유산균의 증식으로 인해 설사 등의 원인인 유해균들의 증식이 억제되는데 이것은 유산균들이 만드는 각종 유기산들, 과산화수소에 의한 직접적인 저해나 산생성에 부수되는 pH 저하가 원인이고 그 외 유산균들이 만드는 nisin이나 각종 bacteriocin 등도 관여한다. 유산균을 이용한 발효 유제품이 소비증가, 유산균의 약리작용 효과를 이용한 건강보조식품의 개발 등을 통하여 유산균의 중요성은 더욱 대두되고 있다. 이 같은 추세로 전세계적으로 유산균에 대한 연구가 활발히 진행되고 있으며, 최근에는 생명공학 분야에서 광범위하게 이용되고 있는 유전공학 기술에 의한 유산균의 개발연구가 관심을 모으고 있다. 본 논문에서는 현재까지 진행되고 있는 유산균 연구 중 유전공학기술을 이용한 연구결과와 이 분야의 향후 전망 등에 대하여 고찰하였다.
선별된 7종의 균주는 넓은 범위의 산과 담즙산에 대해 기존에 보고된 결과에 비하여 높은 내성을 나타냈고, 장내세균인 E. coli에 대해서도 우수한 항균력을 나타냈고, 항생제 tetracycline, nisin, kanamycin, ampicillin. streptomycin에 대해서도 높은 내성을 보였다. 또한 7종의 균주는 어느 정도의 산을 생성하고 있었고, 네 가지 효소 amylase, protease, lipase, cellulase에 대해서도 높은 활성을 나타냈다. 균주 특성실험 결과, 7종의 균주는 그람음성균으로 모두 구형, 비운동성이고 균체의 색은 노란색이거나 흰색을 띠고 있고, 다양한 유기물에 대하여 분해력을 지니고 있었다.
The effect of a nisin-producing Lactococcus lactis spp. lactis (L. lactis) on the growth and attachment of Listeria monocytogenes Scott A and Brie 1 on stainless steel and their growth in Brain Heart Infusion broth was determined. Viable cells of Listeria decreased rapidly after 9~12 hr of incubation at $21^{\circ}C$ and after 6~9 hr of incubation at $32^{\circ}C$ in the presence of L. lactis. The number of L. monocytogenes Scott A attached to stainless steel in pure culture was $2.5{\times}10^3/\textrm{cm}^2{\;}at{\;}21^{\circ}C{\;}and{\;}2.3{\times}10^3/\textrm{cm}^2{\;}at{\;}32^{\circ}C$ after 48 hr of incubation, but was only $10/\textrm{cm}^2{\;}at{\;}21^{\circ}C{\;}and{\;}1.1{\times}10/\textrm{cm}^2{\;}at{\;}32^{\circ}C$ in the presence of L. lactis. Results from L. monocytogenes strain Brie 1 were similar to those from strain Scott A. The population of L. monocytogenes Scott A which attached to stainless steel with previously adherent L. lactis was $1.8{\times}10^2/\textrm{cm}^2{\;}at{\;}21^{\circ}C{\;}and{\;}8.2{\times}10^2/\textrm{cm}^2{\;}at{\;}32^{\circ}C$, whereas the population attached to sterile stainless steel was $1.2{\times}10^3/\textrm{cm}^2{\;}at{\;}21^{\circ}C{\;}and{\;}2.1{\times}10^2/\textrm{cm}^2{\;}at{\;}32^{\circ}C$. For L. monocytogenes Brie 1, the attached population of the control was $1.6{\times}10^4/\textrm{cm}^2{\;}at{\;}21^{\circ}C{\;}and{\;}3.2{\times}10^2/\textrm{cm}^2{\;}at{\;}32^{\circ}C$, and on stainless steel with adherent L. lactis, it was $1.1{\times}10/\textrm{cm}^2{\;}at{\;}21^{\circ}C{\;}and{\;}6.9{\times}10/\textrm{cm}^2{\;}at{\;}32^{\circ}C$. Surface adherent L. lactis was less inhibitory to attachment of L. monocytogenes on stainless steel than a liquid culture inoculum. Listeria attached to stainless steel survived dry storage for 20 days both in the presence and absence of adherent lactococci.
본 실험은 김치의 유통기한을 연장하고자 배추김치에 열처리 및 천연보존료를 첨가하여 그 효과를 조사하였다. 400g의 배추김치를 각각 원형 polyethylene 플라스틱 용기에 담고 $90^{\circ}C$에서 120분 처리하였을 때, $2.0\;log_{10}CFU/g$만큼 총 균수가 감소하였으나 열처리 10분 만에 용기의 변형이 일어났고, 김치의 관능변화가 감지되어 부적절한 조건으로 판정되었다. 필름 파우치에 김치를 옮겨 열처리하였을 때는 $80^{\circ}C$에서 30분 이하로 열처리하였을 때 $0.3\;log_{10}CFU/g$의 저해효과를 보여 효과는 크지 않았지만 김치의 관능변화를 일으키지 않는 적정조건이었다. 반면에, 배추 조직의 느린 열전달과 열처리 시 관능 변화 특성을 고려하여 김치 부재료 양념을 절임배추와 혼합 전 별도 열처리를 실시한 결과, $80^{\circ}C$ 이하에서 30분 열처리하였을 때 총 균수를 $0.5\;log_{10}CFU/g$, 그리고 유산균을 $1.0\;log_{10}CFU/g$만큼 저해하여 배추김치 살균보다도 더 효과적인 방법으로 판명되었다. 또한, 나이신과 유카추추물을 첨가한 김치를 한 달간 저장하며 미생물의 저해 효과를 확인한 결과 $5^{\circ}C$에 보관할 때에 두 처리구 모두 저장기간 동안 유산균의 생육을 저해하는 효과를 보였다. 나이신과 유카추출물의 경우 모두 낮은 온도에서($5^{\circ}C$) 높은 초기 미생물의 저해 효과를 보였다. 이 연구 결과는 저온살균법의 물리적 방법과 나이신 또는 유카추출물과 같은 천연보존료를 사용하는 화학적방법이 각각 김치의 초기 미생물을 감소시키고 유통기간 동안 미생물의 생육속도를 저해하는데 효과적임을 보여준다.
A bacteriocin-producing strain, DU-0608, was isolated from Kimchi and identified as Leuconostoc mesenteroides subsp. mesenteroides. The bacteriocin from isolate was inhibitory against Listeria monocytogenes, Micrococcus luteus and several strains of lactic acid bacteria. The bacteriocin was inactivated by pepsin, trypsin, $\alpha$-chymotrypsin, protease, $\alpha$-amylase and lipase, but not by catalase or by heating at $100^{\circ}C$ for 60 min. The molecular weight of the bacteriocin was estimated approximately 6 kDa. The inhibitory effect was bactericidal and rapid. Following treatment with isolate bacteriocin, cells of indicator strain (Lactobacillus sake JCM 1157) were damaged at the end regions of the cell wall, whereas the cells treated with nisin were damaged at many places around the cell wall.
The cells of Lactobacillus plantarum MY4 isolated from the human feces were treated for 24 h in artificial bile after incubation for 2 h in artificial gastric juice and final number of the strain was reached to around $3.1{\times}10^8$ CFU/ml. In test of API ZYM kit, ${\beta}$-glucuronidase or ${\beta}$-glucosidase were not produced by L. plantarum MY4. However, ${\beta}$-galactosidase were weakly produced by it, which they would be alleviated the lactose intolerance. L. plantarum MY4 were resistant to antibiotics such as nisin, tetracycline, streptomycin, rifamycin, doxycycline, roxithromycin, chloramphenicol, nystatin, erythromycin, ciprofloxacin and gentamycin. L. plantarum MY4 was affected by alcohol concentration up to 8%, but more than 16%, their growth was not affected significantly. L. plantarum MY4 was shown to inhibit the growth of Listeria monocytogenes ATCC 19111 completely within 24 h of incubation, which indicates its bactericidal nature. Thus, L plantarum MY4 show promise as a probiotic strain because of its characteristics.
Bacteriocin J105 is a proteinaceous inhibitory substance produced by Latococcus latis subsp. lactis j105 isolated from Kimchi. Bacteriocin J105 was purified to homogeneity by the pH-dependent adsorption-desorption method and reverse-phase HPLC from the culture broth of Lactococcus lactis subsp. lactis J105. Purification of bacteriocin J105 resulted in a 1.47-fold increase in the specific activity and the recovery was 1.5%. Its molecular mass measured by the electrophoretic pattern in the sodium, dodecyl sulfate polyacrylamide gel was about 3.4 kDa. It was stable at $121^{\circ}C$ for 15 min at pH between 2 and 4. However, at pH above 5, bacteriocin was rapidly inactivated. Twenty-one residues from the N-terminal portion of bacteriocin J105 were sequenced using sequence analysis of lantibiotics. Bacteriocin J105 showed significant homology with known nisin A from lactic acid bacteria.
Food additives are minor components which are used to enhance nutritive or sensory values, and to improve shelf life of foods. In foods, natural additives are preferred over artificial or synthetic materials because of concern on food safety. Many biotechnological techniques have been applied to the production of food additives since the biotechnology has been utilized to prodyce many flavor components such as glutamate, 5'-nucleotides, esters, 2,3-bytadione, pyrazines, terpenes, and lactones. Natural flavors, fragrances, sweetners, and colorants can be produced by plant cell culture. Many lactic acid bacteria produce bacteriocins such as nisin or diplococcin. These bacteriocins are used as safe preservatives in foods and many researches on the improvenment of bacteriocin productivity by genetic engineering are in progress.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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