The birth of the clone animals is influencing the frontier of research of animal biotechnology. It has effects on research of animal biotechnology itself by necessitating setting of new research subjects, modifications of the strategy of ongoing research projects, and challenges to schemes formerly considered impossible. In my talk, such topics including mass production of fertile ova and oocyte maturation will be discussed. (1) Oocytes are needed for the production of a clone by nuclear transplantation. Mitochondrial DNA inherited via the oocyte are involved also in the morphogenesis. Therefore, oocytes from the same animal must be used as recipients to produce genuine clones by nuclear transplantation. Experimenting on the assumption that selective oogenesis can be avoided, and apoptosis of oocytes can be prevented, by using ovarian angiogenic factos will be introduced. (2) It is important to clarify the factors of oocytes involving in reprogramming of somatic cells. Such factors are thought to be expressed in oocytes during oogenesis and oocyte maturation. Therefore, molecular mechanisms of oogenesis and oocyte maturation must be clarified extensively. Topics in this field including our recent advances will be discussed. (중략)
Oogenesis process of ovary produces a lot of undifferentiated cells. Especially, the radiation exposure of early immature cells in the process of growth to oocyte causes serious disabilities. This study examined the radiation damage mechanism of undifferentiated cells and organelles in oogenesis process, and the radioprotection after injection of alliin. The ultrastructure after 7Gy X-ray irradiation on the white rat was observed in the experiment. The results is as follows. It was observed that the nucleus membrane of an oogonium was damaged and vacuolated in the several parts after 15 days of irradiation. The damage of mitochondria membrane and flow in cytoplasm after 20 and 30 days was found in the oogonium. After 40 days observation, peroxidation of fat droplets was found and organelles were tangled each other in ovary tissue. The partial damage of nuclear membrane in oogonium past 15 days after injection of alliin was found, but decreased remarkably. Mitochondria, Golgi body, and rough endoplasmic reticulum were also clearly observed, therefore, radioprotection effects in alliin was confirmed partially.
The ultrastructure of germ cells and follicle cells during oogenesis, oocyte degeneration, reproductive cycle, and first sexual maturity in female Cyclina sinensis were investigated for clams collected from Simpo, Jeollabuk-do, Korea, by cytological and histological observations. Vitellogenesis occured by way of endogeous autosynthesis and exogenous heterosynthesis: vitellogensis occurred through a process of autosynthesis, which involves a combined activities of the Golgi complex, mitochondria, and rough endoplasmic reticulum. The process of heterosynthesis involved endocytotic incorporation of extraovarian precursors into the basal region of the early vitellogenic oocytes prior to the formation of vitelline envelope. The follicle cells appear to play an integral role in vitellogenesis and oocyte degeneration, functioning in phagocytosis and digestion of products originating from the degenerated oocytes: these functions can permit the transfer of yolk precursors needed for vitellogenesis. Follicle cells might have a lysosomal system for breakdown and might also resorb phagosomes in the cytoplasm for nutrient storage during oocyte degeneration.
노랑초파리의 난실에서의 단백질 합성을 난자형성과정의 단계별로 자기방사법을 이용하여 관찰하였다 단백질은 영양세포에서 난자형성 초기에 미약한 정도로 함성되는 것으로 나타나지만, 가장 활발하게 합성되는 세포는 여포세포이다. 난모세포와 영양세포에서는 단백질이 거의 합성되지 않고 있다. 여포세포에서 합성된 단백질은 Stage 10 이후의 단계에서만 난모세포로 이동하는 것으로 관찰되었다 난모세포에 괸만하게 분포된 은입자는 난자 형성을 위한 다양한 목적을 위해 여포세포로 부터 이입된 단백질로 짐작된다. 특히 난황립의 형성에 여포세포의 단백질이 최소한도 부분적으로 관여한다는 사실을 알 수 있었다.
This study was conducted to evaluate the effects of different volume ($100{\mu}l$ vs. 2 ml) of microdrop culture on B6D2F1 mice oogenesis. In the present study, B6D2F1/CrljOri $F_1$ mice were utilized in order to maximize oogenesis. Also we used TCM-199, Dulbecco's medified Eagle's medium (DMEM), embryo culture medium (Fertilization medium, Cleavage medium, Blastocyst medium), G series medium and One step medium. Blastulation rate was not different between groups ($58.4{\pm}2.9%$ vs. $61.2{\pm}4.8%$). Zona hatched rate ($38{\pm}15.4%$ vs. $27{\pm}3.4%$) and attached rate ($55{\pm}13.9%$ vs. $46{\pm}3.9%$) did not differ by the volume of culture media. Total cell numbers ($59.8{\pm}9.7$ vs. $70.3{\pm}8.7$), ICM cell numbers ($15.8{\pm}0.6$ vs. $16.8{\pm}1.5$), TE cell numbers ($44.0{\pm}9.7$ vs. $53.6{\pm}7.3$), % ICM ($26.4{\pm}2.9%$ vs. $23.8{\pm}3.3%$) and ICM:TE ratio ($1:2.8{\pm}0.4$ vs. $1:3.2{\pm}0.6$) were not different between groups (i.e., $100{\mu}l$ vs. 2 ml). These results show that the capacity of the culture medium did not effect the cell numbers of B6D2F1 mice blastocysts. In summary, these results can provide fundamental data to maximize culture condition for in vitro fertilization on B6D2F1 mice.
노랑초파리(Drosophila melanogaster)의 난자형성과정 중 egg chamber 이외의 조직에서 합성, 이입될 수 있는 가능성을 배제한 상태에서 egg chamber에서 일어나는 단백질 합성양상의 변화를 연구하였다. 단백질 합성률은 전반적으로 큰 변화를 보이지 않으나 난황형성, 난황막형성, 그리고 난각형성이 겹쳐 이루어지는 11-12에서는 높고, 성숙이 완료되는 단계 14에서는 낮았다. 누적 및 합성 단백질의 수와 종류가 단계에 따라 크게 변하고 있으며, 노랑초파리의 난자형성이 비록 짧은 기간동안에 이루어질지도 단계에 따라 특이한 단백질 합성 변화를 보이고 있다. 이러한 단백질의 합성은 주로 여포세포에서 이루어지는 것으로 생각되며, 노랑초파리의 난포세포의 성장 및 성숙을 위해서는 egg chamber 이외의 조직 뿐만 아니라 egg chamber 내의 세포 자체에 의한 단백질 합성이 직접적으로 관여하는 것으로 생각된다.
For the study of the reproductive mechanism associated with the process of vitellogenesis, oocyte development and vitellogenesis during oogenesis in female Boleophthalmus pectinirostris were investigated by electron microscopic observations. The ovary consists of a pair of saccular structures with many ovarian lobules. In the early vitellogenic oocyte, the Golgi complex plays an important role leading to the formation of yolk vesicles containing carbohydrate yolks. At this time many pinocytotic vesicles containing yolk precursors are observed in the cytoplasm near the region of initial formation of the zona radiata. In the late vitellogenic oocytes, the multivesicular bodies, which are formed by modified mitochondria, are involved in the formation of the primary yolk granules. Precursors of yolk granules and multivesicular bodies develop to primary yolk globules with participation of pinocytotic vesicles. After primary yolk globules mix with each other, they develop into secondary and tertiary yolk globules. Based on these findings, vitellogenesis of B. pectinirostris occurs by way of the processes of endogenous autosynthesis and exogenous heterosynthesis. The process of autosynthesis involves the combined activity of the Golgi complex, mitochondria, and multivesicular bodies. However, the process of heterosynthesis involves pinocytotic incorporation of extraovarian precursors into the zona radiata of vitellogenic oocytes by way of the thecal cell layers and granulosa cells.
노랑초파리 (Drosophila melanogaster) 난자형성단계에 따른 난소와, 수정 후 발생에 EK른 발생배, 유충 그리고 번데기의 단백질양상을 polyacrylamide gel 전기영동법으로 조사하였다. 초파리 난자형성단계에 따른 난소의 단백질양상과, 수정 후 발생단계에 따른 단백질양상은 각 단계가 진행됨에 따라 전기영동상에서 band의 차이로 나타나는 질적인 면과 상대적인 양에 있어서 다양한 변화를 보여 주었다. 특히 난자형성 초기단계에서는 3개로 나타났던 난황단백질이 후기에는 한 개의 단백질로 전환해가는 현상을 나타내었다. 그리고 번데기시기까지의 단백질양상은 알의 시기에서 유충시기로의 전환점과 2령기에서 3령기로 전환되는 점에서 큰 변화를 보여 주었다.
Oogenesis and the reproductive cycle in female Ruditapes philippinarum were investigated by cytological and histological observations. R. philippinarum is dioecious and oviparous. During vitellogenesis, the Golgi complex, glycogen particles and mitochondria were involved in the formation of lipid droplets and lipid granules in the cytoplasm of the early vitellogenic oocyte. In the late vitellogenic oocyte, cortical granules, the endoplasmic reticulum, and mitochondria were involved in the formation of proteid yolk granules in the cytoplasm. At this time, exogenous lipid granular substance and glycogen particles in the germinal epithelium passed into the oocyte through the microvilli of the vitelline envelope. The spawning period was once a year between early June and early October, and the main spawning occurred between July and August when seawater temperature was approximately $20^{\circ}C$. The reproductive cycle of this species can be categorized into five successive stages: early active stage (January to March), late active stage (February to May), ripe stage (April to August), partially spawned stage (May to October), and spent/inactive stage (August to February). Percentages of female clams at frst sexual maturity of 15.1-20.0 mm in shell length were 52.6% (50% of the rate of group maturity was 17.83 mm in length), and 100% for the clams > 25.1 mm.
In reproduction, mitochondria produce bioenergy, help to synthesize biomolecules, and support the ovaries, oogenesis, and preimplantation embryos, thereby facilitating healthy live births. However, the regulatory mechanism of mitochondria in oocytes and embryos during oogenesis and embryo development has not been clearly elucidated. The functional activity of mitochondria is crucial for determining the quality of oocytes and embryos; therefore, the underlying mechanism must be better understood. In this review, we summarize the specific role of mitochondria in reproduction in oocytes and embryos. We also briefly discuss the recovery of mitochondrial function in gametes and zygotes. First, we introduce the general characteristics of mitochondria in cells, including their roles in adenosine triphosphate and reactive oxygen species production, calcium homeostasis, and programmed cell death. Second, we present the unique characteristics of mitochondria in female reproduction, covering the bottleneck theory, mitochondrial shape, and mitochondrial metabolic pathways during oogenesis and preimplantation embryo development. Mitochondrial dysfunction is associated with ovarian aging, a diminished ovarian reserve, a poor ovarian response, and several reproduction problems in gametes and zygotes, such as aneuploidy and genetic disorders. Finally, we briefly describe which factors are involved in mitochondrial dysfunction and how mitochondrial function can be recovered in reproduction. We hope to provide a new viewpoint regarding factors that can overcome mitochondrial dysfunction in the field of reproductive medicine.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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