Effects of Nattokinase fibrinol (NKF), defined as a fibrinolytic product, on fibrinolytic and atherogenetic markers were studied for healthy adults (20-31 years old), who is smoking more than 20 cigarettes per day. Subjects were divided into 29 for NKF group and 10 for placebo group in a short term study. They were given 2 tablets of NKF (4,000 unit) or placebo tablet and thereafter blood samples were collected at 0, 2, 4 hr prerid. For a 4-week long term study, 15 subjects for NFK group and 10 subjects for placebo group were supplemented one tablet of each NKF (2,000 unit) and placebo per day, respectively. Blood samples were collected at 0, 1, 2, 4 weeks later. The short-term experimental trial showed that NKF remarkably increased fibrinolytic activity at 2hr after consumption, which was maintained up to 4 hr, relative to that of placebo, while NKF reduced the euglobulin clot lysis time (ECLT) and retarded the activated partial thromboplastin time (aPTT), as compared to placebo group. NKF supplementation for 4 weeks elevated fibrinolytic activity, shortened ECLT and retarded aPTT. Furthermore, NKF supplementation increased anti-atherogenic index by decreasing triglyceride (TG) and elevating high-density lipiprotein (HDL)-cholesterol. These results indicate that NKF supplementation for short term or long term might have beneficial effects on preventing and treating cardiovascular disease by increasing fibrinolytic activity and improving atherogenic markers such as hyperlipidemia.
The alkaline protease gene was cloned from a halo-tolerant alkalophilic Bacillus clausii I-52 isolated from the heavily polluted tidal mud flat of West Sea in Inchon Korea, which produced a strong extracellular alkaline protease (BCAP). Based on the full genome sequence of Bacillus subtilis, PCR primers were designed to allow for the amplification and cloning of the intact pro-BCAP gene including promoter region. The full-length gene consists of 1,143 bp and encodes 381 amino acids, which includes 29 residues of a putative signal peptide and an additional 77-amino-acid propeptide at its N-terminus. The mature BCAP deduced from the nucleotide sequence consists of 275 amino acids with a N-terminal amino acid of Ala, and a relative molecular weight and pI value was 27698.7 Da and 6.3, respectively. The amino acid sequence shares the highest similarity (99%) to the nattokinase precursor from B. subtilis and subtilisin E precursor from B. subtilis BSn5. The substrate specificity indicated that the recombinant BCAP could hydrolyze efficiently the synthetic substrate, N-Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-pNA,and did not hydrolyze the substrates with basic amino acids at the P1 site. The recombinant BCAP was strongly inhibited by typical serine protease inhibitor, PMSF, indicating that BCAP is a member of the serine proteases.
Bacillus sp. strain K-l, which produces a strong fibrinolytic enzyme, was isolated from chongkukjang, a traditional Korean fermented soybean paste. The fibrinolytic enzyme was purified from chongkukjang base by using ammonium sulfate fractionation and chromatographic techniques. Purified enzyme, CK K-1 was demonstrated to be homogeneous by SDS-PAGE and isoelectric focusing electrophoresis, and has molecular mass of a 12.4 kDa and a pI of 8.0. The optimal reaction pH value and temperature were 8.0 and $40^{\circ}C$, respectively. Phenyl-methyl-sulfonyl-fluoride (PMSF; serine protease inhibitor), ethylene-diamine-tetra-acetic acid (EDTA; metallo protease inhibitor), copper ion, ferric ion and lead ion inhibited the enzyme activity. These results indicated that the fibrinolytic enzyme is a metallo-serine protease and different from nattokinase and chongkukjangkinase.
Lee Sun-Yi;Kim Bo-Hye;Kang Ju-Hyung;Cho Hyo-Jin;Kong Eun-Hee;Moon Sang-Wook;Kim Yeong-Jin;Ahn Soon-Cheol
Journal of Life Science
/
v.16
no.2
s.75
/
pp.360-364
/
2006
Fibrin clots of blood vessels are one of the serious factor caused cardiovascular disease. The development of a antithrombotic and thrombolysis solvent is necessary to prevent and treat these diseases. It has been reported that a strong fibrin-specific fibrinolytic enzyme was produced from a Korean fermented soybean paste similar to Japanese miso. We have been screened the known or novel fibrinolytic enzymes by activity-based and sequence-based screening from soil DNA metagenome library containing all kinds of environmental genomic DNA. The activity-based screening was determined the protease activity on 0.5% skim milk. For sequence-based screening, we designed a set of primer expanding gene sequence of fibrinolytic enzyme, performed PCR and selected clones showing the expected size of amplicons from metagenome library. Transformation of the gene encoding fibrinolytic enzyme was carried out with commercial vectors and their transformants were selected. Finally, we found 15 positive clones from metagenome library. Then each of sequences were analyzed and identified as similar or known the clones of nattokinase. We are going to perform full sequence of each clones, ligate with expression vector, transform into competent cells and then determine activity of expressed enzymes.
Fibrinolytic microorganisms were screened from 42 samples of Korean fermented food (7 kinds of Chungook-jang, 14 kinds of commercial Doen-Jang, 5 kinds of home-made Doen-jang, and 16 kinds of Jeot-gal), 15 samples of Japanese fermented food (5 kinds of home-made soybean paste, and 10 kinds of Natto), and 19 samples of Indonesian fermented food (Tempe) as well as starters of Meju (500 microflora from Korea, and 22 from China). Initially, 11 isolates with strong fibrinolytic activity were selected for further characterization. The fibrinolytic activity of the 11 isolates ranged from 89 to 199% of standard plasmin. Four strains, M5l from Korean fermented food (Meju), I 1-1, I 1-4, and I 5-1 from Indonesian fermented food (Tempe), were chosen based on the degree of activity and reproducibility, and identified as Staphylococcus sciuri, Citrobacter or Enterobacter, Enterococcus faecalis, and Bacillus subtilis, respectively. The first two isolates are pathogenic stains while the latter two are considered as GRAS (Generally Recognized As Safe). Fibrinolytic activity of E. faecalis, characterized and designated as BRCA-5, reached a maximum, when the producer was cultivated in Ml7 broth supplemented with 1.0% glucose for 5 h at 37$^{\circ}C$ with shaking at 180 rpm. Compared to commercial fibrinolytic enzymes, the cell-free culture supernatant of 5. faecaiis BRCA-5 showed stronger activity than plasmin and streptokinase, but similar degree of specific activity as nattokinase and urokinase, aud it also demonstrated anticoagulant and antiplatelet activity ex vivo. These features of E. faecalis make it an attractive agent as a biomaterial for health-promoting foods.
Kim, Jieun;Choi, Kyoung-Hwa;Kim, Jeong Hwan;Song, Young-Sun;Cha, Jaeho
Journal of Life Science
/
v.23
no.1
/
pp.15-23
/
2013
AprE51 from Bacillus amyloliquefaciens CH51 is a 27 kDa subtilisin-like protease with fibrinolytic activity. AprE51-6 showing increased catalytic activity was produced previously. To enhance the thermostability of AprE51-6, 2 residues, Gly-166 and Asn-218 based on B. subtilis subtilisin E were mutated by site-directed mutagenesis. The results of the mutational analysis showed that substitution of arginine for Gly-166 (AprE51-7) increased the fibrinolytic activity 1.8-fold. An N218S mutant (AprE51-8) also increased the fibrinolytic activity up to 4.5-fold in a fibrin plate assay. Purified AprE51-7 and AprE51-8 mutants had a 1.9- and a 2.5-fold higher $k_{cat}$, respectively, and a 2.1-1.9-fold lower $K_m$, respectively. This resulted in a 3.8- and a 4.7-fold increase in catalytic efficiency ($k_{cat}/K_m$), respectively, relative to that of wild-type AprE51. AprE51-8 had a broader pH range than AprE51-6 and nattokinase, especially at an alkaline pH value. In addition, AprE51-8 showed higher thermostability than AprE51-6 at $60^{\circ}C$. The half-lives of AprE51-7 and AprE51-8 at $50^{\circ}C$ were 21.5 and 27.3 min, respectively, which are 2.0 and 2.6 times longer, respectively, than that of the wild-type AprE51.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.