• Biomolecules & Therapeutics
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• 제23권1호
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• pp.84-89
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• 2015

We investigated the question of whether 7-oxygenated cholesterol derivatives could affect inflammatory and/or immune responses in atherosclerosis by examining their effects on expression of IL-23 in monocytic cells. $7{\alpha}$-Hydroxycholesterol ($7{\alpha}OHChol$) induced transcription of the TLR6 gene and elevated the level of cell surface TLR6 protein in THP-1 monocytic cells. Addition of an agonist of TLR6, FSL-1, to TLR6-expressing cells by treatment with $7{\alpha}OHChol$ resulted in enhanced production of IL-23 and transcription of genes encoding the IL-23 subunit ${\alpha}$ (p19) and the IL-12 subunit ${\beta}$ (p40). However, treatment with 7-ketocholesterol (7K) and $7{\beta}$-hydroxycholesterol ($7{\beta}OHChol$) did not affect TLR6 expression, and addition of FSL-1 to cells treated with either 7K or $7{\beta}OHChol$ did not influence transcription of the genes. Pharmacological inhibition of ERK, Akt, or PI3K resulted in attenuated transcription of TLR6 induced by $7{\alpha}OHChol$ as well as secretion of IL-23 enhanced by $7{\alpha}OHChol$ plus FSL-1. Inhibition of p38 MAPK or JNK resulted in attenuated secretion of IL-23. These results indicate that a certain type of 7-oxygenated cholesterol like $7{\alpha}OHChol$ can elicit TLR6-mediated expression of IL-23 by monocytic cells via PI3K/Akt and MAPKs pathways.

• Journal of Microbiology
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• 제40권1호
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• pp.43-50
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• 2002

A cluster of genes encoding the pyruvate dehydrogenase complex (PDC) of Streptomyces seoulensis, a Gram-positive bacterium, was cloned and sequenced. The genes of S. seoulensis consist of four open reading frames. The first gene, lpd, which encodes a lipoamide dehydrogenase, is followed by pdhB encoding a dihydrolipoamide acetyltransferase (E2p), pdhR, a regulatory gene, and pdhA encoding a pyruvate dehydrogenase component (Elp). Elp had an unusual homodimeric subunit, which has been known only in Gram-negative bacteria S. seoulensis E2p contains two lipoyl domains like those of humans and Streptomyces faecalis. The pdhR gene appears to be clustered with the structural genes of S. seoulensis PDC. The PdhR-overexpressed S. seoulensis howed growth retardation and the decrease of Elp, indicating that PdhR regulates the function of PDC by repressing the expression of Elp. A strain of Streptomyces licidans overexpressing S. seoulensis PdhR showed a significant decreasein the level of actinorhodin, implying a regulatory role for Streptomyces PDC in antibiotic biosynthesis.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제18권3호
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• pp.268-272
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• 1990

Zymomonas mobilis의 알코올 탈수소 효소 유전자가 클로닝된 대장균 형질전환체의 세포 추출물로부터 알코올 탈수소 효소를 분리정제하였다. 형질전환된 Escherichia coli(pADS93)가 생산하는 Z.mobilis 유전자 유래의 알코올 탈수소 효소는 분자량이 40,000인 동일한 4개의 subunits로 구성된 tetramer임이 밝혀졌으며 이것은 Z.mobilis의 세포 추출물로부터 분리한 알코올 탈수소 효소와 동일하였다. 이 효소의 정반응(ethanol 산화)은 pH의 영향을 많이 받으며 pH는 10.0이었고 역반응(acetaldehyde 환원)에서는 최적의 pH가 7.5-8.5 이었지만 pH에 따라 크게 영향을 받지는 않았다.

• 미생물학회지
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• 제36권1호
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• pp.26-32
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• 2000

Toluene, phenyl 등의 분해균주인 Burkholderia cepacia G4로부터 tomB 유전자를 클로닝하여 얻은 재조합 균주 E. coli CNU312로부터 catechol 2,3-dioxygenase를 정제하여 효소학적 특성을 조사하였다. Catechol 2,3-dioxygenase는 native 분자량이 약 140.4 kDa이었으며 4개의 동일한 35 kDa subunit로 구성된 homotetramer로 생각된다. Catechol의 $K_(m)$값과 $V_(max)$값은 372.6 $\mu$M과 39.27 U/mg이었으며, 1.56 mM 이상의 기질 농도에서는 활성이 감소되었다. 효소 활성의 최적 pH는 8.0이었으며, pH 7.0-8.0 범위에서 안정하였다. 최적 활성온도는 $40^{\circ}C$였으며, $60^{\circ}C$이상에서 완전히 활성을 상실하였다. 또한 $Fe^(2+)$, $Fe^(3+)$ 를 비롯한 대부분의 금속 이온에 의해 활성이 감소되었으며, $Mg^(2+)$, $K^(+)$에는 영향을 받지 않았다. 효소 활성부위를 알아보기 위해 화학변형제를 처리한 결과, tryptophan과 histidine이 효소 활성부위에 존재하는 것으로 추정된다. 그리고 10%의 유기용매에 안정성을 보이지 않았으며, $H_(2)$$O_(2)$, EDTA, ο-phenanthroline에도 활성이 감소되었다. 또한 2-mercaptoethanol, dithiothreitol, 그리고 ascorbic acid와 같은 환원제에 대해서도 안정성을 보이지 않았다. 이 효소는 catechol에 대해 높은 기질 특이성을 보였으며, 3-methylcatechol, 4-methylcatechol, 그리고 4-chlorocatechol에 대해 약간의 활성을 보였다. 그러나 2,3-dihydroxybiphenyl에 대해서는 거의 활성을 보이지 않았다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제24권3호
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• pp.282-289
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• 1996

2,3-DHBP dioxygenase was purified from E. coli CK1092 carrying the pcbC gene, which was cloned from 4-chlorobiphenyl-degrading Pseudomonas sp. P20. Purification of this enzyme was done by acetone precipitation, DEAE- Sephadex A-25 ion exchange chromatography, and preparative gel electrophoresis. The molecular weight of subunit was 34 kDa determined by SDS-PAGE, and that of native enzyme was about 270 kDa. It suggests that this enzyme consist of eight identical subunits. This enzyme was specifically active against only 2,3-DHBP as a substrate with 18 $\mu$M of Km value, but not catechol, 3-methylcatechol, 4-methylcatechol and 4-chlorocatechol. The optimal pH and temperature of 2,3-DHBP dioxygenase were pH 8.0 and 40-60$\circ$C. The enzyme was inhibited by Cu$^{2+}$, Fe$^{2+}$ and Fe$^{3+}$ ions, and was inactivated by H$_{2}$0$_{2}$2 and EDTA. The lower concentrations of some organic solvents such as acetone and ethanol don't stabilize the activity of 2,3-DHBP dioxygenase. The enzyme was completely inactivated by adding the reagents such as N-bromosuccinimide, iodine and p- diazobenzene sulfonic acid.

• 한국식품영양학회지
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• 제18권1호
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• pp.4-10
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• 2005

과요오드산-산화가용성전분은 Aspergillus awamori a-glucosidase의 pH 안정성을 증가시켰다. 40℃에서 두시간 항온시킨 결과, 과요오드산-산화가용성전분이 존재하지 않을 때의 효소는 pH 3∼7, 존재할 때의 효소는 pH 3∼9, 50℃에서 과요오드산-산화가용성전분이 존재하지 않을 때의 효소는 pH 3∼6, 존재할 때의 효소는 pH 3∼8 범위에서 안정하였다. 60℃에서는 과요오드산-산화가용성전분의 존재여부에 관계없이 효소는 pH 3∼6 범위에서 안정하였으나 pH 5와 6에서 과요오드산-산화가용성전분이 존재하면 효소의 잔존활성은 존재하지 않을 때보다 20% 더 높았다. 과요오드산으로 변형한 효소는 pH 9에서 활성이 70% 남았으나 변형하지 않은 효소는 남지 않아서 변형으로 안정성이 증가된 것으로 나타났다. 변형효소는 50℃에서 12%, 80℃에서 7%의 활성이 남았으나 변형시키지 않은 효소는 50℃에서 8%가 남고, 70℃이상에서는 남지 않았다. HPLC 분석 결과 pH 2 이하 및 9 이상에서는 효소의 서브유니트가 분리되고, 변성 중합되었다. 변형하지 않은 효소는 산성과 알칼리성 pH에서 변성되어 단백질의 구조가 무너졌지만 과요오드산-산화가용성전분이 존재하면 변성되지 않았다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제26권5호
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• pp.413-419
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• 1998

Acetaminophen 자화성 Pseudomonas sp.에 존재하는 aryl acylamidase[EC 3.5.1.13]는 ammonium sulfate fractionation, DEAE-Sephacel anion exchange chromatography, Phenyl-Sepharose CL-4B hydrophobic interaction chroamtography 및 Sephadex G-100 gel-permeation chromatography를 통해 순수 정제되었다. 정제된 효소는 SDS-PAGE상에서 분자량을 측정한 결과 56 kDa, Sephadex G-100 gel-permeation chromatography로 측정한 결과 57 kDa이었으며, 따라서 단일한 subunit로 구성된 효소이었다. 정제된 효소의 최대 활성을 위한 pH와 온도는 각각 pH 10.5와 4$0^{\circ}C$이였다. 5$0^{\circ}C$에서 30분간 처리시 34%의 잔존활성을 나타내었다. Acetaminophen과 4'-nitroacetanilide쉐 대한 Km값은 각각 0.10 mM과 0.11 mM 이었다.

• Journal of Microbiology
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• 제42권1호
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• pp.20-24
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• 2004

Cloned myo-inositol-1-phosphate synthase (INOS) of Drosophila melanogaster was expressed in Escherichia coli, and purified using a His-affinity column. The purified INOS required NAD$\^$+/ for the conversion of glucose-6-phosphate to inositol-1-phosphate. The optimum pH for myo-inositol-1-phosphate synthase is 7.5, and the maximum activity was measured at 40$^{\circ}C$. The molecular weight of the native enzyme, as determined by gel filtration, was approximately M$\_$r/ 271,000${\pm}$15,000. A single subunit of approximately M$\_$r/ 62,000${\pm}$5,000 was detected upon SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. The Michaelis ($K_{m}$) and dissociation constants for glucose-6-phosphate were 3.5 and 3.7 mM, whereas for the cofactor NAD$\^$+/ these were 0.42 and 0.4 mM, respectively.

• 미생물학회지
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• 제30권6호
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• pp.528-532
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• 1992

계면 활성제 특히 Triton X-100 의 첨가에 의해 ATP-의존성 효소의 subunit 인 Clp P 의 안정도를 높히고, 염의 첨가에 의한 효소 활성의 유지 정도와 Clp P 호소에 대한 생화학적 성질을 조사하였다. Clp A 가 가지고 있는 ATPase 활성을 나타내기 위하여서는 Clp P 의 단백질 분해 효소활성이 요구되며 Clp 효소의 다량체형성을 조사한 결과 ATP 가 존재하지 않을 경우에는 Clp A 와 Clp P 효소가 각각 용출하였으며 ATP 및 Mg 를 첨가하였을 때에는 complex 를 형성하여 분자량이 600,000 이상으로서 Clp P 효소는 Hexamer 로서 효소활성을 나타내며 Clp A 와 Clp P 의 다량체 형성이 요구되고 형성시에 ATP 가 관여하고 있는 것으로 나타났다.

• BMB Reports
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• 제31권5호
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• pp.492-497
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• 1998

Cu,Zn-superoxide dismutase (SOD) was purified from horseradish by using Mono Q and Superose 12 FPLC column chromatography. The native molecular mass of the purified enzyme was approximately 33 kDa, as determined by gel filtration. The subunit molecular weight, as estimated by SDS-PAGE, was 16 kDa. These results indicated that the native enzyme is a homodimer. We investigated the free radical-generating function of horseradish Cu,Zn-SOD by using a chromogen, 2,2'-azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonate) (ABTS) which reacts with ${\cdot}OH$ radicals to form $ABTS^{+{\cdot}}$ The formation of $ABTS^{+{\cdot}}$ was required for both active Cu, Zn-SOD and $H_2O_2$. The optimal pH for the free radical-generating activity of this enzyme was 6.0-8.0, and it retained about $40^{\circ}C$ of its maximum activity when exposed at $40^{\circ}C$ for 15 min. A neutral scavenger, ethanol, inhibited the $ABTS^{+{\cdot}}$ formation by horseradish Cu, Zn-SOD more effectively than that by the mammalian enzyme. These results suggest that the active channel of horseradish enzyme is slightly larger than that of the mammalian enzyme.