Lactobacillus sporogenes를 NTG로 처리하여 rifampicin에 내성인 돌연변이 균주를 얻었으며, 이중 58 종이 rifampicin에 현저한 내성을 보였다. 9종의 mutants를 선발하여 그 생화학적 특성을 검토한 결과, 포자형성능, 산생성능, E. coli 생육억제능 면엣 parent와 유사한 특성을 나타내었다. In vitro 시험을 통해ㅐ, 내성균주들에 의해 rifampicin이 불활성화 되지 않음이 밝혀졌다. 따라서 이들 mutants를 유산균 제제원으로 사용할 수 있으며, 그 제제는 rifampicin과 병용투여시, 효과적인 정장제로 사용될 수 있을 것으로 사료된다.
Listeria monocytogenes is a foodborne pathogen of considerable genetic diversity with varying pathogenicity. Initially, we found that the strain M7 was far less pathogenic than the strain Lm850658 though both are serovar 4a strains belonging to the lineage III. Comparative genomic approaches were then attempted to decipher the genetic basis that might govern the strain-dependent pathotypes. There are 2,761 coding sequences of 100% nucleotide identity between the two strains, accounting for 95.7% of the total genes in Lm850658 and 92.7% in M7. Lm850658 contains 33 specific genes, including a novel 20K prophage whereas strain M7 has 130 specific genes, including two large prophages (38K and 44K). To examine the roles of these specific prophages in pathogenicity, the 20K and 38K prophages were deleted from their respective strains. There were virtually no differences of pathogenicity between the deletion mutants and their parent strains, although some putative virulent factors like VirB4 are present in the 20K region or holin-lysin in the 38K region. In silico PCR analysis of 29 listeria genomes show that only strain SLCC2540 has the same 18 bp integration hotspot as Lm850658, whereas the sequence identity of their 20K prophages is very low (21.3%). The 38K and 44K prophages are located in two other different hotspots and are conserved in low virulent strains M7, HCC23, and L99. In conclusion, the 20K and 38K prophages of L. monocytogenes serovar 4a strains Lm850658 and M7 are not related to virulence but contribute to genetic diversity.
A study was conducted to investigate the characteristics of segregation and alcohol fermentation of intergeneric fusants. The protoplast fusion of both Pichia stipitis CBS 5776 and Saccharomycess cerevisiae STV 89 was carried out. The fusion frequency was $5\times10^{-8}$ and among fusants selected, a fusant F5 showed the best results in ethanol production by sucrose and xylose fermentations. The performance of xylose fermentation by this fusant was better than that of P. stipitis CBS 5776 and fusant F5 exhibited sucrose fermentation patterns intermediate to the two parent strains. The fusant F5 was segregated into a pair of parental strains during the several culture passages. In the average, 91$%$ of colonies had a similar characteristics of P. stipitis while 7$%$ of colonies resembled S. cerevisiae. Only 2$%$ of colonies had the characteristics of the original fusants. At the sixth passage, all segregants resembled P. stipitis. From these results it is suggested that intergeneric protoplast fusion led to an integration of S. cerevisiae genes, rather than whole chromosomes, within the entire genome of P. stipitis.
The protoplast formation and intergeneric protoplast fusion between Gliocladium virens and Trichoderma harzianum were attempted to obtain fusants. Protoplast formation was the most effective when the strains were treated with concentration of 5 mg/ml of Novozyme 234 and Cellulase at $25^{\circ}C$ for 3 hours in phosphate buffer, pH 6.5, supplemented with 0.6 M sorbitol as osmotic stabilizer. Auxotrophic mutants of G. virens G88 did not grow in minimal medium and benomyl resistant T. harzianum T95 from wild types, however, was selected by treatment with UV light as genetic marker to isolate fusants. When the intergeneric protoplast fusion between G. virens G88 and T. harzianum T95 was carried out using 30% PEG 4000 containing 10 mM $CaCl_{2}$, and 50 mM glycine (pH 8.5) as fusogenic agent at $25^{\circ}C$ for 10-15 min, the fusion frequency was $0.8{\times}10^{-4}$. Fusants obtained from intergeneric protoplast fusion were spontaneously segregated into va rious strains by continous culture on complete medium. Several intergeneric hybrids were classified into three types: parent-like hybrids, segregants, and recombinants.
Pyrethroid계 살충제인 cypermethrin과 carbamate계 살충제인 pirimicarb를 공시하여 실내 감수성계통 복숭아혹진닷물(Myzus persicae)을 인위적으로 루대도태한 후, 저항성 발달속도와 정도를 조사하고, 이들 저항성 계통의 타살충제에 대한 교차저항성 유무와 그 정도를 검토하였다. 저항성 발달속도는 cypermethrin 20세대 도태계통에서 도태전에 비하여 20.5차 증가하였으나, pirimicarb 20세대 도태계통에서는 3.2배 증가에 그쳐 살충제 종류에 따라 큰 차이를 보였다. Cypermethrin 도태계통은 acephate와 pirimicarb에 대해서 , pirimicarb 도태계통은 acephate와 cypermethrin에 대해서 교차저항성을 나타내었다. 그러나 cypermethrin, pirimicarb 도태계통은 demeton-S-methyl에 대해서 비교우저항성을 나타내었다.
For the improvement of the L-lysine productivity of Brevibacterium flavum and Corynebacterium glutamicum, fusants were induced by interspecific protoplast fusion of Bacillus subtilis with C. glutamicum and B. flavum. The following results were obtained through protoplast formation of strains condition of protoplast fusion, characteristics of the fusants, and the productivity of lysine form starch. B. flavum BF-5 and C. glutamicum protoplasts were made by the treatment of 0.3unit/$m\ell$ of penicillin G at the early stationary growth phase for 2 hours followed by incubation with 10mg/$m\ell$ of lysozyme at 37$^{\circ}C$ for 120 min. When a mixture of the protoplast was treated with 30% PEG(M.W.6,000) solution containing 50mM CaCl2 at optimal conditions, the intergeneric fusion frequency between protoplasts of C. glutamicum CG-2 and B. subtilis BD 224 was 7.1${\times}$105. The genetic properties on the L-lysine producing fusants were compared with those of parental strains. As a results, the intergeneric fusants were completed in each auxotrophic requirement, resistances for S-(2-amino-ethyl)-L-cysteine and kanamycine were confirmed. And one of fusants selected, FBB-41 were found to be genetically stable fusants. The aspartokinase activity of FBB-41 strain increased than that of the parent strain.
본 연구는 품질이 우수한 미린을 생산하기 위하여 미린의 생산에 필요한 koji제조 균주를 검색하여 이들 중 ACPase활성이 높은 균주는 Aspergillus oryzae 9와 Aspergillus shirousamii IFO 6082를 얻었다. 이 두 균주는 UV조사에 의하여 변이주인 Aspergillus oryzae 9-12와 Aspergillus shirousamii IFO 6082-60을 얻었는데 acid carboxypeptidase의 활성은 친주에 비하여 2.6배 높았다. 이 균주로 재래식과 개량식 방법으로 미린을 제조한 결과, 총당, 환원당 및 충질소의 양은 비슷하였으나 아미노태질소는 재래식보다 개량식이 높았고 수율도 높았다. 미린의 품질에 지대한 영향을 미치는 혼탁의 형성은 개량식에서 변이주로 만든 미린에서는 나타나지 않았다.
표고골목 해균인 주홍꼬리버섯을 방제하기 위해 저항성 표고균주 선발을 시도하였다. 저항성 표고균주 선발 시험에서, 사용된 77개 균주 중 67개 균주가 저항력을 가지는 것으로 확인되었다. 이들 67개 균주 중 KFRI 5를 포함한 13개 균주가 주홍꼬리버섯균의 접근을 막는데 가장 큰 영향을 미쳤고 KFRI 180을 포함한 7개 균주가 주홍꼬리버섯의 영역으로 가장 많이 침범했다. 교잡을 통해 만든 31개 균주 중 KFRI 537을 포함한 8개 균주가 주홍꼬리버섯균의 접근을 막는데 가장 큰 영향을 미쳤고 KFRI 545를 포함한 4개 균주가 주홍꼬리버섯의 영역으로 가장 많이 침범했다. 온도와 접종순서의 변화에 따른 각 균주의 저항력 차이를 확인하기 위해 PDA 평판배지와 상수리나무톱밥을 넣은 시험관배지를 사용했다. PDA 평판배지 시험결과, 대부분의 처리구에서 KFRI 137은 주홍꼬리버섯에 대해 뛰어난 접근 억제력을 보였고 KFRI 180은 뛰어난 침범력을 보였다. 교잡균인 KFRI 545, 546, 547은 모균주들인 KFRI 488과 405에 비해 높은 저항력을 보였다. 시험관배지 시험결과, 표고균과 주홍꼬리버섯균이 대치를 하는 시점부터 $25^{\circ}C$에 두었을 때 모든 균주가 높은 저항력을 나타냈다. KFRI 393은 $25^{\circ}C$에서 지속 배양할 때 다른 균주에 비해 높은 저항력을 나타냈다. 또한 모든 균주들에서, $25^{\circ}C$ 배양 후 두 균이 대치를 할 시기에 $14^{\circ}C$로 옮겨 배양한 처리구는 다른 처리구들에 비해 낮은 저항력을 보였다. 이때의 저항력 정도는 각 균주 최고치의 7-20%에 불과했다. 또한 KFRI 259는 PDA 평판배지에서와 달리, 주홍꼬리버섯의 영역을 침범했다.
유산균주의 균주개량방법의 일환으로 protoplast fusion 방법을 사용하여 lincomycin에 내성을 나타내는 Lactobacillus casei KCTC 1121과 rifampicin에 내성을 나타내는 Lactobacillus delbruckii JK-414의 protoplast 형성과 재생, 융합에 대한 조건 및 융합주의 생리학적 성질 등을 검토하였다. Lactobacillus case와 Lactobacillus delbrueckii JK-414는 삼투압 안정제로 sucrose가 함유된 protoplast forming buffer에서 5$\mu g$/ml의 mutanolysin 으로 $42^{\circ}C$, 15분간 처리 했을 때 protoplast 형성율이 높게 나타났다.
표고 원목재배용 중저온성 품종을 육성하기 위해 자실체 발생온도가 낮은 모본균주를 Di-mon 교배한 후 실증시험에서 우수 계통을 최종 선발하여 '흥화1호'를 품종보호출원하였다. '흥화1호'의 버섯 발생온도는 13.3℃이며, 발생온도 범위는 6.4~20.2℃로 모본균주와 같은 중저온성 품종으로 확인되었다. 또한 최적 균사 생장온도는 25℃에서 61.9±2.10 mm를 생장해 모본균주보다 우수한 생장력을 보였다. '흥화1호'의 자실체 형태는 모본균주의 특성이 많이 유전되어 형태적으로는 유사한 경향을 보였지만, 갓 직경(57.8±8.31 mm)과 색깔(brown), 건조중(20.1 kg/m3)은 모본균주보다 더욱 향상되어 나타났다. 3년간의 생표고 생산성은 '흥화1호'가 113.8 kg/m3를 생산해 모본균주인 JMI 10047과 JMI 90021의 92.5 kg/m3, 66.4 kg/m3 보다 높게 나타났다. 또한 버섯 발생형은 봄·가을 집중발생형으로 나타났다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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