The aim of this study was carried to the induction of follistatin-like 1 (FSTL1) in rat myometrium tissue by exogenous estrogen. PCR was performed by using estrogen treatment after ovariectomy of myometrium mRNA and only ovariectomy of myometrium mRNA and on ovariectomy of myometrium mRNA in rat normal uterus tissue. The PCR products were visualized on agarose gel (1.2%) electrophoresis. FSTL1 mRNA expression level was significantly higher (**P<0.001 or *P<0.05) in estrogen treatment after ovariectomy than in only ovariectomy, and was significantly higher (**P<0.001) in no ovariectomy than in estrogen with treatment after ovariectomy. In conclusion, Although the mechanisms of FSTL1 gene were uncertain, It also might be inducted by exogenous estrogen. And also it is thought to be related to the estorgen mechanism.
The present study was performed to identify the relationship between plasminogen activator (PA) and Heat Shock Protein-90 (HSP-90) in porcine uterus tissues during the estrous cycle. Porcine uterus tissues were obtained from preovulatory (Pre-Ov), post-ovulatory (Post-Ov) and early to mid-luteal (Early-mid L) stages. The protein was extracted from uterus tissue by using M-PER Mammalian Protein Extraction Reagent. Proteins were refined by RIPA Buffer and quantified by BCA methods. As results, t-PA expression was significantly (p<0.05) higher from pre-ovulatory(Epithelium tissue: $29,067{\mu}g/{\mu}l$, Myometrium tissue: $30,797{\mu}g/{\mu}l$) compared to the post-ovulatory stage(Epithelium tissue: $54,357{\mu}g/{\mu}l$, Myometrium tissue: $53,270{\mu}g/{\mu}l$) and early to mid-luteal stage(Epithelium tissue: $42,380{\mu}g/{\mu}l$, Myometrium tissue: $43,139{\mu}g/{\mu}l$). On the other hand, the uPA expression indicated higher from early to mid-luteal stage (Epithelium tissue: $0.02198{\mu}g/{\mu}l$, Myometrium tissue: $0.02412{\mu}g/{\mu}l$) than pre-ovulatory stage (Epithelium tissue: $0.01577{\mu}g/{\mu}l$, Myometrium tissue: $0.01531{\mu}g/{\mu}l$) and post-ovulatory stage(Epithelium tissue: $0.01414{\mu}g/{\mu}l$, Myometrium tissue: $0.01429{\mu}g/{\mu}l$). However, expression of u-PA did not differ from each estrous cycle in the epithelium tissue and myometrium tissue(p<0.05). Expression of HSP-90 was differ t-PA and u-PA from pre-ovulatory in Epithelium tissue($25,423{\mu}g/{\mu}l$) and early to mid-luteal stage in epithelium tissue($177,922{\mu}g/{\mu}l$) and myometrium tissue($26,664{\mu}g/{\mu}l$). These results suggest that HSP-90 and u-PA were related with change of uterus cycle according to the reformation of the tissues in porcine uterus.
Kyeong, Kyu-Sang;Hong, Seung Hwa;Kim, Young Chul;Choi, Woong;Myung, Sun Chul;Lee, Moo Yeol;You, Ra Young;Kim, Chan Hyung;Kwon, So Yeon;Suzuki, Hikaru;Park, Yeon Jin;Jeong, Eun-Hwan;Kim, Hak Soon;Kim, Heon;Lim, Seung Woon;Xu, Wen-Xie;Lee, Sang Jin;Ji, Il Woon
The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
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제20권5호
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pp.547-556
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2016
Myometrial relaxation of mouse via expression of two-pore domain acid sensitive (TASK) channels was studied. In our previous report, we suggested that two-pore domain acid-sensing $K^+$ channels (TASK-2) might be one of the candidates for the regulation of uterine circular smooth muscles in mice. In this study, we tried to show the mechanisms of relaxation via TASK-2 channels in marine myometrium. Isometric contraction measurements and patch clamp technique were used to verify TASK conductance in murine myometrium. Western blot and immunehistochemical study under confocal microscopy were used to investigate molecular identity of TASK channel. In this study, we showed that TEA and 4-AP insensitive non-inactivating outward $K^+$ current (NIOK) may be responsible for the quiescence of murine pregnant longitudinal myometrium. The characteristics of NIOK coincided with two-pore domain acid-sensing $K^+$ channels (TASK-2). NIOK in the presence of $K^+$ channel blockers was inhibited further by TASK inhibitors such as quinidine, bupivacaine, lidocaine, and extracellular acidosis. Furthermore, oxytocin and estrogen inhibited NIOK in pregnant myometrium. When compared to non-pregnant myometrium, pregnant myometrium showed stronger inhibition of NIOK by quinidine and increased immunohistochemical expression of TASK-2. Finally, TASK-2 inhibitors induced strong myometrial contraction even in the presence of L-methionine, a known inhibitor of stretch-activated channels in the longitudinal myometrium of mouse. Activation of TASK-2 channels seems to play an essential role for relaxing uterus during pregnancy and it might be one of the alternatives for preventing preterm delivery.
Although extracellular $Ca^{2+}$ entry through the voltage-dependent $Ca^{2+}$ channels plays an important role in the spontaneous phasic contractions of the pregnant rat myometrium, the role of the T-type $Ca^{2+}$ channels has yet to be fully identified. The aim of this study was to investigate the role of the T-type $Ca^{2+}$ channel in the spontaneous phasic contractions of the rat myometrium. Spontaneous phasic contractions and $[Ca^{2+}]_i$ were measured simultaneously in the longitudinal strips of female Sprague-Dawley rats late in their pregnancy (on day 18 ${\sim}$ 20 of gestation: term=22 days). The expression of T-type $Ca^{2+}$ channel mRNAs or protein levels was measured. Cumulative addition of low concentrations (< 1 ${\mu}M$) of nifedipine, a L-type $Ca^{2+}$ channel blocker, produced a decrease in the amplitude of the spontaneous $Ca^{2+}$ transients and contractions with no significant change in frequency. The mRNAs and proteins encoding two subunits (${\alpha}$ 1G, ${\alpha}$ 1H) of the T-type $Ca^{2+}$ channels were expressed in longitudinal muscle layer of rat myometrium. Cumulative addition of mibefradil, NNC 55-0396 or nickel induced a concentration-dependent inhibition of the amplitude and frequency of the spontaneous $Ca^{2+}$ transients and contractions. Mibefradil, NNC 55-0396 or nickel also attenuated the slope of rising phase of spontaneous $Ca^{2+}$ transients consistent with the reduction of the frequency. It is concluded that T-type $Ca^{2+}$ channels are expressed in the pregnant rat myometrium and may play a key role for the regulation of the frequency of spontaneous phasic contractions.
Adenomyosis is a common gynecological disorder characterized by the presence of endometrial glands and stroma deep within the myometrium associated with myometrial hypertrophy and hyperplasia. Focal uterine infarction after IVF-ET in a patient with adenomyosis following biochemical pregnancy has not been previously reported, although it occurs after uterine artery embolization in order to control symptoms caused by fibroids or adenomyosis. We report a case of a nulliparous woman who had uterine adenomyosis presenting with fever, pelvic pain and biochemical abortion after undergoing an IVF-ET procedure and the detection of a slightly elevated serum hCG. Focal uterine infarction was suspected after a pelvic magnetic resonance imaging demonstrated preserved myometrium between the endometrial cavity and inner margin of the necrotic myometrium. This case demonstrates that focal uterine infarction should be considered in the differential diagnosis of acute abdominal pain, vaginal bleeding and infectious signs in women experiencing biochemical abortion after an IVF-ET procedure.
Adenomyosis is a nonneoplastic proliforation of uterine glands characterized by multicentric infiltration of endometrial tissues into the myometrium. A female domestic short hair cat with unknown age was referred to local animal hospital in Busan for ovariohysterectomy to prevent the unwanted offspring. At the time of surgery, the uterus was enlarged with multiple nodular protrusion on the serosa. On the cut surface of uterus, elevation of the endometrium and hypertrophied myometrium were observed. Microscopically, the uterus was characterized by severe proliforation of endometrial glands into the lumen and within the myometrium. The intra-myometrial endometrium is circumferentially surrounded by bundles of hypertrophic smooth muscle cells. These endometrial glands had tall columnar epithelium lacking nuclear atypia and mitoses. In our best knowledge, this is the first report of feline adenomyosis in Korea.
The properties of cytosolic $Ca^{2+}$ level$([Ca^{2+}]_i)$ movement of high KCl, carbachol and oxytocin were examined with myometrium isolated from non-pregnant rat(estrus cycle). High concentration of KCl$({\leq}23.3mM)$ induced rhythmic increases in $[Ca^{2+}]_i$ and muscle contraction. However, sustained $[Ca^{2+}]_i$ and contracion were obtained at higher KCl concentration $({\geq}30.3mM)$ The rhythmic and sustained contraction closely associated with changes in $[Ca^{2+}]_i$ induced by high KCl. Carbachol $(3{\sim}30{\mu}M$ generated rhythmic increases with tonic component in $[Ca^{2+}]_i$ and muscle contraction. Myometrial contraction stimulated by carbachol was also closely correlated with change in $[Ca^{2+}]_i$. And the $[Ca^{2+}]_i/contraction$ relationships were similar when muscle strips were stimulated by high KCl and carbachol. Maximal concentration of carbachol $(10{\mu}M)$ and oxytocin(100 nM) increased $[Ca^{2+}]_i$ and contraction which were slightly greater than that of high KCl in non-pregnant myometrium, respectively. However, the $[Ca^{2+}]_i$ and contraction were strongly inhibited by verapamil $(10{\mu}M)$, a 1-type $Ca^{2+}$ channel blocker, as in the case of high KCl. Additionally, although carbachol further increased $[Ca^{2+}]_i$ and contraction induced by high KCl, these changes also strongly inhibited by application of verapamil. These results suggest that uterotonic agents, carbachol and oxytocin, induced contraction by increase in $[Ca^{2+}]_i$ through $Ca^{2+}$ influx than by a regulation of $Ca^{2+}-sensitization$ in non-pregnant myometrium.
본 연구는 자궁근종 성장에 관한 분자생물학적인 기전의 이해를 위해 자궁근종 및 정상 자궁근세포의 초기 배양방법을 확립하기 위해 실시하였다. 이를 위해 최종적으로 두 가지 세포 배양 방법이 확립되었다. 그리고 안정적으로 연구(특히, 여성호르몬에 대한 반응 연구)에 사용할 수 있는 가장 적합한 세포 배양 방법이 모색되었다. 두 가지 세포 배양 조건 중 두 번째 방법(method 2)이 안정적으로 세포의 반응을 연구하는데 더 나은 방법으로 결론 내려졌고, 여성호르몬에 대한 반응이 더 좋은 것으로 밝혀졌다. 이 방법을 통해 배양된 세포에 $E_2$를 처리했을 때 정상 자궁근세포에 비해 근종세포에서 PR, IGF-1 and IGF-1 receptor mRNA의 발현이 더 높은 것으로 나타났다. 더욱이 주변에 있는 세포들보다는 조직에서 좀 더 큰 반응을 보였으며, 이는 $E_2$에 대한 세포의 반응에 세포외기질(extracellular matrix)과 세포 사이의 상호작용이 필요하다는 것을 의미한다. 결론적으로 이러한 근종세포 및 조직의 초기 배양 방법은 in vitro 상에서 종양 발생에 대한 기초연구를 위해 유용하게 사용될 수 있을 것으로 사료된다.
This paper was carried out to observe prostaglandin $F_{2{\alpha}}$-induced morphological changes in the placenta. White mice received intramuscular injections of $PGF_{2{\alpha}}$(containing dinoprost tromethamine 0.5mg/ml, Upjohn Co.) in once or twice with doses of 0.1ml on 10th to 18th day of their respective pregnancies, the histological changes of the placentae and ovaries were observed with light microscope. Abortion within 21 to 51 hours following $PGF_{2{\alpha}}$ administration occurred in the pregnant mice. Vacuolization of trophospongial cells, giant cells and myometrium under decidua basalis, spherical acidophilic inclusion bodies of various sixtes in trophospongial cells and giant cells. hydropic degeneration and necrosis of labyrinthine trophoblasts and yolk cells, and infltration of neutrophils in the placenta and the uterus were observed. In addition, there were decrease in glycogen of the placental labyrinth and the visceral yolk sac, but increase in glycogen deposit of mesometrial myometrium. Atrophy and increase in number of large lipid droplets of the luteal cells and proliferation of fibroblasts were also recognized in the corpora lutea.
가토 자궁 근충에서 분리한 상피세포를 10% 송아지혈청, 3mM glutamine이 함유한 Basal Eagle 배지에서 배양한 결과 세포 성장 시간은 53시간이 소요되었고, estrogen에 insulin을 첨가했을 때는 40시간으로 감소하였다. Creatine kinase 활성 단위는 단백질 mg당 0.019 unit이었다. 활성의 30%가 이온상태가 높은 완충액에서 추출되었고, plasminogen 활성 인자는 세포 백만당 140 CTA unit였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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