분자육종의 발전에 따라 좀 더 유용한 형질전환 식물체를 더 많이 얻어내기 위한 많은 형질전환 기술들이 개발되어오고 있으나 새로운 수요를 충족시키기 위한 다양한 종류의 새로운 품종들이 실시간으로 새롭게 개발되고 있으며 개발된 품종에 적합한 새로운 형질전환 기술에 대한 개발 필요성 또한 지속적으로 요구되고 있다. 카네이션(Dianthus caryophyllus L.)은 전 세계적인 주요 화훼작물 중 하나로 경제적 파급효과가 매우 큰 작물이다. 따라서 기술개발의 파급효과가 큰 카네이션을 대상으로 조직배양 및 형질전환의 효율성을 향상시키기 위하여 시장에서 주요하게 거래되고 있는 주요 품종 18종을 수집하고 이 중 조직배양을 통한 신초 분화 능력이 우수한 4개 품종 Yellow dotcom, Jakarta, Belmonte, Polar tessino 등을 선발하였다. 선발된 4개 품종에 공통으로 적용시킬 수 있는 가장 효율적인 생장조절제는 MS+Sucrose 3%+NAA 1.0 mg/L+TDZ 1.0 mg/L.이었으며 MS+Sucrose 3%+NAA 3.0 mg/L+BA 1.0 mg/L 처리는 Belmonte.에 적용 가능한 생장조절제 조합이었다. 캘러스 형성과 신초 분화에 가장 효율적인 기본 배지는 MS이었으며 탄소원으로는 Sucrose를 3%로, Phytagel 0.3%를 배지 경화제로 처리하는 것이 조직배양을 통한 재분화 식물체 획득에 가장 효과적이었다. 가장 효율적 조직배양 체계를 구축하기 위한 조직배양 부위는 줄기 부위 이었으며 이 부위를 배양재료로 사용할 경우 신초 생성율을 80.2%까지 올릴 수 있었고 배양소요 기간도 6일 정도 단축할 수 있었다.
3년생 유럽낙엽송의 실생묘로부터 형성층조직을 분리하여 부정아를 유기하였다. BLG배지에 4.5$\mu$M의 BA가 첨가된 배지에서 형성층 절편체 당 약 25개의 부정아가 형성되어 시험된 여러 가지 BA와 NAA농도 중 최고의 발생율을 보였다. 유기된 부정아는 1/2 GD배지와 LMG배지에서 10주 후 약 2.5cm의 신장을 보였다. GD배지에서는 이보다 낮은 약 1,8cm의 신장을 나타내었다. 발근은 NAA가 $0.54\;\mu\textrm{M}$ 함유된 1/2 GD배지에 2주간 배양하였을때 20% 정도 나타났다. 발근된 shoot들은 NAA가 함유되지 않은 1/2 GD 배지에서 뿌리를 신장시킨 후 온실로 옮겨져 순화되었다. 본 실험의 결과 그동안 낙엽송의 조직배양시료로 사용되지 않았던 형성층 조직의 뛰어난 형태형성능을 보여줌으로써 기내 급속대량증식 뿐 아니라 향후 낙엽송의 체세포 변이주선발이나 형질전환 및 그와 관련된 연구분야에 유용하게 사용될 수 있을 것으로 사료된다.
벼의 미수분자방배양에서도 저온처리의 효과가 인정되어 $12^{\circ}C$에 10일동안 전처리된 자방배양에서 캘러스형성률과 식물체 재분화율이 각각 10.7%와 38.7%로 가장 높게 나타났다. 액체배지에서 보다 6 g/L의 gelrite를 첨가한 고체배지에 자방을 배양하였을 때 식물체 재분화율이 높게 나타났다. 미수분 자방을 1 mg/L의 picloram이 첨가된 배지에 배양하였을 때 녹색체 분화율이 가장 높았고, picloram의 농도가 그 이상 증가함에 따라 백색체의 출현빈도가 높아지는 경향이었다. 저온처리된 이삭으로부터 자방만 분리하여 배양하였을때는 캘러스가 형성되지 않았으나 내외영의 일부와 자방 및 소지경이 2차지경에 부착된 상태로 배양하였을때 캘러스 형성률과 식물체 재분화율이 각각 9.4%와 39.3%로 가장 높게 나타났다.
벼의 종자배양에서 식물체 재분화 능력을 향상시키기 위하여 2 mg/L의 2,4-D와 여러 가지 농도의 copper (0~5.0mg/L)가 첨가된 MS배지에 종자배양 한 바 캘러스 생장정도는 copper 농도에 따라 다르게 나타났는데 특히, 2.5 mg/L의 copper가 첨가된 배지에서 가장 양호하였다. 그리고 캘러스 형성률과 copper 농도 간에는 유의성 있는 차이가 인정되지 않았다. 식물체 재분화 배지에 2.5 mg/L의 copper의 첨가는 Indica 품종들의 식물체 재분화 효율을 크게 향상시켰다. Copper가 첨가되지 않은 N$_{6}$배지에서 Indica 6품종의 평균재분화율은 2.4%이었으나, copper가 첨가된 배지에서 27.4%로 높게 나타났다.
네오레게리아(Neoregeria carorinae 'Tricolor')의 기내배양시 무늬소실을 줄일 수 있는 재료의 채취시기와 발근을 위하여 기내에서 처리된 오옥신이 온실에 이식된 식물체의 생육 및 개화에 미치는 영향에 관하여 실험한 결과, 화아분화 4주후(III단계)에 미숙화기를 배양한 것이 분화된 식물체 중 정상 식물체가 67%로 가장 많았고, 화아분화 직후 및 화아분화 5주후에 배양한 것은 모두 반입이 소실되었다. 미숙화기와 액아를 배양하여 나온 식물체중 정상식물체 획득율은 미숙화기 배양에서는 67%, 액아배양에서는 56.2%였다. 미숙화기를 배양하여 얻은 식물체가 액아를 배양하여 얻은 식물체보다 온실재배에서 생육이 월등이 좋았고, 개화율도 미숙화기를 배양하여 얻은 식물체는 27.8%이었으나 액아를 배양하여 얻은 식물체는 전혀 개화하지 않았다. IBA 0.5 mg/L가 첨가된 배지에서 발근시킨 식물체의 기외생육이 왕성하였으며, 기내에서 처리한 오옥신 종류와 농도는 온실에서 재배되고 있는 식물체의 변이에 영향을 미치지는 않았다.
본 연구는 글라디올러스 캘러스로부터의 재분화 조건을 구명함으로써 캘러스 배양시스템을 확립하는데 기여하고자 하였다. 글라디올러스 캘러스로부터의 유식물체 획득은 캘러스를 2,4-D 무첨가 1/2 MS고체배지에 치상한 후 24시간 일장하에서 15$^{\circ}C$로 배양하였을 때 효과적이었다. 캘러스로부터의 기관형성에 미치는 배양방법의 영향을 검토한 결과, 부정근의 형성은 액체진탕배양이 그리고 부정아의 형성은 액채정치배양이 각각 우수한 것으로 확인되었다. 본 실험의 결과를 통해 글라디올러스 ‘Topaz' 캘러스로부터의 재분화를 위한 최적 배양 조건을 선발하는 한편, 액체진탕배양법에 의해 기관-캘러스 혼합체를 유도할 수 있었으며, 이를 이용하여 기내 유식물체를 대량생산할 수 있는 가능성을 확인할 수 있었다.
Isolation and culture of leaf protoplasts from two chilli cultivars (Capsicum annuum var. accumnatum and Bird chilli) were developed to enhance selection process in the somatic hybridization programmes. In order to isolate the protoplasts from leaves of these two chilli cultivars different incubation periods (3, 5 and 10 hours) were tested with combinations of enzyme mixtures containing cellulase and macerozyme. Leaves were incubated on three enzyme mixtures (2% cellulase +0.4% macerozyme, 1% cellulase +0.2% macerozyme and 0.5% cellulase +0.1% macerozyme in 13% mannitol) at 251oC in the dark. Three hours of incubation using 2% cellulase and 0.4% macerozyme was the best for the protoplast isolation of both chilli cultivars tested. The yield was 5${\times}$108protoplasts/m1/g leaf tissue in both chilli varieties. It was found that in the mixed nurse method using Nagata and Takebe (NT) medium supplemented with 1.0mg/12,4-D, NAA and BAP with 0.5M mannitol and 1.2% Sea Plaque agarose is the best medium for protoplast culture. Protoplasts of Capsicum annum var. accumnatum were alive for 14 days forming cell walls and initiating cell division.
Park, Jae-Ho;Jeong, Jin-Boo;De Lumen, Ben O.;Jeong, Hyung-Jin
한국자원식물학회지
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제20권6호
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pp.518-523
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2007
Lunasin is small subunit peptide of coded from Gm2S-1 gene in soybean. It has been previously demonstrated that lunasin is a novel and promising cancer preventive peptide. Lunasin peptide is found only in the seed and not other tissues. And lunasin peptide starts to appear at 5 weeks after flowering and remains in the mature seed. We report here firstly lunasin peptide identified from soybean callus induced by the tissue culture and demonstrate its anticancer properties. The lunasin was identified and purified from soybean callus aged for 6 months. The callus lunasin($1{\mu}M$) inhibited the acetylation of histone H3 and H4 by 58.8% and 56.5%, respectively. And it fully inhibited foci formation compared to the values of the positive control(no lunasin) and negative control(no MCA). Purified lunasin was able to internalize into the cell and localized in the nucleus.
The young leaf of Perilla species was cultured by two stage culture system using the medium containing mevalonic acid lactone. The growth rate and productivity of essential oil of callus were increased. The essential oil from intact plant and callus was also analysed. Sesquiterpene hydrocarbons and one sesquiterpene alcohol were identified in essential oils of callus.
모시풀의 경편과 흡지의 배양을 통하여 완전한 식물체를 대량증식하기 위하여 소독방법과 생장조절제 처리 효과에 대한 기내배양을 실시하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 모시풀 경편 배양시 소독은 초음파세체기를 이용한 2% NaClO를 20분 동안 하였을때 오염률이 3.3%로 가장 낮았으며, 식물체도 79%가 생존하였고, 건실한 묘를 생산할 수 있었다. 2. 생장조절제 처리효과에서는 NAA(0.02mg/$\ell$)+ BA(1.5mg/$\ell$) + GA3(0.1mg/$\ell$) 혼합처리가 캘러스 형성이 안되고, 식물체 형성률이 96%였으며, 건실한 묘를 생산할 수 있었다. 3. 치상부위별로는 흡지보다 경편배양이, 품종별로는 개량종인 서방종보다 재래종인 보성종이 증식효률이 높았다. 4. 순화 효율은 상토 배합과 호르몬 처리에 있어서 버미큐라이트 : 모래 :황토 =1 : 1 : 1의 배합과 NAA 1000ppm을 30분간 담근 후 이식한 순화율이 99%로서 건실하였으며, 식물체는 대부분 정상이었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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