[ $\beta$ ]-Fructofuranosidases, a family 32 of glycoside hydrolases (GH32), share three conserved domains including the W(L/M)(C/N)DP(Q/N), FRDPK, and ECP(D/G) motifs. The functional role of the conserved acidic residues within three domains of levan fructotransferase, one of the $\beta-fructofuranosidases$, from Microbacterium sp. AL-210 was studied by site-directed mutagenesis. Each mutant was overexpressed in E. coli BL21(DE3) and purified by using Hi-Trap chelating affinity chromatography and fast performance liquid chromatography. Substitution of Asp-63 by Ala, Asp-195 by Asn, and Glu-245 by Ala and Asp decreased the enzyme activity by approximately 100-fold compared to the wild-type enzyme. This result indicates that three acidic residues Asp-63, Asp-195, and Glu-245 play a major role in catalysis. Since the three acidic residues are present in a conserved position in inulinase, levanase, levanfructotransferase, and invertase, they are likely to have a common functional role as nucleophile, transition state stabilizer, and general acid in $\beta-fructofuranosidases$.
Journal of Physiology & Pathology in Korean Medicine
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v.28
no.4
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pp.411-416
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2014
Simple formulas (單方) of muscle section in Donguibogam (東醫寶鑑) have long been prescribed for strengthening muscle and/or prevention of age-related muscle loss. However, biological activity and mechanisms by which they influence myoblast differentiation have not been studied. Therefore, in this study, we evaluated the effects of 14 simple formulas on myoblast differentiation in C2C12 myoblast cells under non-cytotoxic ($0.5mg/m{\ell}$) conditions. C2C12 cells were treated with water extracts of simple formulas for 72 h, and RT-PCR was performed to determine the gene expression levels of myogenic regulatory factors (MRFs), including myoD, myogenin, MRF4, myf5, and insulin like growth factor-1 (IGF-1). Treatment with Colocasiae Rhizoma (CR), Pini Semen (PS), and Sesami Semen (SS) resulted in a significant increase in expression of myogenin in C2C12 cells. Treatment with Allii Macrostemi Bulbus (AM), Colocasiae Rhizoma (CR), and Pini Semen (PS) also resulted in increased expression of MRF4 in C2C12 cells. In addition, enhanced expression of IGF-1 was observed in treatment with Eucommiae cortex (EC), Dioscoreae Rhizoma (DR), Colocasiae Rhizoma (CR), Pini Semen (PS), and Sesami Semen (SS) in C2C12 cells. These results indicate that simple formulas of muscle section in Donguibogam could potentially enhance myoblast differentiation at least in part via increasing expression of myogenin, and/or MRF4 and/or IGF-1.
The purpose of this study was to investigate the functional involvement of sympathetic nerve in the control of the microcirculation in the dental pulp with the aim of elucidation of the involvement of neuropeptides and sympathetic nerve in neurogenic inflammation. Experiments were done on the 7 cats anesthetised with sodium pentobarbital, and sympathetic nerve to the' dental pulp was stimulated electrically (10 Hz, 4 V, 1.5 ms, 3.5 mins). Ana-adrenoceptor antagonist phentolamine and a neuropeptide Y antagonist D-myo-inositol-1,2,6-trisphosphate (PP56) were injected close intra-arterially into the dental pulp without changing the systemic blood pressure. The probe of laser Doppler flowmeter was placed on the buccal surface of ipsilateral canine teeth to the stimulation, and pulpal blood flow was measured. Stimulation of the sympathetic nerve decreased pulpal blood flow by $55.24{\pm}7.74\;%$ (mean${\pm}$SEM, n = 13). Stimulation of the sympathetic nerve following the injection of the ${\alpha}$-adrenoceptor antagonist phentolamine ($0.1{\mu}g$/kg) caused decrease of pulpal blood flow by $14.35{\pm}3.43%$ (mean${\pm}$SEM, n=5). Phentolamine attenuated the sympathetic nerve-induced pulpal blood flow decrease by $74.02{\pm}9.32%$ (mean${\pm}$SEM) Stimulation of the sympathetic nerve following the injection of the neuropeptide Y antagonist PP56 (2.3 mg/kg) caused decrease of pulpal blood flow by $30.64{\pm}7.92%$ (mean${\pm}$SEM, n=6). PP56 attenuated the sympathetic nerve-induced pulpal blood flow decrease by $44.37{\pm}11.01%$ (mean${\pm}$SEM). These data provide evidences of the co-contribution of nerepinephrine and neuropeptide Y on the sympathetic nerve-induced vasoconstriction in the feline dental pulp. In addition, they show functional evidences that sympathetic nerve plays an active role in controlling the microcirculation of the dental pulp.
We investigated the beneficial effects of Ecklonia cava by-product (ECB), a residual product obtained after polyphenol extraction from Ecklonia cava, on normal rats. Male Sprague-Dawley rats were divided into the following three groups: Control group (NC), received basal diet; ECB 0.1 group, received basal diet supplemented with 0.1% ECB for 21 days; ECB 0.5 group, received basal diet supplemented with 0.5% ECB for 21 days. The productivity, serum immunoglobulin level, expression levels of muscle-related genes, and cecal microflora were measured in all the treatment groups to evaluate the potential use of ECB as a feed additive. The ECB 0.1 group exhibited enhanced expression of Myod, Myog, and Igf1 genes, which increased the body weight of rats. Additionally, treatment with ECB increased the cecal Lactobacillus spp. counts and the serum immunoglobulin G levels in rats. Thus, ECB can effectively increase body weight and can be a potential feed additive for improving growth.
Aim: To present the epidemiologic data (age, gender, size etc) and histopathologic and immunohistochemical features of cases of rhabdomyosarcoma (RMS) reported in our department. Settings: Section of Histopathology, Department of Pathology and Microbiology, Aga Khan University Hospital, Karachi, Pakistan. Duration: All cases of RMS diagnosed between January 1, 2003 and December 31, 2012 were included in the study. Results: A total of 277 cases were included. Embryonal rhabdomyosarcoma (ERMS) was by far the dominant histologic type (87.4%) followed by alveolar type (ARMS)(9.4%). ERMS was much more common in males (64.0%)and over 65% of cases occurred in the first decade of life (over 90% in the first two decades). Head and neck region was commonest site for ERMS (46.7%), followed by the genitourinary system (16.1%). Over 65% cases of ARMS occurred in the extremities. Over 80% cases of ARMS occurred in the first 3 decades of life. Immunohistochemical staining for Desmin and MyoD1 was positive in 96.7% and 85.4% respectively. Conclusions: The epidemiologic data and microscopic findings in our patients are similar to international published data on rhabdomyosarcoma.
Journal of Dental Rehabilitation and Applied Science
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v.19
no.2
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pp.115-124
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2003
One of the important things in the full mouth reconstruction is the determination of therapeutic position. Centric jaw relation is used as a therapeutic position for the full mouth reconstruction. There are several techniques associated with recording this position. Five clinically acceptable techniques are as follows: 1) Swallowing or free closure, 2) Chin point guidance, 3) Bimanual method 4) Myo-monitor technique, 5) Anterior deprogrammer. Centric relation obtained utilizing the anterior acrylic resin platform in this case. Another important thing in full mouth reconstruction is provisional restoration. Provisional restorations are an excellent diagnostic instrument, especially in full remain esthetics, phonetics, function, parafunction, and dysfunction after evaluation and acceptance through clinical trial with the provisional restorations should be accurately transferred to the final restorations to ensure the same clinical success. Especially, anterior guidance should be accurately transferred to the final restorations. An accurate anterior guidance is critical for optimal esthetics, phonetics, comfort, function, stress minimization, and longevity of teeth and restorations. To record optimum anterior guidance, customized anterior guide table is used in this case. Considering previously mentioned points, we did successive treatment. And it resulted in a better situation esthetically and functionally. Followings are what we cared in treating a patient in this case. 1) Accurate centric relation recording 2) Accurate transference of anterior guidance to the final restorations.
The Journal of Korean Academy of Orthopedic Manual Physical Therapy
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v.19
no.2
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pp.61-66
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2013
Background: This study tried to identify the bridge exercise posture for efficient exercise application by comparing muscle activity of buttocks and thighs according to internal-external rotation and pronation & supination in bridge exercise. Method: Nine males in their 20s living in D city were randomly selected as subjects. Muscles such as vastus medialis oblique (VMO), vastus lateralis (VL), semitendinosus (ST), biceps femoris (BF), gluteus maximus (GMAX), gluteus medius (GMED), tensor fasciae latae(TFL), and adductor longus (ADL) were measured using eight channel surface electromyogram (MyoSystem 1400A, Noraxon, USA) to measure muscle activity. Statistics process was performed through paired t test. Results: In the changes in electromyogram signals according to internal-external rotations according to internal-external rotation of shinbones, in most cases muscle activity was higher in external rotation than in internal rotation, but there was no statistical significance (p>.05). In particular, it was lower in TFL and ADL. There was no statistical significance in the comparison between two groups (p>.05). In the changes in electromyogram signals according to internal-external rotations according to pronation & supination of thighs, GMED showed significantly higher value in supination than in pronation (p>.05), and in ADL pronation is significantly higher than supination (p<.05). Conclusion: In internal-external rotation of shinbone and pronation & supination of thighs in bridge exercise, changes in muscle length can make effects on muscle activity of buttocks and thighs. Therefore, muscle strength enforcement program on buttocks and thighs through bridge exercise can make effects on patients with lower limb functional damages in clinical situations.
Jeon, Sang Kyu;Kim, Ok Hyeon;Park, Su Mi;Lee, Ju-Hee;Park, Sun-Dong
Herbal Formula Science
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v.28
no.1
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pp.29-39
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2020
Objectives : Glucoraphanin is one of the well-known natural glucosinolates found in cruciferous plants. In the present study, we investigated the effects and molecular mechanism of glucoraphanin in dexamethasone-induced skeletal muscle atrophy in vitro model. Methods : The cytotoxic effects of glucoraphanin on C2C12 myoblasts or myotubes were evaluated by MTT assay. The glucoraphanin was evaluated effects in dexamethasone-induced skeletal muscle atrophy in C2C12 myotubes using a real-time PCR, western blots analysis, and immunofluorescence staining of myosin heavy chain. Result : Glucoraphanin had no cytotoxicity on both C2C12 myoblasts or myotubes. Dexamethasone markedly induced muscle atrophy by up-regulating muscle-specific ubiquitin E3 ligase markers, atrogin-1 and MuRF1, and down-regulating MyoD, a myogenic regulatory factor whereas co-treatment of glucoraphanin and dexamethasone dose-dependently inhibited it. Furthermore, decreased expressions of p-Akt, p-FOXO1, and p-FOXO3a induced by dexamethasone were reversed by co-treatment with glucoraphanin and dexamethasone. In addition, dexamethasone obviously reduced myotube diameters, while co-treatment of glucoraphanin and dexamethasone increased those to a similar level as control. Conclusions : These results show that glucoraphanin suppresses dexamethasone-induced muscle atrophy in C2C12 myotubes through activation of Akt/FOXO signaling pathway.
Mitogen-activated protein kinases (MAPKs) play an indispensable role in activation of the myogenic program, which is responsive to mechanical stimulation. Although there is accumulating evidence of mechanical force-mediated cellular responses, the role of MAPK in regulating the myogenic process in myoblasts exposed to cyclic stretch is unclear. Cyclic stretch induced the proliferation of C2C12 myoblasts and inhibited their differentiation into myotubes. In particular, it induced persistent phosphorylation of p38 kinase, and decreased the level of phosphorylation of extracellular-signal regulated kinase (ERK). Partial inhibition of p38 phosphorylation increased cellular levels of MyoD and p-ERK in stretched C2C12 cells, along with increased myotube formation. Treatment with $10{\mu}M$ PD98059 prevented myogenin expression in response to a low dose of SB203580 ($3{\mu}M$) in the stretched cells, suggesting that adequate ERK activation is also needed to allow the cells to differentiate into myotubes. These results suggest that cyclic stretch inhibits the myogenic differentiation of C2C12 cells by activating p38-mediated signaling and inhibiting ERK phosphorylation. We conclude that p38 kinase, not ERK, is the upstream signal transducer regulating cellular responses to mechanical stretch in skeletal muscle cells.
The purpose of this study was to investigate range of motion (ROM) and muscle activities according to the skills of Surya Namaskara in Vinyasa Yoga. Six females (skilled 2, unskilled 4) of university students participated in this experiment. The research factors were ROM and muscle activities for static poses on Surya Namaskara in Vinyasa Yoga. The six infrared cameras (Oqus 300, Qualisys Inc, Sweden) and Zero Wire EMG (Aurion, Italy) were used to acquire raw data, and the Qualisys Track Manager and Noraxon (MyoResearch XP Master Edition, USA) were used to process data. The %MVIC and ROM were analyzed with Visual 3D (C-Motion Inc, USA) and Noraxon. In conclusion, ROM and %MVIC between two groups were remarkable different according to the static poses of Yoga, therefore instructors have to provide step-by-step information that was suitable to themselves (ROM and EMG of poses).
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[게시일 2004년 10월 1일]
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