The protein p104 was first isolated as a binding partner of the Src homology domain of phospholipase C$\gamma$1, and has been shown to associate with p85$\alpha$, Grb2. The ectopic expression of p104 reduced cellular growth rate, which was also achieved with the overexpression of only the proline-rich region of p104. The proline-rich region of p104 has been found to inhibit the colony formation of platelet-derived growth factor BB-stimulated NIH3T3 cells and MCF7 cancer cells on soft agar. Mutagenesis analysis showed that the second and third proline-rich regions are essential for growth control, as well as for interaction with p85$\alpha$. Overexpression of p104 increased the level of the cyclin-dependent kinase inhibitor, $p27^{Kip1}$, and inhibited the activity of phosphoinositide 3-kinase (PI3K). In summary, p104 interacts with p85$\alpha$ and is involved in the regulation of $p27^{Kip1}$ expression for the reduction of cellular proliferation.
Shigella sonnei 는 인체의 장내 감염을 일으키는 병원균의 일종이며, 본 연구에 사용된 S.sonnei KNIH104S는 국내에서 쉬겔라증을 나타내는 환자로부터 분리하였다. S. sonnei KNIH104s의 염색체로부터 aspartate $\beta$-semial-dehyde dehydrogenase를 암호화하는 asd 유전자를 포함하는 1.7 kb BamHI 절편을 pBluescript SK(+) 벡터를 이용하여 클로닝하였으며 pSAB17이라 명명하였다. asd 결실돌연변이주인 E.coli $\chi$6097은 세포벽을 구성하는 중요한 성분인 DL-$\alpha$, $\varepsilon$-diaminopimelic acid가 없는 Luria-Bertani 배지에서 생장함을 확인하였다. 클로닝된 asd 유전자의 염기서열 분석결과 ATG 개시코돈 및 TAA 종결코돈을 지니는 1,104 bp 로 이루어져 있으며, 여기서 유추한 아미노산은 367개로 분자량 40.0 kDa 의 폴리펩타이드를 만들어내고 있다. 염기서열은 대장균의 asd 유전자와 한 부위에서 다르게 나타났지만 아미노산의 서열은 동일함을 알 수 있었다. 그리고 pBluescript SK(+) 벡터와 본 연구에서 클로닝된 asd 유전자를 이용하여 balanced-lethal vector인 pSKA47 및 pSKA47A를 제조하였다.
Park, Jong-Hwa;Kim, Wooil;Lee, Yong-Suk;Kim, June-Hyung
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제29권9호
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pp.1383-1390
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2019
In this study, we expressed cotA laccase from Bacillus subtilis on the surface of B. subtilis spores for efficient decolorization of synthetic dyes. The cotE, cotG, and cotY genes were used as anchoring motifs for efficient spore surface display of cotA laccase. Moreover, a $His_6$ tag was inserted at the C-terminal end of cotA for the immunological detection of the expressed fusion protein. Appropriate expression of the CotE-CotA (74 kDa), CotG-CotA (76 kDa), and CotY-CotA (73 kDa) fusion proteins was confirmed by western blot. We verified the surface expression of each fusion protein on B. subtilis spore by flow cytometry. The decoloration rates of Acid Green 25 (anthraquinone dye) for the recombinant DB104 (pSDJH-EA), DB104 (pSDJH-GA), DB104 (pSDJH-YA), and the control DB104 spores were 48.75%, 16.12%, 21.10%, and 9.96%, respectively. DB104 (pSDJH-EA) showed the highest decolorization of Acid Green 25 and was subsequently tested on other synthetic dyes with different structures. The decolorization rates of the DB104 (pSDJH-EA) spore for Acid Red 18 (azo dye) and indigo carmine (indigo dye) were 18.58% and 43.20%, respectively. The optimum temperature for the decolorization of Acid Green 25 by the DB104 (pSDJH-EA) spore was found to be $50^{\circ}C$. Upon treatment with known laccase inhibitors, including EDTA, SDS, and $NaN_3$, the decolorization rate of Acid Green 25 by the DB104 (pSDJH-EA) spore decreased by 23%, 80%, and 36%, respectively.
Lan, Dongming;Wang, Qian;Popowicz, Grzegorz Maria;Yang, Bo;Tang, Qingyun;Wang, Yonghua
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제25권11호
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pp.1827-1834
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2015
The SMG1 lipase from Malassezia globosa is a newly found mono- and diacylglycerol (DAG) lipase that has a unique lid in the loop conformation that differs from the common alpha-helix lid. In the present study, we characterized the contribution of three residues, L103 and F104 in the lid and F278 in the rim of the binding site groove, on the function of SMG1 lipase. Site-directed mutagenesis was conducted at these sites, and each of the mutants was expressed in the yeast Pichia pastoris, purified, and characterized for their activity toward DAG and p-nitrophenol (pNP) ester. Compared with wild-type SMG1, F278A retained approximately 78% of its activity toward DAG, but only 11% activity toward pNP octanoate (pNP-C8). L103G increased its activity on pNP-C8 by approximately 2-fold, whereas F104G showed an approximate 40% decrease in pNP-C8 activity, and they both showed decreased activity on the DAG emulsion. The deletion of 103-104 retained approximately 30% of its activity toward the DAG emulsion, with an almost complete loss of pNP-C8 activity. The deletion of 103-104 showed a weaker penetration ability to a soybean phosphocholine monolayer than wild-type SMG1. Based on the modulation of the specificity and activity observed, a pNP-C8 binding model for the ester (pNP-C8, N102, and F278 form a flexible bridge) and a specific lipid-anchoring mechanism for DAG (L103 and F104 serve as "anchors" to the lipid interface) were proposed.
Bacillus subtilis를 재조합이종 단백질 생산에 응 용하고 그 발현효율의 향상을 위하여, aprE 프로모 터를 모델계로서 이에 작용하는 전이상태 조절유전 자 변이와 포자형성변이의 영향을 살펴보았다. 사용 된 균주는 두 개의 프로테아제가 제거된 DB104이며, 조절인자 변이주는 $degU^h$와 hpr을 각각 활성인자와 억제인자로 선택하였고, 이중변이주는 DB104 ($\DeltaspoIIG(Pm) degU^h his^+$) 및 DB104($\DeltaspoIIG(Pm) \Deltahpr(Em)$) 를 제조하였다. 이에 목적유전 자연 aprE유전자를 재조합하여 변이에 의한 과발현 양상을 확인하였다. degUh 및 hpr 조절변이주는 야 생주와 비교하여 각각 약 7배 빛 약 2배의 발현효율 향상을 보여주었다. 이들 전이상태 조절유전자 변이 는 모두 목적유전자 복제 수의 증가에 따라 발현효 율의 감소를 나타내어 증폭된 목적유전자에 대한 조 절유전자의 희석효과(gene dosage effect)를 확인할 수 있었다. 이중변이주 DB104($\DeltaspoIIG(Pm) degU^h his^+$)::pMK101 및 DB104($\DeltaspoIIG(Pm) \Deltahpr(Em)$)::pMK101에서의 aprE 발현은 각각 약 10배 빛 3배의 발현증가를 가져와 aprE 발현에 대한 포자변이주 및 전이상태 조절유전자의 독립적인 부가효과를 확인하였다.
PDA-calcium phosphate 평판배지를 이용하여 경상남북도 일대의 토양으로부터 인산가용화능이 우수한 사상균을 분리하고 배양특성을 조사하였다. 최종적으로 분리한 인산가용화능이 우수한 사상균 PS-104 균주를 선발하여 형태적 특성을 조사한 결과 이 균주의 분생자는 비가지형으로 끝이 돌출되어 있으며, 균사가 격막으로 형성되는 등의 특징을 갖는 Aspergillus sp. PS-104 균주로 동정되었다. 이 균주의 인광석 분해능이 최대가 되는 최적 배양온도와 pH는 각각 $30^{\circ}C$와 pH 7.0이었다. 이와 같은 배양조건에서 tricalcium phosphate, aluminium phosphate, hydroxyapatite, 인광석 등의 난용성 인산염에 대한 이 균주의 인산가용화능을 살펴보면 최대 인산가용화능은 tricalcium-phosphate 처리구(1,900 ppm)에서, 최소 인산가용화능은 hydroxyapatite 처리구(320 ppm)에서 확인되었다. 또한 이 균주의 인산가용화능은 질소원으로 첨가한 ammonium 염보다 nitrate 염에서 높게 나타났다.
본 연구는 성조숙증 여아와 정상 발달 여아의 심리사회적 행동특성에 대한 조사를 실시하여 성조숙증과의 관련성을 파악하고 비교분석하여 성조숙증 예방 및 기초 자료를 제공하고자 함이다. 연구대상 조사기간은 2016년 6월 1일부터 2017년 2월 25일까지였으며, 연구의 대상자는 서울시 소재 어린이전문 H한의원과 S한의원에 성조숙증으로 내원한 환자군 여아 104명과 대조군 A그룹 104명, 지방 군단위 소재 초등학교 여아의 대조군 B그룹 104명으로, 성별과 연령을 짝지은 총 312명과의 비교를 통해 성조숙증 여아와 정상 발달 여아의 심리사회적 행동특성을 파악하고자 집단 간 특성을 t-test, ${\chi}^2test$, ANOVA분석을 통해 비교하고, 성조숙증의 영향요인은 이항로지스틱(Multinomial logistic)회귀분석으로 분석하였다. 연구결과 성조숙증에 미치는 주요 영향요인은 첫째, 행동특성의 식습관에서 고기류 섭취횟수(p<.05)와 외식빈도(p<.05)인 것으로 나타났다. 둘째, 행동특성의 일상생활에서 TV시청(p<.001)과 스마트폰 사용시간(p<.01), 수강학원 수(p<.05)인 것으로 나타났다. 셋째, 심리적 특성에서 정서상 및 신체상의 지수가 대조군에 비해 낮게 나타남으로써 병리를 더 지닌 것으로 도출되었다. 넷째, 사회적 특성에서 가족 및 친구관계의 지수가 대조군에 비해 낮게 나타남으로써 병리를 더 지닌 것으로 도출되었다. 따라서 증가하는 여아의 성조숙증에 대해 부모와 학교 나아가 사회적 관심이 중요하며 성조숙증에 대한 발생원인과 발생빈도를 밝히는 광범위한 연구수행이 필요하다.
본 연구는 사용 중인 칫솔의 관리법과 구강내 세균의 산생성도에 따른 칫솔의 세균량을 측정하여 비교한 후 올바른 칫솔 관리를 위한 교육자료를 개발하는데 기초자료로 제시하고자 한다. 건강한 20대 성인 50명의 1개월이상 사용 중인 칫솔을 수거하여 칫솔의 세균수와 pH를 측정하였다. 하루 칫솔질의 횟수가 4회인 경우 pH는 4.97로 가장 높았고 세균수는 42.16(104×CFU/ml)으로 가장 낮게 나타났으며 칫솔의 사용 교체 시기가 1개월인 경우 pH가 5.35로 가장 높았고 세균수는 19.80(104 × CFU/ml)로 가장 낮게 나타났다. 욕실에 보관한 경우 pH는 4.78로 가장 낮았고 세균수는 149.46(104 × CFU/ml) 가장 높게 나타났으며 유의한 차이가 있었다(p<0.01). 연구결과 칫솔의 세균을 차단하기 위해서는 가정에서 오염된 칫솔을 간단하게 살균할 수 있는 방법을 연구하고 개발해야 할 것이다. 또한 칫솔질 교육을 할 때 올바른 칫솔 세척 방법과 보관법에 대하여 교육을 할 필요가 있다고 생각된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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