Chung, Joo-Ryun;Choi, Jong-Won;Fiorellini, Joseph P.;Hwang, Kyung-Gyun;Park, Chang-Joo
Journal of Dental Anesthesia and Pain Medicine
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제17권3호
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pp.191-198
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2017
Background: For peripheral nerve regeneration, recent attentions have been paid to the nerve conduits made by tissue-engineering technique. Three major elements of tissue-engineering are cells, molecules, and scaffolds. Method: In this study, the attachments of nerve cells, including Schwann cells, on the nerve conduit and the effects of both growth factor and adhesion molecule on these attachments were investigated. Results: The attachment of rapidly-proliferating cells, C6 cells and HS683 cells, on nerve conduit was better than that of slowly-proliferating cells, PC12 cells and Schwann cells, however, the treatment of nerve growth factor improved the attachment of slowly-proliferating cells. In addition, the attachment of Schwann cells on nerve conduit coated with fibronectin was as good as that of Schwann cells treated with glial cell line-derived neurotrophic factor (GDNF). Conclusion: Growth factor changes nerve cell morphology and affects cell cycle time. And nerve growth factor or fibronectin treatment is indispensable for Schwann cell to be used for implantation in artificial nerve conduits.
본 연구의 목적은 1회성 축구활동이 남자 청소년의 혈청 뉴로트로핀 수준과 신경인지 기능에 미치는 영향을 규명하는데 있다. 연구의 대상은 건강한 남자 청소년 15명으로 하였으며, 연구 대상은 축구활동 처치(SOC) 조건과 자율학습 처치(CON) 조건의 2가지 처치 조건에 참여하였다. 채혈은 처치 전(Pre), 처치 후(Post), 처치 후 2시간(Post-2 h) 시점에서 총 3회 실시하였으며, 채취된 혈액을 이용하여 혈청 serum brain-derived neurotrophic factor (BDNF), nerve growth factor (NGF), insulin-like growth factor-1 (IGF-1)을 분석하였다. 신경인지 기능의 평가는 Stroop 색체-단어 검사를 이용하였으며, 채혈 시점과 동일한 시점에서 측정하였다. 연구 결과, 혈청 BDNF, NGF, IGF-1 수준은 축구활동 후 유의하게 증가하였으며(p<0.05), Post 시점에서 SOC 조건이 CON 조건과 비교하여 유의하게 높게 나타났다(p<0.05). Stroop 색체-단어 검사는 색체-단어 검사 점수에서 축구활동 후 유의한 증가를 나타내었으며(p<0.05), Post 시점과 Post-2 h 시점에서 SOC 조건이 CON 조건과 비교하여 유의하게 높게 나타났다(p<0.05). 이상의 결과를 종합하면, 1회성 축구활동이 뉴로트로핀을 증가시켜 신경인지 기능에 긍정적 영향을 나타낸 것으로 판단된다.
Jo Hyeon-Jeong;Kim Eun-Yeong;Choe Gyeong-Hui;An So-Yeon;Park Se-Pil;Im Jin-Ho
한국동물번식학회:학술대회논문집
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한국동물번식학회 2002년도 춘계학술발표대회 발표논문초록집
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pp.84-84
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2002
This study was to investigate generation of the specific neuronal cell in vitro from the neural progenitors derived from human embryonic stem (hES, MB03) cells. For the neural progenitor cell formation, we produced embryoid bodies (EB: for 5 days, without mitogen) from hES cells and then neurospheres (for 7-10 days, 20 ng/㎖ of bFGF added N2 medium) from EB. And then for the differentiation into neuronal cells, neural progenitor cells were cultured in N2 medium (without bFGF) supplemented with brain derived neurotrophic factor (BDNF, 5 ng/㎖) or platelet derived growth factor-bb (pDGF-bb, 20ng/㎖) for 2 weeks. (omitted)
히스톤 탈 아세틸 효소(HDAC)와 인슐린유사성장인자(IGF-I)는 근육 관련 유전자들의 활성 및 발현을 조절하여 골격근의 성장 및 발달을 조절하지만 이들이 근신경계 발달 및 대사 기능에 중요한 역할을 담당하는 뇌신경성장인자(BDNF)의 발현에 미치는 영향에 관한 연구는 거의 이루어지지 않았다. 따라서 본 연구에서는 IGF-I과 HDAC의 억제제인 SAHA가 C2C12 골격근 세포에서 BDNF 발현에 미치는 영향을 알아보고자 하였다. 그 결과 IGF-I은 농도와 시간 의존적으로 BDNF의 mRNA 및 단백질 발현을 감소시켰지만 HDAC을 억제하자 IGF-I에 의해 감소되었던 BDNF의 발현이 증가하는 경향을 관찰할 수 있었다. 따라서 IGF-I은 BDNF의 발현을 억제하며, HDAC의 억제는 IGF-I에 의한 BDNF의 발현 억제를 감소시킬 수 있다는 사실을 확인할 수 있었다.
Journal of the Korean Association of Oral and Maxillofacial Surgeons
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제31권3호
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pp.199-218
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2005
Purpose of Study: Peripheral nerve regeneration depends on neurotrophism of distal nerve stump, recovery potential of neuron, supporting cell like Schwann cell and neurotrophic factors such as BDNF. Peripheral nerve regeneration can be enhanced by the conduit which connects the both sides of transected nerve. The conduit maintains the effects of neurotrophism and BDNF produced by Schwann cells which can be made by gene therapy. In this study, we tried to enhance the peripheral nerve regeneration by using calcium phosphate coated porous conduit and BDNF-Adenovirus infected Schwann cells in sciatic nerve of rats. Materials and Methods: Microporous filter which permits the tissue fluid essential for nerve regeneration and does not permit infiltration of fibroblasts, was made into 2mm diameter and 17mm length conduit. Then it was coated with calcium phosphate to improve the Schwann cell adhesion and survival. The coated filter was evaluated by SEM examination and MTT assay. For effective allogenic Schwann cell culture, dorsal root ganglia of 1-day old rat were extracted and treated with enzyme and antimitotic Ara-C. Human BDNF cDNA was obtained from cDNA library and amplified using PCR. BDNF gene was inserted into adenovirus shuttle vector pAACCMVpARS in which E1 was deleted. We infected the BDNF-Ad into 293 human mammary kidney cell-line and obtained the virus plaque 2 days later. RT-PCR was performed to evaluate the secretion of BDNF in infected Schwann cells. To determine the most optimal m.o.i of BDNF-Ad, we infected the Schwann cells with LacZ adenovirus in 1, 20, 50, 75, 100, 250 m.o.i for 2 hours and stained with ${\beta}$-galactosidase. Rats(n=24) weighing around 300g were used. Total 14mm sciatic nerve defect was made and connected with calcium phosphate coated conduits. Schwann cells$(1{\times}10^6)$ or BDNF-Ad infected Schwann cells$(1{\times}10^6)$ were injected in conduit and only media(MEM) was injected in control group. Twelve weeks after surgery, degree of nerve regeneration was evaluated with gait analysis, electrophysiologic measurements and histomorphometric analysis. Results: 1. Microporous Millipore filter was effective conduit which permitted the adhesion of Schwann cells and inhibited the adhesion of fibroblast. We could enhance the Schwann cell adhesion and survival by coating Millipore filter with calcium phosphate. 2. Schwann cell culture technique using repeated treatment of Ara-C and GDNF was established. The mean number of Schwann cells obtained 1 and 2 weeks after the culture were $1.54{\pm}4.0{\times}10^6$ and $9.66{\pm}9.6{\times}10^6$. 3. The mRNA of BDNF in BDNF-Ad infected Schwann cells was detected using RT-PCR. In Schwann cell $0.69\;{\mu}g/{\mu}l$ of DNA was detected and in BDNF-Adenovirus transfected Schwann cell $0.795\;{\mu}g/{\mu}l$ of DNA was detected. The most effective infection concentration was determined by LacZ Adenovirus and 75 m.o.i was found the most optimal. Conclusion: BDNF-Ad transfected Schwann cells successfully regenerated the 14mm nerve gap which was connected with calcium phosphate coated Millipore filter. The BDNF-Ad group showed better results compared with Schwann cells only group and control group in aspect to sciatic function index, electrophysiologic measurements and histomorphometric analysis.
Hepatocyte growth factor (HGF), originally discovered and cloned as a powerful mitogen for hepatocytes, is a four kringle-containing growth factor which specifically binds to membrane-spanning tyrosine kinase, c-Met/HGF receptor. HGF has mitogenic, motogenic (enhancement of cell movement), morphogenic (e.g., induction of branching tubulogenesis), and anti-apoptotic activities for a wide variety of cells. During embryogenesis, HGF supports organogenesis and morphogenesis of various tissues, including liver, kidney, lung, gut, mammary gland, and tooth. In adult tissues HGF elicits an organotrophic function which supports regeneration of organs such as liver, kidney, lung, and vascular tissues. HGF is also a novel member of neurotrophic factor in nervous systems. Together with the preferential expression of HGF in mesenchymal or stromal cells, and c-Met/HGF receptor In epithelial or endothelial cells, the HGF-Met coupling seems to orchestrate dynamic morphogenic processes through epithelial-mesenchymal (or-stromal) interactions for organogenesis and organ regeneration. HGF or HGF gene may well become unique therapeutic tools for treatment of patients with various organ failure, through its actions to reconstruct organized tissue architectures. This review focuses on recently characterized biological and physiological functions integrated by HGF-Met coupling during organogenesis and organ regeneration.
중추신경계는 신경원(neuron)과 이를 지지해주는 신경아교세포(neuroglia)로 이루어져 있다. 발생과정중 신경원의 발달은 NGF(neruv growht factor)에 의해 관찰이 가능하고, 아교세포들중 별모양아교세포는 GFAP(Glial fibrillary acidic protein)항체로 밝혀낼 수 있다. CNTF(Cillary neurotrophic factor)는 이전에는 운동신경원의 발생 및 유지에 있어 중요한 역할을 하는 인자로 알려져 왔으며, 최근에는 발생과정 중 NGF와 GFAP의 역할에 도움을 주는 것으로 알려졌다. 본 연구에서는 이러한 NGF, GFAP, CNTF를 발생과정 중(임신 15,17,19,21일, 출생 1,2,3,일, 1,2,3주)의 몽골리안 저빌의 전뇌에서 시간에 따른 분포를 광학현미경, 형광염색을 통한 공초점현미경 및 전자현미경을 통해 알아보고자 하였다. 전뇌에서 NGF는 발생 19일령에서부터 대뇌피질에서 관찰되기 시작해서 후각망울, 해마체 및 diagonal band에 관찰되었고, 출생 3일령에서 가장 강한 염색성을 보였으며 그 반응은 출생 3주까지도 관찰되었다. GFAP는 출생17일령에서 뇌실로부터 아교세포가 관찰되는 형태가 보였으며, 외측뇌실과 제3뇌실에서부터 피질로 이동하는 형태로 관찰되었다. 또한 후각망울의 과립층, 대뇌피질 및 해마체에서 관찰되었으며, 출생 2일령에서 가장 강한 반응을 나타내었다. CNTF는 신경원과 신경아교세포에서 관찰되었으며, NGF와 GFAP와는 달리 출생 전에서는 관찰되지 않다가 출생 1일령부터 후각망울 및 대뇌피질에서 약하게 관찰되기 시작되었으며, 이러한 반응은 출생 2주령에서 잘 관찰되었다. 전자현미경상에서는 신경원과 신경아교세포에서 특징적인 구조는 관찰되지 않았으나, 각각의 항체에 대한 반응이 나타난 세포에서는 사립체와 형질내세망과 같은 세포소기관들이 많이 관찰되었다. 이러한 Mongolian gerbil 전뇌에서의 NGF, GFAP 및 CNTF의 분포는 비슷한 임신일령의 설치류와 거의 유사하게 관찰되었으며, 배아과정 및 출생 후 발달에 따른 전뇌에서의 신경원과 신경아교세포에서의 분포를 볼 수 있었다.
The purpose of this study was to evaluate whether berberine (BER) administration could attenuate depression- and anxiety-like behaviors and increase corticotrophin-releasing factor (CRF) and tyrosine hydroxylase (TH) expression following chronic morphine withdrawal in rats. Male rats were exposed to chronic, intermittent, escalating morphine (10~50 mg/kg) for 10 days. After the last morphine injection, depression- and anxiety-like beahvior associated with morphine discontinuation persisted for at least three days during withdrawal without any change in ambulatory activity. Daily BER administration significantly decreased immobility in the forced swimming test and increased open-arm exploration in the elevated plus maze test. BER administration also significantly blocked the increase in hypothalamic CRF expression and TH expression in the locus coeruleus (LC) and the decrease in hippocampal brain-derived neurotrophic factor (BDNF) mRNA expression. Taken together, these findings demonstrated that BER administration significantly reduced morphine withdrawal-associated behaviors following discontinuation of repeated morphine administration in rats, possibly through modulation of hypothalamic CRF and the central noradrenergic system. BER may be a useful agent for treating or alleviating complex withdrawal symptoms and preventing morphine use relapses.
Embryonic stem cells are capable of differentiating into a variety of cell lineages. However, the ultimate results of differentiation in vitro greatly depend on the duration of treatment and kinds of differentiating inducers added. In order to investigate the efficiencies of various differentiation inducers and the methods of treatment, we examined differentiation patterns of human embryonic stem cell (hESC, MB03) according to several different protocols. Exp. I) Upon differentiation using retinoic acid and ascorbic acid (RA/AA), embryoid bodies (EB, for 4days) derived from hESC was exposed to Rh (10$^{-6}$ M) and AA (50 mM) for 4 days, and were allowed to differentiate in N2 medium for 7, 14, 21, or 28 days. Exp. II) When bFGF was used, neuronal precursor cells were selected for 8 days in N2 medium after EB formation. After selection, cells were expanded at the presence of bFGF (20 ng/ml) for another 6 days followed by a final differentiation in N2 medium for 7, 14, 21 or 28 days. Exp. III) In addition, to examine the effects of neurotrophic factors in the production of mature neurons, groups of cells were exposed to either BDNF (5 ng/ml) or TGF-$\alpha$(10 ng/ml) during the 28 days of final differentiation. Differentiation patterns of RA/AA or bFGF treated groups were very similar; approximately 82% and 83% of the cells, respectively, were positive for anti-NF200 antibody, while it was about 10% and 11%, respectively, for anti-NF160 antibody in 28 days in N2 medium. Alsor, cells expressing TH were as low as 5%, while the cells doubled when matured at the presence of either BDNF or TGF-$\alpha$. Cells immunoreactive to anti-GAD antibody were approximately 20%. These results suggest that a maturation step rather than differentiation induction step, which is formation of EB, effects more decisively to the ultimate differentiation pattern.
As the large defect of peripheral nerve occurs, the autologous nerve graft is the most ideal method but it has many limitations due to donor site morbidities. Various materials have been developed for the nerve defect as the conduits, but none of these materials is satisfactory. Among them, $Gore-Tex^{(R)}$ tube seems to be one of the most ideal nerve conduit materials at peripheral nerve defect. Many researches have focused on finding the neurotrophic factors. It is recently demonstrated that Valproic acid(VPA) has an effect of axonal regeneration as a neurotrophic factor without enzymatic degradation and toxicity problems. The purpose of this study is to evaluate the effect of VPA on the nerve regeneration at the peripheral nerve defect. A 10 mm gap of rat sciatic nerve was made and $Gore-Tex^{(R)}$ tube filled with biceps femoris muscle was placed at the nerve defect site. We let the rat take VPA as drinking water in experimental group and did not give VPA to the control group. We estimated the results as electrophysiologic and histological aspects for 16 weeks after the surgery. The nerve conduction velocity, total myelinated axon count, myelin sheath thickness and mean nerve fiber diameter significantly increased in VPA-treated experimental group when compared to the control (p < 0.05). From the above results, we conclude that VPA promotes the nerve regeneration at the peripheral nerve defect site. It is suggested that $Gore-Tex^{(R)}$ tube filled with skeletal muscle and VPA administration may be a good substitute for autologous nerve graft.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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