목 적: 임신 전 $CD3^-/CD56^+/CD16^+$ 말초혈액 자연살해세포 (pbNK cell)의 분획과 세포용해 활성도를 정상군과 습관성 유산의 기왕력을 가진 환자군으로 나누어 비교, 분석하고 습관성 유산의 위험도를 제시할 수 있는 각각의 cut-off value를 설정하고자 하였다. 연구방법: 전향적 연구로서 습관성 유산의 기왕력이 있는 여성을 환자군 (n=35)으로 하였으며, 대조군으로 불임이나 습관성 유산의 기왕력이 없으며 정상아의 출산 경험이 있는 여성을 대조군 (n=15)으로 설정하였다. 유세포분석기를 이용하여 pbNK cell 분획 및 세포용해 활성도를 측정 후 그 결과를 비교 분석하였다. 결 과: pbNK cells의 분획은 습관성 유산 환자군에서 대조군에 비해 통계적으로 유의하게 높은 결과를 보였다($14.2{\pm}5.2$ vs. $9.4{\pm}3.7%$, p=0.002, 95% confidence interval [CI] 1.8~7.8). Receiver operating characteristic curve (ROC) 곡선을 이용하여 pbNK cell의 분획에 대한 cut-off values을 12.1%로 정하였을 때 습관성 유산의 위험도는 8.4배 증가하였다. pbNK cell의 K562 세포용해 활성도를 3가지 다른 Effector to Target (E:T) 비율 (50:1, 25:1, 12.5:1)을 사용하여 측정한 결과 각각의 경우에 있어 습관성 유산 환자군에서 대조군에 비해 통계적으로 유의하게 증가된 결과를 보였다 ($48.3{\pm}19.0$ vs. $31.3{\pm}11.9%$ in 50:1 ratio, p=0.002; $37.0{\pm}18.1$ vs. $20.2{\pm}9.2%$ in 25:1 ratio, p<0.001; $23.5{\pm}12.7$ vs. $12.4{\pm}7.3%$ in 12.5:1 ratio, p=0.001). ROC 곡선을 이용하여 각각 E:T 비율에서 세포용해 활성도의 cut-off values (43.1% in 50:1, 26.9% in 25:1, and 17.4% in 12.5:1)을 설정하여 분석한 결과 습관성 유산의 위험도는 각각 10.0배, 11.4배, 그리고 15.0배 증가된 결과를 보였다. 결 론: 원인이 분명하지 않은 습관성 유산 환자에서 pbNK cell의 분획과 세포용해 활성도를 측정하는 것은 면역학적 원인, 특히 동종면역 요인에 의한 습관성 유산의 유용한 진단 지표로 이용될 수 있을 것으로 사료된다. 향후 동종 면역반응에 의한 습관성 유산 환자에서 면역학적 원인의 치료 전, 후 pbNK cell의 분획과 세포용해 활성도를 측정, 비교하여 그 효과를 증명하는 연구가 필요할 것으로 생각된다.
목적 : 황기추출물이 생쥐의 5-FU로 유발된 골수억제와 삶의 질 저하의 개선에 미치는 효과를 연구하고자 한다. 방법 : 골수억제에 미치는 영향이 평가를 위해 Complete Blood Count, Histological Analysis of BM, Cell Colony Forming Assay for Hematopoietic Progenitor를 시행하고, 삶의 질에 미치는 영향을 평가하기 위해 Swimming Test, Survival Rate, Nitric Oxide (NO) Assay, $^{51}Cr$ Release Assay in NK Cell, mRNA Expressions of $IL-1{\beta}$, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, $TNF-{\alpha}$, $IFN-{\gamma}$, $TGF-{\beta}$ and GM-CSF in Spleen Cells를 시행하였다. 결과 : 황기추출물을 골수억제를 호전시켜 말초혈액수치를 회복시키고, 골수파괴를 보호하는 효과를 보이며, 대조군에 비해 혈구생성을 촉진시키며, 대조군에 비해 생존율과 수영시간을 증가시키며, 대식세포와 자연살상세포의 활동성을 증가시키며, 종양면역과 관련된 싸이토카인(IL-2, IL-6, $IFN-{\gamma}$)의 발현을 증가시켰다. 결론 : 5-FU로 유발된 골수억제와 삶의 질 저하의 개선에 미치는 황기추출물의 유용성이 기대되며 향후 이에 대한 지속적인 연구가 필요할 것으로 사료된다.
This study was performed to compare the effects of immuno-modulating activities of Rhodiola sachalinensis A. Bor. fractionized by consecutive solvent separation. The Cytotoxicity of all fractionized extracts on human kidney cell (HEK293) was lower than crude extracts. Generally, the butanol and chloroform extracts showed less cytotoxicity on about 10.07% and 9.67% than the crude extracts. For human immune B and T cell growth, chloroform fraction showed the highest cell growth compared to the control. The secretion of cytokines (IL-6, $TNF-\alpha$) on human B and T cells were increased by adding chloroform extracts. Also, NK cell growth was significantly improved up to nearly 30% by adding the supernatant of B cell medium grown with the chloroform fraction. It was also found that chloroform fraction could yield higher nitric oxide production from macrophage than untreated control cells. Differentiation of HL-60 cells was increased up to 131.9% after treatment with chloroform fraction extracts, compared to the control. These results indicate that the chloroform fraction of R. sachalinensis have high immune activation activity than others fractions and the crude extracts, implying that this chloroform fractions could be used a new functional material.
Objective: Our aim was to investigation the roles of MHC class I chain-related gene A(MICA) and natural killer cell group 2D(NKG2D) in human renal cancer cells. Materials and Methods: The expression of membrane MICA (mMICA) on renal cells and NKG2D on NK cells were detected by flow cytometry (FCM); the content of sMICA were detected by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) and the distribution of mMICA on renal tumor tissues by immunohistochemistry; the interaction between MICA and NKG2D was observed by antibody closed method. Results: Our results showed that the expression of mMICA in renal cancer tissues was significantly higher than in controls, where the soluble MICA was not expressed. Cytotoxic activity of NK cells was significantly reduced after exposure to NKG2D and MICA antibodies (P<0.05), and serum containing sMICA can obviously lower the function of NKG2D (P<0.05). Conclusions: The interaction of mMICA and NKG2D play important roles in mediation of cytotoxicity of NK cells in RCC. On the other hand, sMICA may mediate tumor immune escape through down- regulated NKG2D expression.
This study was performed to investigate a methodology of improving immune activities of Berberis koreana Palibin by ultra high pressure on low temperature extraction process. Extraction yield was enhanced up to more than 35% by above process, compare to the control and extraction average. The cytotoxicity on human kidney cell (HEK293) was showed below 20.4%, 21.6% in adding 1.0 mg/ml of the highest concentration. Generally, the extracts by ultra high pressure extraction process showed less toxicity about 5% than the other processes. It could tell that toxic materials that existing in the plant could be reduced or broken by ultra high pressure process due to can be broken bond such the hydrogen bond, the electrostatic bond, the van der Waals bond, and the hydrophobic bond, can be broken by high pressure. The result could be employed to develop a new type of functional food from B. koreana Palibin by low temperature high pressure process.
참당귀로부터 열수추출 및 에탄올 침전법을 이용해 조다당을 분리하고 DEAE-Sepharose FF와 Sephadex G-100을 이용하여 얻은 정제 다당 AGE-2c-I을 대상으로 선천 면역 활성 및 항종양 전이 효과를 확인하고자 하였다. 인체의 초기 면역 반응에 있어 중추적인 역할을 수행하는 보체계 활성화 및 활성화 경로를 확인한 결과, AGE-2c-I은 운지버섯 유래 시판 면역증강제인 PSK에 준하는 우수한 활성을 나타내는 것으로 확인되었으며. 본 활성은 주로 고전경로를 통하여 활성화되며 일부 부경로를 경유하는 것으로 최종 확인되었다. 또한 AGE-2c-I은 mouse 복강 유래 대식세포에 대해 직접적인 독성을 나타내지 않으며 종양세포주 YAC-1 및 B16BL6에 대한 직접적인 독성 또한 나타나지 않음을 확인함으로써 시료의 직접적인 독성에 근거한 항암 효과는 없는 것으로 확인되었다. 반면에 비장으로부터 분리한 림프구는 8 ㎍/mL의 AGE-2c-I 처리에 의해 증식능이 관찰되었다. AGE-2c-I이 대식세포의 cytokine 분비능에 미치는 효과를 확인한 결과, 우수한 IL-6, IL-12 및 TNF-α 분비능을 보였으며 시료를 200 ㎍ 및 1,000 ㎍의 고농도로 처리한 실험군에서 IL-10이 분비된 것으로 보아 AGE-2c-I은 immune-stimulator의 역할뿐만 아니라 immune-suppressor로서의 작용 또한 가능한 것으로 확인되었다. 한편 종양 및 암세포에 대하여 직접적인 살해 활성을 나타내는 NK cell 활성을 확인한 실험에서는 농도 의존적인 종양 세포 살해능을 확인할 수 있었으며 100 ㎍/mouse 농도에서 NC 대비 약 1.5배 높은 NK cell 활성을 나타냈을 뿐만 아니라, 폐에 대한 고전이성 종양세포주인 B16BL6 melanoma 세포를 이용한 실험동물 종양 전이 모델에선 100 ㎍/mouse 농도로 처리한 실험군이 NC 대비 58%의 colony가 감소한 것을 확인할 수 있었다. 이상의 결과로 부터 참당귀 유래 RG-I 구조의 다당은 높은 선천면역계 자극 활성, 특히 보체계, 대식세포, 림프구 증식, NK cell의 활성화를 통해 우수한 항종양 전이 효과를 갖는 것으로 최종 확인되었으며 건강기능성식품 소재로의 개발가치가 우수한 것으로 판단되었다.
Extracts from Asian medicinal herbs are known to be successful therapeutic agents against cancer. In this study, the effects of three types of herbal extracts on anti-tumor growth were examined. Among the three types of herbal extracts, H9 showed stronger anti-tumor growth effects than H5 and H11 in vivo. To find the molecular mechanism by which H9 inhibited the proliferation of breast cancer cell lines, the levels of apoptotic markers were examined. Proapoptotic markers, including cleaved PARP and cleaved caspases 3 and 9, were increased, whereas the anti-apoptotic marker Bcl-2 was decreased by H9 treatment. Next, the combined effect of H9 with the chemotherapeutic drugs doxorubicin/cyclophosphamide (AC) on tumor growth was examined using 4T1-tumor-bearing mice. The combined treatment of H9 with AC did not show additive or synergetic anti-tumor growth effects. However, when tumor-bearing mice were co-treated with H9 and the targeted anti-tumor drug trastuzumab, a delay in tumor growth was observed. The combined treatment of H9 and trastuzumab caused an increase of natural killer (NK) cells and a decrease of myeloid-derived suppressor cells (MDSC). Taken together, H9 induces the apoptotic death of tumor cells while increasing anti-tumor immune activity through the enhancement of NK activity and diminishment of MDSC.
In order to investigate the effect of Samulbyulgapchoengpitang(SB) and one herb added(SBA) on anti-tumor and immune response, the author performed this experimental study, Tumor weight(TW), mean survival days(MSD) and body weight(BW) in vivo, natural killer cell activity(NKCA). rosette forming cells(RFC), phagoctic activity in recticuloendomethrial system(PA), delayed type hypersensitivity(DTH), hemoagglutinin titer(HA) and hemolysine(HL) in vitro were measured in mice. 1. MSD was prolonged in both of treated groups(SB and SBA) as compared with control group. 2. TW was decreased in both of treated groups with statistical significance as compared with control group. 3. BW was increased in both of treated groups and just only in SB with statistical significance as compared with control group. 4. DTH was increased in both of treated groups with statistical significance as compared with control group. 5. HA was increased in both of treated groups with statistical significance as compared with control group. 6. HL was increased in both of treated groups with statistical significance as compared with control group. 7. RFC was increased in both of treated groups and just only in SB with statistical significance as compared with control group. 8. NKCA was increased in both of treated groups with statistical significance as compared with control group. 9. PA was increased in both of treated groups with statistical significance as compared with control group. According to the above experimental results, it is suggested that SB and SBA will have anti-tumor substance and enhance the effect of immune response. But we have to consider the longtime prescription of SBA because there have been no experiments in its side effect or accumulation in body.
This study was performed to investigate the effects of Eunwhasagantang and Eunwhasagantangganokyong on the viability of tumor cells in vitro(MTT assay), on antitumor effects after Sarcoma-180 cells transplantation into the peritoneal cavity or left groin, and on decreased immune responses in mice induced by methotrexate. The extracts of its herbal medicines were orally administered for 14 or 21 days. To evaluate the effects of the Eunwhasagantang and Eunwhasagantangganokyong many items such as 50% inhibitory concentration($IC_{50}$), mean survival days, tumor and body weight for antitumor effects, and delayed type hypersensitivity, hemagglutinin titer, hemolysin titer, rosette forming cells, natural killer cell activity, lymphocyte transformation, productivity of interleukin-2 and phagocytic activity for immune responses were measured in ICR mice. The results were obtained as follows; 1. $IC_{50}$ of Eunwhasagantang treated group was 0.000204mg/ml on SNU-396 and that of Eunwhasagantangganokyong treated group was 0.000103mg/ml on SNU-1, those results indicate that the medicine has high antitumor activity. 2. Mean survival times in Eunwhasagantang and Eunwhasagantangganokyong treated groups were slightly increased with no significance, as compared with the control group. 3. Tumor weight in Eunwhasagantang and Eunwhasagantangganokyong treated group was depressed, as compared with the control group(p<0.01). 4. Body weight in Eunwhasagantang and Eunwhasagantangganokyong treated group was significantly increased, as compared with the control group(p<0.05). 5. Delayed type hypersensitivity in Eunwhasagantang and Eunwhasagantang-ganokyong treated group was slightly decreased with no significance, as compared with the control group. 6. Hemagglutinin titer in Eunwhasagantang and Eunwhasagantangganokyong treated group was slightly increased with no significance, as compared with the control group. 7. Hemolysin titer only in Eunwhasagantang treated group was significantly increased, as compared with the control group(p<0.01). 8. Rosette forming cells only in Eunwhasagantangganokyong treated group was slightly increased with no significance, as compared with the control group. 9. In the NK cell activity, the ratio of effector cells and target cells of the Eunwhasagantang treated group was significantly increased(p<0.01) in case which the ratio was 100: 1, and that of the Eunwhasagantangganokyong treated group was significantly increased(P<.01, p<0.05) in case which the ratio was 100:1, 50:1, as compared with the control group. 10. Lymphocyte trasnformation in Eunwhasagantang and Eunwhasagantangganokyong treated group was significantly increased, as compared with the control group(p<0.01). 11. Interleukin-2 in Eunwhasagantang and Eunwhasagantangganokyong treated group was significantly increased, as compared with the control group(p<0.05, p<0.01). 12. Phagocytic activity in Eunwhasagantang and Eunwhasagantangganokyong treated group was significantly increased, as compared with the control group(p<0.05). According to the above results, it could be suggested that Eunwhasagantang and Eunwhasagantangganokyong have prominent antitumor effects, and enhance both cellular and humoral immunity.
Objective : The purpose of this study was to investigate acute and subacute toxicity and sarcoma-180 anti-cancer effects of herbal acupuncture with cultivated wild ginseng (distilled) in mice and rats. Method : Balb/c mice were injected intravenous with cultivated wild ginseng herbal acupuncture for $LD_{50}$ and acute toxicity test. Sprague-Dawley rats were injected intravenous with cultivated wild ginseng herbal acupuncture for subacute toxicity test. The cultivated wild ginseng herbal-acupuncture was injected at the tail vein of mice. Results : 1. In acute $LD_{50}$ toxicity test, there was no mortality thus unable to attain the value. 2. Examining the toxic response in the acute toxicity test, there was no sign of toxication. 3. In acute toxic test, running biochemical serum test couldn't yield any differences between the control and experiment groups. 4. In subacute toxicity test, there was no sign of toxication in the experimental groups and didn't show any changes in weight compared to the normal group. 5. In subacute toxicity test, biochemical serum test showed significant increase of Total albumin, Albumin, and Glucose in the experimental group I compared with the control group. Significant decrease of GOT, ALP, GPT, and Triglyceride were shown. In experiment group II, only Glucose showed significant increase compared with the control group. 6. Measuring survival rate for anti-cancer effects of Sarcoma-180 cancer cell line, all the experimental groups showed significant increase in survival rate. 7. Measuring NK cell activity rate, no significant difference was shown throughout the groups. 8. Measuring Interleukin-2 productivity rate, all the experimental groups didn't show significant difference. 9. For manifestation of cytokine mRNA, significant decrease of interleukin-10 was witnessed in the experimental group compared to the control group. Conclusion : According to the results, we can conclude cultivated wild ginseng herbal acupuncture caused negligible toxicity, and had anti-tumor effects in mice.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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