에탄을 전화반응 및 MTBE (methyl t-butyl ether)분해반응을 통하여 헤테로폴리산 촉매가 지니는 표면 및 내부 산점의 역할과 형성에 대하여 살펴 보았다. 12-텅스토인산에서 에탄올 탈수반응을 수행할 경우 디에틸에테르는 표면산점에서 생성되며 에틸렌은 촉매 내부산점에서 생성된다. 물은 산점을 강화하는 역할을 하지만 유기염기의 경우 내부 산점을 약화시킨다. 금속염의 산점 형성은 결정수의 가수분해 혹은 금속의 부분적 치환에 따른 양성자에 기인하며 수소로 처리할 경우 산점이 재생되었다. 또한 산 특성 제어를 통하여 선택적 산화반응 촉매로서의 헤테로폴리산 설계가 가능하다.
We report the existence of new type of phosphatidylcholine-hydrolyzing phospholipase D (PLD), which has been characterized and partially purified in the scuticociliate, Uronema marinum. The enzyme from partial purification showed that it was existed in membrane fraction and was a neutral PLD, which catalyzed both transphosphatidylation and hydrolysis reaction. The activity of partially purified membrane-bound PLD was also found to be optimal at pH 7.0-7.5 for 2 hours at 37℃ and depended strictly on the presence of Ca2+ (2.5 mM) and Mg2+ (1.6 mM). Immunoblot analysis indicated that the enzyme was distinct from hPLD1 (human PLD1) and hPLD2 (human PLD2) because it was not recognized by a polyclonal antibody raised to the 12 terminal amino acid of these enzymes. We also found that the membrane-bound PLD is a PIP2-dependent PLD and that GTP-binding proteins are not implicated in the regulation of this enzyme: This enzyme activity is markedly stimulated by phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate (PIP2) but not by the small G-protein Arf and GTPrS. In addition, this enzyme was capable of hydrolyzing phosphatidylcholine (PC) but not phosphatidylethanolamine (PE), implying that PC was a preferred substrate.
구름버섯 자실체에서 분리된 항응고성 다당류의 혈액응고 저해기작을 검토하였다. 항응고성 다당(CV-40-Va-1)은 vWF의 활성을 감소시킴으로써 혈소판응집을 억제시키는 것으로 나타났으며, 혈액응고인자중 thrombin뿐만이 아니라 내인성경로의 factor VII, IX, XI, XII의 활성 또한 억제 하였다. 그러나 CV-40-Va-1의 항응고 활성은 thromin에 직접 작용하는 것이 아니라 antithrombin III 의존적 활성을 보였다. Sulfation에 의하여 CV-40-Va-1의 항응고활성의 증가와 다당의 desulfation시 상반된 결과에서 CV-40-Va-1의 황산기가 항응고활성의 중요한 인자임을 알 수 있었다. CV-40-Va-1을 TFA로 부분가수분해하여 얻은 획분들(Fr.I, Fr.II)에서는 항응고 활성이 감소하였으나 분자량 1,000정도로 추정되는 획분(Fr.II)은 오히려 혈소판응집을 강력하게 억제하였다.
Keratinases are exciting keratin-degrading enzymes; however, there have been relatively few studies on their immobilization. A keratinolytic protease from Chryseobacterium sp. kr6 was purified and its partial sequence determined using mass spectrometry. No significant homology to other microbial peptides in the NCBI database was observed. Certain parameters for immobilization of the purified keratinase on chitosan beads were investigated. The production of the chitosan beads was optimized using factorial design and surface response techniques. The optimum chitosan bead production for protease immobilization was a 20 g/l chitosan solution in acetic acid [1.5% (v/v)], glutaraldehyde ranging from 34 g to 56 g/l, and an activation time between 6 and 10 h. Under these conditions, above 80% of the enzyme was immobilized on the support. The behavior of the keratinase loading on the chitosan beads surface was well described using the Langmuir model. The maximum capacity of the support ($q_m$) and dissociation constant ($K_d$) were estimated as 58.8 U/g and 0.245 U/ml, respectively. The thermal stability of the immobilized enzyme was also improved around 2-fold, when compared with that of the free enzyme, after 30 min at $65^{\circ}C$. In addition, the activity of the immobilized enzyme remained at 63.4% after it was reused five times. Thus, the immobilized enzyme exhibited an improved thermal stability and remained active after several uses.
We have isolated a water-extracted novel regulator for blood coagulation from an earthworm, Lumbricus rubellus. As a folk remedy, the earthworm has been known to facilitate blood circulation. After complete heat inactivation of endogenous proteases in the earthworm, an anticoagulant(s) was purified through ammonium sulfate fractionation and three consecutive gel permeation chromatography of Sephacryl S-300, Sephadex G-75, and G-150 by measuring activated partial thromboplastin time (APTT) The anticoagulant was further purified to 2,800 fold with a C4 reversed-phase HPLC This activity was stable under heat ($100^{\circ}C$ for 30 min) and acidic conditions (0.4 N HCl). The effects of this partially purified anticoagulant on thrombin were observed with various substrates such as N${\alpha}$-benzoyl-DL-arginine-p-nitroanilide (BApNA), H-D-phenylalanyl-L-pipecoyl-L-arginine-p-nitroanilide (S-2238), N${\alpha}$-p-tosyl-L-arginine methyl ester (TAME), and fibrinogen as a natural substrate. Only TAME hydrolysis, due to an esterase activity of the enzyme, was inhibited among the chromogenic substrates. In addition, the anticoagulant not only inhibited the conversion of fibrinogen to fibrin but also prolonged the fibrin clot formation monitored with the in vitro coagulation test. Based on these observations, we suggest the significance of measuring the ability of antithrombotic drugs to inhibit the esterase activity of thrombin. In this report, it was also shown that the earthworm indeed contained a water-extractable, heat- and acid-stable anticoagulant which could be used as a novel antithrombotic agent.
By varying groups on biologically active molecules, it is possible to produce analogues which sometimes inhibit the action of the parent compound. Such is true of taurine(${\beta}$-amino-ethane sulfonic acid)as an analogue of ${\beta}$-alanine and of pantoyl taurine for pantothenic acid. It seemed possible that the sulfonic acid analogues of amino acids built into peptides might possibly produce inhibition of the parent peptide. Tauryl-L-histidine was selected to prepare as an analogue of carnosine(${\beta}$-alanyl-L-histidine). There were several reasons for this choice. Camosine causes a slight contraction of isolated uterine muscle and inhibition of this action can be easily tested. Also, taurine, being a ${\beta}$-amino sulfonic acid, is much more stable than the ${\beta}$-amino sulfonic acids. Phthalyl tauryl-L-histidine methyl ester was prepared by condensing phthalyl tauryl chloride with histidine methyl ester in chloroform. The yields were quite low possibly due to reaction between the acid chloride and the imidazole of histidine. Approximately 50 per cent yield of crude amorphous product was obtained, but upon purification by crystallization they yielded only 25 percent of a pure product. The methyl ester was removed by acid hydrolysis to prevent partial cleavage of the phthalyl group. Crystalline tauryl histidine was then obtained from this acid by removal of the phthalyl group by hydrazinolysis. Tests for inhibition were carried out by comparing the action of camosine on isolated uterine muscle before and after tauryl histidine had been added to the bath surrounding the muscle strip. Only in very high relative concentrations of tauryl histidine was there any demonstrable inhibition.
Xylanase have been used to convert the polymetric xylan into fermentable sugars from the production of ethanol and xylitol from plant biomass. The aim of this study was to isolate and identify xylanolytic bacterium from herbivore feces and was to used the xylanase for enzymatic hydrolysis of biomass. Xylanolytic strains were isolated from 59 different feces of herbivores from Seoul Grand Park located in Gwacheon Gyeonggi-do. The xylanolytic strains were selected by congo red staining and DNS method. Total 67 strains isolated from the herbivores feces were tested for xylanase activity. Among the strains, H10-1, which has the highest xylanase activity, was isolated from feces of Ceratotherium simum. The H10-1 strain was identified as Bacillus pumilus based on its morphological/biochemical characteristics and partial 16S rDNA gene sequences. Culture conditions of B. pumilus H10-1 such as initial medium pH, incubation temperature and incubation time were optimized for maximum xylanase production. And also xylanase produced by B. pumilus H10-1 was applied for the saccharification of Miscanthus sacchariflorus cv. 'Geodae 1', which was pretreated with 1.5M NaOH. The optimized culture conditions of B. pumilus H10-1 were pH 9, $30^{\circ}C$ incubation temperature, and 7 day incubation time, respectively. This xylanase activity under the optimized conditions was $20.4{\pm}3.3IU$. The crude xylanase produced by B. pumilus H10-1 was used for the saccharification of xylan derived from pretreated 'Geodae 1'. The saccharification conditions were $50^{\circ}C$, 200 rpm, and 5 days. Saccharification efficiency of pretreated 'Geodae 1' by B. pumilus H10-1 was 8.2%.
발효유제품, 김치, 및 신생아 분변 등에서 유산균을 분리하여 isoflavone 전환 능력을 평가하였다. 유산균 중 높은 수준의 $\beta$-glucosidase 활성을 보인 균주는 Enterococcus sp. 77, L. paracasei, Lactobacillus sp. 712, L. brevis ATCC 8287, Lactococcus sp. KU107, L. acidophilus KCNU, L. plantarum L155 등으로 나타났다. 이들 유산균에 대하여 유당 발효성을 평가하여 가장 우수한 유산균을 선발하여 API, 16S rDNA를 분석한 결과 Lactobacillus plantarum으로 동정되었으며 이 활성 유산균을 Lactobacillus plantarum YS712로 명명하였다. Lactobacillus plantarum YS712는 pH 2.5에서도 약 50% 이상의 강한 생존율을 보였으며 DPPH 라디칼 소거능도 95.8%로, 선발된 유산균 중 가장 높은 라디칼 소거능을 나타내었다. 이로써 Lactobacillus plantarum YS712는 발효식품 및 유제품에 다양하게 이용할 가치가 있다고 판단된다.
Pentastarch is a hydroxyethyl starch similar to hetastarch, but lower average molecular weight and fewer hydroxyethyl groups which result in enhanced enzymatic hydrolysis and faster renal elimination.This report was performed to compare the clinical efficacy and safety of 10 % pentastarch[Pentaspan , group I] for plasma volume expansion after open heart surgery with that of 5% albumin[Plasmanate, group II]. There were no statistically significant differences between the group I [n=18] and group II [n:19] in the preoperative parameters [age, sex, body weight] and operative parameters[bypass time, aorta cross clamping time]. During the first 24 hours after arrival of the patient in the surgical intensive care unit, colloid solution [500--1000 ml] was infused to maintain left atrial pressure of more than 8 mmHg, or cardiac index of 2.0 L/min/M2 of more. In results, there were 3 complications of hypotension immediately after infusion of 5 % albumin solution and 2 among the 3 patients were excluded for the study. However there was no complication after infusion of 10 % pentastarch solution. Hemodynamic responses to infusion was similar for both groups, although in group I a greater increase in both left atrial pressure[mean 1.8 versus 0.7 mmHg, p< 0.05] and right atrial pressure [mean 2.2 versus 1.7 mmHg, p < 0.05] was observed during infusion of the first 500 ml. There were no significant differences in any of the measured respiratory parameters[PaO2, intrapulmonary shunt, and effective lung compliance]. Homodilution with colloid significantly reduced hemoglobin [mean 1.2 versus 0.8 gm/dl], and serum protein and albumin level[total protein;4.8$\pm$ 0.5 versus 5.2 $\pm$0.5 gm/dl, p < 0.05: albumin: 3.2 $\pm$0.4 versus 3.6 $\pm$0.6 gm/dl, p < 0.05] by 6:00 AM on 1 day postoperatively, however there were no significant differences on 7 day postoperatively. The mean serum colloid osmotic pressure and osmolarity was similar in both group.There were no abnormal findings of liver function and kidney function in all the patients. There were no significant between-group differences in bleeding time, platelets, prothrombin time, activated partial thromboplastin time and amount of chest tube output measured on 1st and 7th postoperative day. These findings demonstrated that 10% pentastarch is more effective and safe for plasma volume expension than 5 % albumin solution with no adverse effects on coagulation. Also 10 % pentastarch is less expensive than 5 % albumin and it would appeare to be a reasonable first choice for plasma volume expansion.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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