In the presence of 2b, both the magnitude and duration of GFP expression was highly increased and we could detect GFP level until 17 dpi. On the other hands, the 2b-mediated higher accumulation of foreign proteins resulted in the repression of normal leaf growth, possibly due to the limitation of supply of energy or materials required for growth maintenance. Using this Agrobacterium-infiltration system with 2b and GFP, we tested a hypothesis for the threshold model of PTGS initiation. Four GFP transgenic lines of N. benthamiana, which shows different expression level of GFP were tested to determine the threshold level for PTGS initiation. Agrobacterium-infiltration of GFP into those GFP-transgenic plants resulted in the co-silencing of the transgenic GFP. It was found that very low concentration of Agrobacterium with GFP and GFP+2b($OD_{600}$=0.002-0.02) which could not phenotypically induce an additive GFP expression, was enough to trigger PTGS pathway in all GFP transgenic plants. This strongly indicates that each GFP-transgenic plant should be expressing the transgenic GFP at its own pre-determined level and there was no buffer zone of additive GFP-expression to the threshold. In other words, the PTGS seems to be immediately activated as a self-defensive mechanism if an internal balance of gene expression is broken.
Full-length cDNAs are essential for the correct annotation of genomic sequences and for the functional analysis of genes and their products. To elucidate the functions of a large population of Chinese cabbage (Brassica rapa) genes and to search efficiently for agriculturally useful genes, we have been taking advantage of the full-length cDNA Over-eXpresser (FOX) gene hunting system. With oligo dT column it purify the each mRNA from the flower organs, leaf and stem tissue. And about 120,000 cDNAs from the library were transformed into $\lambda$-pFLCIII-F vector. Of which 115,000 cDNAs from the library were transformed into T-DNA binary vector, pBigs for transformation study. We used normalized full-length cDNA and introduced each cDNA into Arabidopsis by in planta transformation. Full-length Chinese cabbage cDNAs were expressed independently under the CaMV 35S promoter in Arabidopsis. Selfed seeds were harvested from transgenic Arabidopsis. We had selected 2,500 transgenic plants by hygromycin antibiotic tolerant test, and obtained a number of transgenic mutants. Each transgenic Arabidopsis was investigated in morphological changes, fertility and leaf colour. As a result, 285 possible morphological mutants were identified. Introduced cDNA was isolated by PCR amplification of the genomic DNA from the transgenic mutants. Sequencing result and BLAST analysis showed that most of the introduced cDNA were complete cDNAs and functional genes. Also, we examined the effect of Bromelain on enhancing resistance to soft rot in transgenic Chinese cabbage 'Osome'. The bromelain gene identified from FOX hunting system was transformed into Chinese cabbage using Agrobacterium methods. Transformants were screened by PCR, then RT-PCR and real time PCR were performed to analyze gene expression of cysteine protease in the T1 and T2 generations. The anti-bacterial activity of bromelain was tested in Chinese cabbages infected with soft rot bacteria. The results showed that the over-expressed bromelain gene from pineapple conferred enhanced resistance to soft rot in Chinese cabbage.
This study was for developing leaf chlorophyll mutant cultivars of Cymbidium goeringii by ethyl-methanesulfonate(EMS) treatment. Chlorophyll mutant rhizomes were easily produced by 0.2% EMS treatment in this genus. Among the mutants, they became dark brown about 50% of the rhizomes. When the dark-brown rhizomes were cultured in a solidified MS medium, new rhizomes were formed from part of the old ones. Chlorophyll mutant rhizomes were obtained from subcultured meristem tissues of newly-formed rhizomes. The rhizomes were cut and subcultured for a year and then became mutant plants. As the results, they produced 4 kinds of leaf mutant cultivars; zigzag-striped, comb-striped, net-striped, and dwarf types, indicating that the EMS treatment in the rhizome could produce versatile leaf chlorophyll regulating mutants. These results suggest that our method is useful for developing leaf mutant cultivars of this planta which they are estimated as higher commercial values.
Associative heterotrophic nitrogen fixing bacteria were identified by immunodiffusion method in the histosphere of Planta-ginaceae, Caryophllaceae, Gramineae, and two types of rice cultivars. Twenty four strains associative heterotrophic bacteria with high ARA (more than 10nmole/tube/hr) were isolated from the histosphere of grasses and rice.* Those strains were related with 8 species of Azospirillum, 11 species of Pseudomonas, 2 species of Klebsiella and 2 species of Agrobacterium. Among them Azospirillum sp. and Pseudomonas sp. were predominant in histosphere of grasses and rice cultivars. From the histosphere of Oryza sativa, and Sagina maxima, the strains of Azospirillum, Pseudomonas, Klebsiella, and Agrobacter were identified while Pseudomonas was identified from Ischaemum anthephoroides, Plantago lanceolata, Miscanthus sacchuriflorum, and only Azospirillum was identified from Zoisia sinica, respectively. Associative nitrogen fixing heterotrophic bacteria were more abundant in the histosphere of Oryza sativa and Sagina maxima than that of other grasses grown in saline and reclaimed saline paddy soil.
Lee, Young Hee;Jang, Su Jeong;Han, Joon-Hee;Bae, Jin Su;Shin, Hyunsuk;Park, Hee Jin;Sang, Mee Kyung;Han, Song Hee;Kim, Kyoung Su;Han, Sang-Wook;Hong, Jeum Kyu
The Plant Pathology Journal
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v.34
no.6
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pp.555-566
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2018
Two rhizobacteria Bacillus aryabhattai H26-2 and B. siamensis H30-3 were evaluated whether they are involved in stress tolerance against drought and high temperature as well as fungal infections in Chinese cabbage plants. Chinese cabbage seedlings cv. Ryeokgwang (spring cultivar) has shown better growth compared to cv. Buram-3-ho (autumn cultivar) under high temperature conditions in a greenhouse, whilst there was no difference in drought stress tolerance of the two cultivars. In vitro growth of B. aryabhattai H26-2 and B. siamensis H30-3 were differentially regulated under PEG 6000-induced drought stress at different growing temperatures (30, 40 and $50^{\circ}C$). Pretreatment with B. aryabhattai H26-2 and B. siamensis H30-3 enhanced the tolerance of Chinese cabbage seedlings to high temperature, but not to drought stress. It turns out that only B. siamensis H30-3 showed in vitro antifungal activities and in planta crop protection against two fungal pathogens Alternaria brassicicola and Colletotrichum higginsianum causing black spots and anthracnose on Chinese cabbage plants cv. Ryeokgwang, respectively. B. siamensis H30-3 brings several genes involved in production of cyclic lipopeptides in its genome and secreted hydrolytic enzymes like chitinase, protease and cellulase. B. siamensis H30-3 was found to produce siderophore, a high affinity iron-chelating compound. Expressions of BrChi1 and BrGST1 genes were up-regulated in Chinese cabbage leaves by B. siamensis H30-3. These findings suggest that integration of B. aryabhattai H26-2 and B. siamensis H30-3 in Chinese cabbage production system may increase productivity through improved plant growth under high temperature and crop protection against fungal pathogens.
Kim, Sang Tae;Yoo, Sung-Je;Song, Jaekyeong;Weon, Hang-Yeon;Sang, Mee Kyung
Research in Plant Disease
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v.25
no.3
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pp.136-142
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2019
Drought stress is considered as one of major abiotic stresses; it leads to reduce plant growth and crop productivity. In this study, we selected bacterial strains for alleviating drought stress in chili pepper plants. As drought-tolerant bacteria, 28 among 447 strains were pre-selected by in vitro assays including growth in drought condition with polyethylene glycol and plant growth-promoting traits including production of 1-aminocyclopropane-1-carboxylate deaminase, indole-3-acetic acid and exopolysaccharide. Sequentially, 7 among pre-selected 28 strains were screened based on relative water content (RWC); GLC02 and KJ40, among seven strains were finally selected by RWC and malondialdehyde (MDA) in planta trials under an artificial drought condition by polyethylene glycol solution. Two strains GLC02 and KJ40 reduced drought stress in a natural drought condition as well as an artificial condition. Strains GLC02 or KJ40 increased shoot fresh weight, chlorophyll and stomatal conductance while they decreased MDA in chili pepper plants under a natural drought condition. However, two strains did not show biocontrol activity against diseases caused by Phytophthora capsici and Xanthomonas campestris pv. vesicatoria in chili pepper plants. Taken together, strains GLC02 or KJ40 can be used as bio-fertilizer for alleviation of drought stress in chili pepper plants.
Objective: The purpose of this study was to find out kinematic and kinetic differences the lower extremity joint according to the landing type during vertical jump movement after jump landing, and to present an efficient landing method to reduce the incidence of injury in youth players. Method: Total of 24 Youth players under Korean Sport and Olympic Committee, who used either heel contact landing (HCG) or toe contact landing (TCG) participated in this study (HCG (12): CG height: 168.7 ± 9.7 cm, weight: 60.9 ± 11.6 kg, age: 14.1 ± 0.9 yrs., career: 4.3 ± 2.9 yrs., TCG height: 174.8 ± 4.9 cm, weight: 66.9 ± 9.9 kg, age 13.9 ± 0.8 yrs., career: 4.7 ± 2.0 yrs.). Participants were asked to perform jump landing consecutively followed by vertical jump. A 3-dimensional motion analysis with 19 infrared cameras and 2 force plates was performed in this study. To find out the significance between two landing styles independent t-test was performed and significance level was set at .05. Results: HCG showed a significantly higher dorsi flexion, extension and flexion angle at ankle, knee and hip joints, respectively compared with those of TCG (p<.05). Also, HCG revealed reduced RoM at ankle joint while it showed increased RoM at knee joint compared to TCG (p<.05). In addition, HGC showed greater peak force, a loading rate, and impulse than those of TCG (p<.05). Finally, greater planta flexion moment was revealed in TCG compared to HCG at ankle joint. For the knee joint HCG showed extension and flexion moment in E1 and E2, respectively, while TCG showed opposite results. Conclusion: Compared to toe contact landing, the heel contact landing is not expected to have an advantage in terms of absorbing and dispersing the impact of contact with the ground to the joint. If these movements continuously used, performance may deteriorate, including injuries, so it is believed that education on safe landing methods is needed for young athletes whose musculoskeletal growth is not fully mature.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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