Kim, Hyounjoung;Lee, Mi-Yeon;Kim, Ukjo;Lee, Sanghyeob;Park, Soon-Ho;Her, Nam-Han;Lee, Jing-Ha;Yang, Seung-Gyun;Harn, Chee-Hark
한국식물병리학회:학술대회논문집
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한국식물병리학회 2003년도 정기총회 및 추계학술발표회
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pp.67.1-67
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2003
Phytophthora blight is a devastating disease of pepper and occurs almost anywhere peppers are grown. Phytophthora blight is caused by Phytophthora capsici and this pathogen can infect every part of the plant by moving inoculum in the soil, by infecting water on surface, by aerial dispersal to sporulating lesions. Management of Phytophthora blight currently relies on cultural practices, crop rotation, and use of selective fungicides. Since these treatments are a short-term management, a classical breeding for development of resistant pepper against the Phytophthora is an alternative. So far some of the resistant cultivars have been on the market, but those are limited regionally and commercially. Therefore, ultimately an elite line resistant against this disease should be developed, if possible, by biotechnology. We have set out a series of work recently in order to develop Phytophthora resistant pepper cultivar. For the first time, the cDNA microarray analysis was peformed using an EST chip that holds around 5000 pepper EST clones to identify genes responsive to Phytophthora infection. Total RNA samples were obtained from Capsicum annuum PI201234 after inoculating P. capsici to roots and soil and exposed to the chip. .Around 900 EST clones were up-regulated and down-regulated depending on the two RNA sample tissues, leaf and root. From those, we have found 55 transcription factors that may be involved in gene regulation of the disease defense mechanism. Further and in detail information will be provided in the poster.
국내의 고추 포장에서 나타나는 시듦 증상의 원인을 규명하기 위하여 2010년부터 2014년까지 5년 동안 충북 괴산의 고추 재배 포장에서 시듦 증상을 보이는 고추의 발병도를 조사하였다. 조사한 연도에 따라서 시듦 증상에 대한 발병에는 차이가 있었지만, 조사하는 시기가 6월과 7월을 지나 8월이 되면서 발병도가 높게 상승하였다. 이 시기 동안 시듦 증상을 보이는 고추에서 Ralstonia solanacearum이 Phytophthora capsici보다 4배 높은 비율로 분리되었다. 충북 괴산과 경북 안동의 포장에서 2013년과 2014년의 2년 동안 채집한 시든 고추에서 병원균을 분리하여 보아도, 조사한 전체 포장 중의 20.3%에서 R. solanacearum이 분리되었으며, 역병균인 P. capsici는 3.8%의 포장에서만 분리되었다. 시듦 증상이 높은 비율로 나타났던 해에는 평균기온이 높았으며, 고추 풋마름병 예찰 모델로 추정된 풋마름병의 초발생일도 빨라짐을 알 수 있었다. 역병 발생 위험 일수와 실제 시듦 증상 발생 빈도의 결과가 부합하지 않는 것은 재배 현장에서 역병 저항성 품종의 사용이 일반화되어 있기 때문이라고 생각한다. 이런 결과를 통해서 역병 저항성 고추 품종이 재배 현장에 도입된 이후, 포장에서 관찰할 수 있는 시듦 증상의 원인은 P. capsici에 의한 역병보다는 R. solanacearum에 의한 풋마름병이었다.
경북 경주지역의 저병해 고추경착지역의 토양으로부터 생물학적 방제기작중의 하나인 항생물질을 생산하는 길항미생물을 분히하기 위하여 70여종의 세균을 분리하였으며 이들을 대상으로 고추역병균 Phytophthora capsici를 가장 강력하게 길항하는 균주를 최종 선발하였다. 선발균주는 Chryseomonas luteola로 동정되었고 방제 기작은 약한 siderophore 생산성과 cellulase 생산성도 기인되었으나 항생물질 생산성이 주요 기작임을 확인하였다. 항진균성 항생물질의 대량생산의 기초자료로 활용하고자 항생물질 생산의 최적배지 조건 및 배양조건을 조사하였는데 길항균주의 항생물질 생산에 미치는 탄소원의 영향은 0.45% N-acetyl-D-glucosamine과 0.15% D(+) cellobiose에서 81%와 89%의 P. capsicivh자의 성장 억제율을 나타냈다. 질소원의 경우는 0.55% $NH_4$CI 첨가시 69%의 억제율을 나타냈고 무기염의 영향에 있어서는 0.01% KCI을 사용했을 때 63%의 억제율을 나타냈다. 또한 배양 조건에 있어서는 pH 7.0m $30^{\circ}C$에서 84시간 배양시 가장 높은 항진균성 항생물질 생산성을 나타내었다. 토양내에서 실제로 생물방제력을 발휘하는지를 확인하기 위하여 고추를 이용한 in vivo pot test를 실시한 결과 P capsici 만 처리한 것은 고추역병 현상을 나타냈고, P capsici 와 길항균 C luteola 5042를 함께 처리한 것은 역병 현상이 나타나지 않았다. 이것으로 길항균주는 C luteola 5042 P capsici 의 성장을 저해하여 고추 역병의 발병을 억제한다는 사실을 확인할수 있었다.
고추 역병균에 대한 Pseudomonas속 및 Bacillus속 길항미생물을 역병균과 동일한 서식처인 근권에서 분리하고자 4지역의 고추재배지에서 건전고추의 근권토양을 채취하여 선택배지를 사용하여 분리하였다. Pseudomonas속 237개 Bacillus속 260개 총 497개 균주중 327개 균주는 역병균에 대해 거의 활성이 없거나 역병균의 균사생장을 20$\%$ 이하로 억제시켰으나, Pseudomonas속 8균주와 Bacillus속 4균주는 50%이상 역병균의 균사생장을 억제시켰다. 이들 균주의 활성은 V-8 juice agar보다 TSA에서 높았으며, TSA에서 역병균의 균사생장을 60$\%$ 이상 억제시키는 균주를 선발하여 API system을 사용하여 P. cepacia (P0704, P1201), B. polymyxa (B1101) 및 B. subtilis (B1901)로 동정하였다. 이들 균주의 배양여액은 고추역병균의 유주자발아 및 균사생장을 억제시켜 항균성물질을 생성분비하는 균주로 판단되었다. 고추 역병발생 억제효과를 조사한 결과 P0704가 46.7$\%$ 로 가장 높았으며, 나머지 균주는 26.7$\%$ 에서 13.4$\%$ 로 나타났다.
In our previous studies, we selected three antagonistic bacteria, KJ1R5, KJ2C12, and KJ9C8 against Phytophthora capsici, the casual agent of Phytophthora blight of pepper. For elucidating production, root colonization, and total microbial activity were investigated. The dual culture assay was accomplished to elucidate existence of antibiotics. In this assay, any antagonistic bacteria did not inhibit growth of six important fungal plant pathogens, suggesting that these antagonists do not produce antibiotics. root surface or rhizosphere soil colonizations were examined with spontaneous rifampicin-resistant mutants equal to antagonistic ability of wild types. KJ2C12 colonized consistently rhizosphere soil while yellowish colonies of KJ1R5 and KJ9C8 well colonized root surfaces and rhizosphere soil. Total microbial activity in pots treated with the antagonistic bacteria was measured using fluorescein diacetate hydrolysis. total microbial activity of three antagonistic bacteria treatments was significantly higher than that of buffer-treated control until 4days after treatment. However, total microbial activity of treatment of three antagonistic bacteria decreased after 7 days. These results indicate that the antagonistic bacteria, KJ1R5 and KJ9C8 colonized and protected roots well against Phytophthora blight of pepper through competition of infection courts, especially competitions.
This study was to examine the efficacy of a root-dipping application of antagonistic bacterial strains for the control of Phytophthora blight of pepper caused by P. capcisi, and to evaluate their plant growth-promoting effects in the field in 2005 and 2006. The candidate antagonistic rhizobacterial strains CCR04, CCR80, GSE09, ISE13, and ISE14 were treated by dipping plant roots with bacterial suspensions prior to transplanting. The candidate rhizobacterial strains CCR04, CCR80, GSE09, and ISE14 significantly (P=0.05) reduced the disease incidence and the area under the disease progress curves when compared to buffer-treated controls in at least a year test. The metalaxy l(fungicide-treated control) resulted in one of the lowest disease incidences among the treatments in both years. Moreover, the strains CCR04, CCR80, GSE09, and ISE13 significantly (P=0.05) increased the fruit weights and/or numbers of peppers in at least a year test compared to the buffer-treated controls. These results suggest that the antagonistic rhizobacterial strains CCR04, CCR80, and GSE09 could be efficient biocontrol agents by controlling Phytophthora blight of pepper and promoting the plant growth when treated with root-dipping at transplanting.
본 연구는 국내 고추 주산지의 P. capsici의 균주에 대한 병원성과 균주별 역병 저항성 유전 양식을 구명하고자 수행하였다. 이병성 재료 '#308'과 역병 저항성 재료 'CM334' 및 이들의 $F_1$, $F_2$ 그리고 'Kataguma'(Sakata Korea) 고추 총 5종의 공시 재료에 이천, 음성, 부안, 임실, 영양 지역에서 수집한 P. capsici 각각의 균주와 국립농업유전자원센터에서 분양받은 PA-159(KACC No. 40482)를 포함하여 총 6종의 고추 P. capsici 균주를 사용하여 접종하였다. 접종 농도는 $1{\times}10^5spores/ml$로 관주 접종하였고 이들의 기내 특성, 이병률, $F_2$ 후대 집단의 역병저항성 분리 기대비를 분석하였다. 이병성 재료 '#308'과 저항성 'CM334', $F_1$의 비분리세대는 균주별 군내 비교에서는 각각 고추 역병의 발병도는 4.94-5.00, 1.00-1.07, 1.01-1.08을 보여 P. capsici 균주별 군내 비교에서 공시재료간 역병 저항성 차이는 명확히 구분할 수 있다. 또한 $F_2$ 분리세대의 역병 발병도의 경향은 1.79-2.31을 보여 P. capsici 군내 비교의 차이가 없고 저항성과 이병성 재료간에 유의한 차이를 보여 본 연구에서 사용된 6종의 P. capsici 균주 모두 역병 저항성 검정을 위한 균주로 활용 가능한 것으로 나타났다. 하지만 $F_2$ 분리세대의 균주별 군간 비교에서 PA-159 균주를 중심으로 이천 균주, 부안 균주, 임실 균주가 포함된 집단과 이보다 높은 병원성을 지닌 영양 균주와 음성 균주로 구분되었다. 각 균주별 $F_2$ 세대의 역병 저항성에 대한 분리 기대비를 분석하였는데, PA-159 균주는 3:1 또는 9:3:3:1의 분리비를 보여 1-2개의 유전자가 관여하는 것으로 나타났다. 반면 음성 균주와 영양 균주는 11:5, 이천 균주는 12:3:1의 분리비를 보여 유전자간 상호작용이 있는 것으로 나타났다.
아인산의 고추 토마토 역병 및 노균병에 대한 방제 효과를 성체 식물체를 이용하여 온실에서 검정한 결과, 고추 역병의 경우 $1,408{\mu}g$ a.i./mL ($H_{3}PO_{3}$) 농도 처리에서 91%와 80%의 예방 및 치료효과를 보였다. 토마토 역병의 경우는 $1,408{\mu}g$ a. i./mL 처리에서 각각 63.4%와 13.0%의 예방 및 치료효과를 보여 고추 역병에 비해 효과가 저조하였다. 토마토 역병균의 유주자낭의 밀도가 $1{\times}10^{3}{\sim}1{\times}10^{4}/mL$일 경우 방제 효과가 높았다. 고추역병균에 대한 약제지속효과에 있어서 아인산은 경엽처리 4일 후에도 94%의 높은 방제 효과를 보여 대조약제인 포롬 수화제에 비해 효과가 지속됨을 알 수 있었다. 오이 노균병에 대해서는 $1,408{\mu}g$ a.i./mL 처리는 82와 62%의 예방 및 치료효과를 보였다. 아인산의 경엽처리는 식물의 생육을 촉진시키는 것으로 나타났다.
1997~1998년에 무인기상관측장비(AWS)로부터 얻어진 기상자료와 고추 역병 발병과의 상관관계를 기초로 하여 고추역병 발병모형들을 작성하였다. 그 중에서 $R^2$값이 가장 높은 모형을 이용하여 AWS 시스템기상 파일을 입력받아서 발병률을 추정해주는 컴퓨터 시스템(PEPBLIGHT)을 구축하였다. 이 컴퓨터 시스템은 쉽게 무인기상관측장치로부터 기상 자료를 입력받을 수 있으며, 다른 기종의 무인기상관측장치와 다른 발병예측모형으로 이용할 경우에도 호환성이 있도록 하였다. 또한 AWS 미기상 자료를 SAS 입력자료로 사용하기에 적합한 형태로 변환해 파일로 저장해 주는 기능도 가지고 있다. 국내에서 처음으로 개발된 고추 역병 예찰 프로그램인 PEPBLIGHT는 MS사의 윈도운영체제로 운영되는 PC에서 사용할 수 있기 때문에 농가 수준에서도 이용할 수 있을 것이다.
A promising biocontrol agent, A2l-4, against Phytophthora blight of pepper was selected from 351 bacterial isolates collected from rhizosphere soils and roots of onion (Allium fistulosum L.). The isolate A21-4 was identified as Serratia plymuthica based on its 16S rRNA sequence and key characteristics as compared with that of an authentic culture of S. plymuthica (ATCC No. 6109D01). The isolate readily colonized on roots of various crops including pepper when inoculated on seed and not. Strain A2l-4 showed narrow spectrum of antibiotic activity, as revealed in its strong inhibitory activity to the genera Pythium and Phytophthora, but not to Fuasrium and Rhizoctonia. In pot experiments, none of the pepper seedlings treated with A2l-4 were infected by Phytophthora capsici, while 86% of the control plants were killed by the pathogen.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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