• 한국미생물·생명공학회지
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• 제21권1호
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• pp.23-29
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• 1993

토양으로부터 nucleoside oxidase 생산균주를 분리하고 Flavobacterium meningosepticum으로 동정하였다. 생산균주의 cell free extract로부터 본 효소를 정제배율 180배, 수율 18로 전기영동적으로 균일하게 정제하였으며 정제효소의 기질 특이성을 검토한 결과 nucleoside만을 산화시키는 전형적인 nucleoside oxidase이었다. Adenosine을 기질로 한 표준효소반응계에서 stoichiometry를 검토한 결과 본 효소는 lmol adenosine을 중간 생성물인 adenosice 5'-aldeh-yde로 산화 후 1 mol adenosine 5'-carboxylic acid까지 2단계로 산화시키면서 동시에 2 mol H2O2를 생성하는 새로운 type의 nucleoside oxidase로 확인되었다. 본 효소의 높은 기질 특이성과 H2O2를 생성하는 반응성은 nucleoside의 신속 간편한 효소학적정량볍 및 임상진단용 시약의 개발에 응용될 수 있음을 시사하였다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제24권6호
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• pp.693-698
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• 1996

Optimal cultural conditions were investigated for the maximal productivity of nucleoside oxidase and peroxidase from Flavobacterium meningosepticum. Sucrose and Polypepton were the best as a carbon source and a nitrogen source. Fe$^{2+}$, Fe$^{3+}$ and Cu$^{2+}$ increased the activities of the two enzymes and were essential in medium containing peptone as a nitrogen source. Nucleoside derivatives such as 2'-deoxyguanosine, 2'-deoxyadenosine, N$^{6}$ -methyladenosine and 1-methyladenosine were effective for the production of the two enzymes. Especially, the addition of N$^{6}$ -methyladenosine and 1-methyladenosine decreased cell growth, but increased the two enzyme activities. High level of oxygen also was an essential factor for formation and/or induction of these enzymes. From the summary of this study about optimal medium and environmental conditions, nucleoside oxidase was biosynthesized in proportion to peroxidase. These results suggested that the role of peroxidase should be degradation of H$_{2}$O$_{2}$ generated by nucleoside oxidase in the cell of Flavobacterium meningosepticum.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제24권5호
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• pp.579-584
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• 1996

The molecular weight of the purified nucleoside oxidase estimated by gel filtration column chromatography was 480,000 and the enzyme protein was composed of four nonidentical subunits (81,000, 69,000, 32,000 and 16,000). On the basis of the visible absorption spectra and the enzymatic determination of the purified enzyme, the enzyme was supposed as a hemoprotein and also a flavoprotein containing 3 moles of FAD per I mole of enzyme. The isoelectric point of the enzyme was pH 5.1. Addition of metal salts such as 1 mM SnCl$_{2}$ and PbCl$_{2}$ into an enzyme reaction solution inhibited the enzyme activity by 94 and 90%, respectively. The enzyme activity was also lost significantly by hemoenzyme inhibitors such as NaCN and NaN$_{3}$ and flavoenzyme inhibitor, acriflavine and quinacrine. The maximal nucleoside oxidase activity was observed at pH 7.0 and 55$\circ$C. The nucleoside oxidase was relatively stable in the range of pH 5.5-9.0 and below 55$\circ$C.

• Annals of Clinical Neurophysiology
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• 제19권1호
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• pp.40-45
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• 2017

Background: Telbivudine is a nucleoside analogue used for the treatment of chronic hepatitis B, but it often develops mitochondrial toxicity leading to symptomatic myopathy. In this study, three patients with telbivudine induced myopathy were enrolled in order to investigate the nature and pathogenesis of mitochondrial toxicity caused by long-term use of telbivudine. Methods: Clinical features, laboratory findings, muscle pathology, and quantitation of mitochondrial DNA were studied in three patients. Results: Patients presented with progressive muscle weakness with high serum creatine kinase levels. Light microscopic findings of muscle pathology showed ragged red fibers that reacted strongly with succinate dehydrogenase stain, but negative for cytochrome c oxidase activities. Electron microscopy revealed abnormal mitochondrial accumulation with rod shaped inclusions. The quantitative peroxidase chain reaction showed a depletion of mitochondrial DNA in skeletal muscle of the patients. Conclusions: Nucleoside analogues including telbivudine are potent inhibitors of viral DNA polymerases. However, they are not specific for viral DNA and can disturb mitochondrial replication at the same time. All nucleotide analogues should be used with close clinical observation in order to avoid development of mitochondrial myopathy.

• KSBB Journal
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• 제11권5호
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• pp.518-523
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• 1996

효소 purine nucleoside phosphoryrase(NP)하 고 xanthine oxidase(XOD) 두 효소를 하나로 고정화시켜 산소 전극으로부터 ATPase 활성 계측용 바 이오 센서를 개발했다. 개발된 ATPase센서를 이용 해서 Thunnus albacares(Yeliowfin tuna), Tetra~ t turus audax(Striped marlin), Prognichthys agoo (Japanese flyingfish) 그리고 Cyprinus carpio ( ( Carp) 등의 각 4종의 어근육 단백질중의 $K^+-, Ca^{2}+- 그리고 Mg^{2+}-$ATPase 활성을 측정하였고, 시료 1 개를 측정는데 3분의 시간을 필요로 하였다. $K^+-, Ca^{2}+-$ATPase 활성의 경우 본 연구에셔 개발한 센 셔를 이용한 측정 결과와 종래(비색측정)법으로 측 정한 결과와의 사이에서 좋은 상관치를 얻었다.

• 생약학회지
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• 제26권1호
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• pp.66-73
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• 1995

'Gyejakjimo-Tang(桂芍知母湯)', which is composed of Cinnamon bark(桂枝), Peony root(芍藥), Anemarrhena root(知母) and other seven herbs, is described as antipyretic, diuretic and analgesic prescription in traditional medical literatures including Geumgwe-Yoryak(金櫃要略). So it is being used in the treatment of gout clinically in oriental region. As the results of the pharmacological and biochemical trials of the prescription, it was found to have antiinflammatory and significant analgesic effects indicated by carrageenin edema, dye permeabilities and writhing behavior. And it potentiated the output of uric acid in blood and the increase of uric acid in urine of alcohol-toxicated rats, which mean the decrease of uric acid level only by excretion procedure. But the prescription didn't show any effects on the activities of adenine/guanine deaminase, purine nucleoside phosphorylase, xanthine oxidase or uricase, which are related with formation and metabolism of uric acid.

• 대한약리학회지
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• 제26권1호
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• pp.55-66
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• 1990

안정 상태 및 활성화된 중성 백혈구에서 ATP는 superoxide 라디칼 생성을 자극하였으나 adenosine은 약간 억제하였다. ATP에 대한 활성화된 중성 백혈구의 반응이 안정상태의 중성 백혈구에서보다 크게 나타났다. 칼슘이 제거된 반응액에서 superoxide 라디칼 생성에 대한 adenosine의 억제효과가 관찰되었으나 ATP는 영향을 주지않았다. Superoxide 라디칼 생성에 대한 ATP의 자극 효과는 adenosine에 의하여 용량에 따라 억제되었다. ATP와 adenosine은 NADPH oxidase 활성도에 영향을 주지 않았다. ATP 또는 adenosine에 의한 superoxide 라디칼 생성의 변경은 다른 triphosphate nucleotide나 nucleoside에 의한 것보다 현저하였다. 활성화된 중성 백혈구에서 ATP와 ADP는 칼슘이온의 흡수를 더 자극하였고 세포질 유리 칼슘농도를 증가시켰으나, adenosine은 칼슘이온의 이동을 억제하였다. APT에 의한 세포질 유리 칼슘이온 농도의 증가는 verapamil에 의하여 효과적으로, tetrodotoxin에 의하여 약간 억제되었다. ATP에 노출된 활성화된 중성 백혈구에서의 superoxide 라디칼 생성에 대한 verapamil 과 tetrodotoxin의 억제 효과는 ATP의 영향이 없는 활성화된 중성 백혈구에서보다 크게 나타났다. Tetraethylammonium chloride는 superoxide 생성에 뚜렷한 영향을 미치지 못했다. CCCP, 2,4-dinitrophenol, diphenylhydantoin과 procaine은 활성화된 중성 백혈구에서 superoxide 라디칼의 생성을 억제하였다. 이들 가운데 CCCP만이 ATP의 자극 효과를 억제하였다. ATP는 활성화된 중성 백혈구에서의 sulfhydryl기의 손실을 더 자극하였으나 adenosin의 영향은 관찰되지 않았다. 이상의 결과로부터 중성 백혈구의 기능적 반응은 부분적으로 purine에 의하여 조절될 것으로 시사되었다. ATP와 adenosine은 칼슘 흡수와 그리고 아마도 세포막 인산화 반응 및 용해성 sulfhydryl기의 산화에 대한 영향을 통하여 활성화된 중성 백혈구의 반응을 더 변경 시킬 수 있을 것으로 추정된다.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제42권6호
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• pp.838-845
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• 1995

연구배경: 현재 국내에서 ADA의 활성치의 측정은 adenosine 기질에서 ADA에 의한 탈아미노작용시 발생하는 암모니아를 Berthelot's 반응을 이용하여 측정하는 Giusti 등에 의한 비색법이 많이 이용되고 있다. 그러나 이 방법은 자동화가 어려워 쉽게 사용하기 어려우며 기기내의 내인성 암모니아 등에 의한 오염의 가능성이 있다. 1993년 Oosthuizen 등은 nucleoside phosphorylase(NP)와 Xanthine oxidase(XOD)을 이용하여 ADA 활성치 측정을 자동화 하였다. 저자들이 측정한 ADA 활성치와 기존의 ADA 활성치 측정결과에 대한 보고를 비교함으로써 Oosthuizen 등에 의한 ADA 활성치 측정의 자동화의 융통성을 알아보고자 하였다. 방법: 1994년 5월부터 1995년 7월까지 연세대학교 원주의과대학부속 원주기독병원에 흉막액으로 입원하여 그 원인이 확진된 162명의 환자를 각각의 원인 질환에 따라서 5개 군(I: 결핵성 흉막액, II: 악성 흉막액, III: 폐렴성 흉막액, V: 여출성 흉막액)으로 나누었으며 Oosthuizen 등에 의한 ADA 활성치 측정법을 Hitachi 747 자동화학분석기에 적용하여 각 군에서 흉막액의 ADA 활성치와 및 흉막액과 혈청에서 ADA 활성치의 비를 측정하였다. 결과: 1) 결핵성 흉막액의 ADA 활성치는 $52.53{\pm}16.43\;U/L$로서 나머지 군에 비하여 통계학적으로 의의있게 높았으며(II, IV, V 군은 p값이 0.001 미만, III 군은 p값이 0.05 미만) 흉막액에서 ADA의 활성치를 30 U/L로 기준하였을 때 결핵성 흉막액과 악성 흉막액의 감별은 민감도(sensitivity) 96%, 특이도(specificity) 93%로 결핵성 흉막염을 진단할 수 있었으며 이는 기존의 보고와 차이가 없었다. 2) 흉막액과 혈청 ADA 치의 비는 결핵성 흉막액에서 $2.29{\pm}0.96$으로 농흉을 제외한 나머지 군에 의해서 통계학적으로 의의있게 높았다(p<0.001). 흉막액과 혈청 ADA 활성치 비를 1.5로 기준하였을 때 결핵성 흉막액과 악성 흉막액의 감별은 민감도 80%, 특이도 88%로 결핵성 흉막액을 진단할 수 있었으며, 이는 기존의 연구 결과와 차이가 없었다. 3) Oosthuizen 동에 의한 ADA 활성치 측정법을 Hitachi 747 자동화학분석기에 적용한 새로운 방법은 r값이 0.971로 Giuisti 등에 의한 기존의 방법과 높은 상관관계를 보였다. 결론: ADA 활성치 측정에 Oosthuizen 등에 제안한 새로운 방법은 현재 사용되는 Giusti 등의 비색법에 의한 ADA 활성치 측정과 차이가 없었으며, 일반 검사실에서도 쉽게 사용될 수 있는 장점이 있었다.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제30권11호
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• pp.1529-1539
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• 2017

Objective: The objective of this study was to compare the DNA methylation profile in the longissimus dorsi muscle between Small Tailed Han and Dorper${\times}$Small Tailed Han crossbred sheep which were known to exhibit significant difference in meat-production. Methods: Six samples (three in each group) were subjected to the methylated DNA immunoprecipitation sequencing (MeDIP-seq) and subsequent bioinformatics analyses to detect differentially methylated regions (DMRs) between the two groups. Results: 23.08 Gb clean data from six samples were generated and 808 DMRs were identified in gene body or their neighboring up/downstream regions. Compared with Small Tailed Han sheep, we observed a tendency toward a global loss of DNA methylation in these DMRs in the crossbred group. Gene ontology enrichment analysis found several gene sets which were hypomethylated in gene-body region, including nucleoside binding, motor activity, phospholipid binding and cell junction. Numerous genes were found to be differentially methylated between the two groups with several genes significantly differentially methylated, including transforming growth factor beta 3 (TGFB3), acyl-CoA synthetase long chain family member 1 (ACSL1), ryanodine receptor 1 (RYR1), acyl-CoA oxidase 2 (ACOX2), peroxisome proliferator activated receptor-gamma2 (PPARG2), netrin 1 (NTN1), ras and rab interactor 2 (RIN2), microtubule associated protein RP/EB family member 1 (MAPRE1), ADAM metallopeptidase with thrombospondin type 1 motif 2 (ADAMTS2), myomesin 1 (MYOM1), zinc finger, DHHC type containing 13 (ZDHHC13), and SH3 and PX domains 2B (SH3PXD2B). The real-time quantitative polymerase chain reaction validation showed that the 12 genes are differentially expressed between the two groups. Conclusion: In the current study, a tendency to a global loss of DNA methylation in these DMRs in the crossbred group was found. Twelve genes, TGFB3, ACSL1, RYR1, ACOX2, PPARG2, NTN1, RIN2, MAPRE1, ADAMTS2, MYOM1, ZDHHC13, and SH3PXD2B, were found to be differentially methylated between the two groups by gene ontology enrichment analysis. There are differences in the expression of 12 genes, of which ACSL1, RIN2, and ADAMTS2 have a negative correlation with methylation levels and the data suggest that DNA methylation levels in DMRs of the 3 genes may have an influence on the expression. These results will serve as a valuable resource for DNA methylation investigations on screening candidate genes which might be related to meat production in sheep.