This study was conducted to estimate the cultural characteristics, the production of antibiotic, and the selection of optimal media for mass culture of Bacillus licheniformis N1 isolate which was previously reported as an antagonistic bacterium to Botrytis cinerea. We investigated initial pH, temperatures and shaking speed for good cultural conditions and antibiotics production by N1 isolate. According to the results, the optimal conditions of initial pH, temperatures, and shaking speed were determined to be pH 5.0~5.5, 30~35$^{\circ}C$ and 250 rpm, respectively. Also, the optimal conditions for the antagonism by N1 isolate highly appeared in the initial pH as 5.0, and the mycelial growth inhibition was high when the substances used such as glucose or corn starch as carbon sources, and biji(soybean curd residue) flour as a nitrogen source. Furthermore, inhibitory area was significantly expanded, when 3% or 5% of corn starch was added into 5% of Biji flour as nitrogen source, were respectivley selected for mass culture of N1 isolate. Among them, 5% Biji flour medium showed higher cell density more than 10 times that in NB medium after 48 hour incubation. Therefore, the optimal medium was determined as 5% biji flour added 3~5% of corn starch for high density of cells.
This study relates to low and medium molecular weight isoflavone-${\beta}$-D-glucan produced by submerged liquid culture of Agaricus blazei, a method of producing the isoflavone-B-D-glucan using autolysis enzyme of Agaricus blazei mycelia, and use of the isoflavone-B-D-glucan for anti-cancer and immunoenhancing effect. In acordance with one aspect of the present study, it deals with a method of producing isoflavone-${\beta}$-D-glucan, which comprises the followings; 1) culturing and separating mushroom mycelia, 2) producing low-medium molecular weight isoflavone-${\beta}$-D-glucan from high molecular weight one. The cytotoxicity on human cnacer cell line (Caco-2, MCF-7), the expression of Cyclin D, Bcl-2, Bax protein, p21 protein, p53 protein in MCF-7 cells assessed by SDS-PAGE and immunoblotting, and other immuno related factors such as TNF-${\alpha}$ and IL-1B activities were examined. Structural identification of isoflavone-${\beta}$-D-glucan which showed cytotoxicity against cancer cell and immunoenhancing effects was carried by separation with DEAE-cellulose column chromatography, TLC, HPLC, IR, NMR. Clinical test for the cancer patients (n=119) for 6 month was carried out, and immunoenhancing factors (NK. cell number, ratio of T4/T8) were checked. We concluded the identified isoflavone-${\beta}$-D-glucan has immuno enhancing effects and could be useful for cancer chemoprevention.
An antagonistic bacterium, Pseudomonas flurorescens MC07 inhibited the mycelial growth of Rhizoctonia solani, Pythium ultimum, Fusarium oxysporum, and Phytophthora capsici in on potato dextrose agan (PDA) and other media. The strain MC07 conlonizes various plant roots and possesses antifungal activity. To determine the role of antifungal activity of the bacterium in disease suppression, a mutant Okm3-4 which lost its activity was isolated after screening 2,500 colonies generated by Omegon-Km insertions. The mutant Okm3-4 showed diminished growth inhibition of R. solani, P. ultimum, F. oxysporum, and Ph. capsici in vitro and had reduced suppressive effects on sesame damping.-off compared to the parental strain. In soils, accumulation of the pathogens by continuous cropping, 90% of sesame plants were killed by natural infection of damping-off whereas, only 29% of plants grown from seeds treated with MC07 were killed. On the other hand, 85% of plants died when sesame seeds were treated with the Okm3-4 cells. This indicated that antifungal activity of MC07 in vitro is directly responsible for the suppression of damping-off disease. Emergence rates of sesame seeds in pots containing diseased soil were 33%. However, MC07 treatments on seeds significantly improved emergence rates, which has similar effects of Benomyl treatment. The mutant Okm3-4 exhibited 53% of emergence rate. This indicated that antifungal activity of MC07 also affects the emergence rate of sesame seeds.
Two white rot fungi, Ceriporia sp. ZLY-2010 (CER) and Stereum hirsutum (STH) were used as biocatalysts for the biotransformation of (-)-${\alpha}$-pinene. After 96 hr, CER converted the bicyclic monoterpene hydrocarbon (-)-${\alpha}$-pinene into ${\alpha}$-terpineol (yield, 0.05 g/L), a monocyclic monoterpene alcohol, in addition to, other minor products. Using STH, verbenone was identified as the major biotransformed product, and minor products were myrtenol, camphor, and isopinocarveol. We did not observe any inhibitory effects of substrate or transformed products on mycelial growth of the fungi. The activities of fungal manganese-dependent peroxidase and laccase were monitored for 15 days to determine the enzymatic pathways related to the biotransformation of (-)-${\alpha}$-pinene. We concluded that a complex of enzymes, including intra- and extracellular enzymes, were involved in terpenoid biotransformation by white rot fungi.
The induced resistance of cucumber leaves treated with oligochitosan to the infection of the cucumber powdery mildew, Sphaerotheca fuliginea, was investigated using transmission electron microscopy. The results showed that when the plants were treated with oligochitosan and challenged with inoculum, a significant decrease of the disease occurred. The mycelial development in the treated leaves was markedly inhibited. The cytoplasm of the powdery mildew mycelium was aggregated, with its organelles disintegrated and the cytoplasm collapsed. The protoplasm in haustoria became electron-dense. Haustoria became malformed, their organelles disintegrated, the hausterial wall thickened and eventually the whole complex necrotized. The host cells produced defence structures and materials associated with infection and a hypersensitive response. The host cell wall was thickened and deeply stained; several layers of papilla structure were produced under the cell wall; dark materials were deposited between the cell wall and plasmalemma; extrahaustorial plasmalemma was deeply stained and extrahaustorial matrix appositions had large deposits of electron-dense material; the cytoplasm was disordered, host organelles disintegrated and eventually the whole host cell disintegrated and necrotized.
Suphachai Tharavecharak;Corina N. D'Alessandro-Gabazza;Masaaki Toda;Taro Yasuma;Taku Tsuyama;Ichiro Kamei;Esteban C. Gabazza
Mycobiology
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제51권2호
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pp.94-108
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2023
Termitomyces sp. that grow in symbiosis with fungus-farming Termites have medicinal properties. However, they are rare in nature, and their artificial culture is challenging. The expression of AXL receptor tyrosine kinase and immune checkpoint molecules favor the growth of cancer cells. The study evaluated the optimal conditions for the artificial culture of Termitomyces and their inhibitory activity on AXL and immune checkpoint molecules in lung adenocarcinoma and melanoma cell lines. The culture of 45 strains of Termitomyces was compared. Five strains with marked growth rates were selected. Four of the selected strains form a single cluster by sequence analysis. The mycelium of 4 selected strains produces more fungal mass in potato dextrose broth than in a mixed media. The bark was the most appropriate solid substrate for Termitomyces mycelia culture. The mycelium of all five selected strains showed a higher growth rate under normal CO2 conditions. The culture broth, methanol, and ethyl acetate of one selected strain (T-120) inhibited the mRNA relative expression of AXL receptor tyrosine kinase and immune checkpoint molecules in cancer cell lines. Overall, these results suggest the potential usefulness of Termitomyces extracts as a coadjuvant therapy in malignant diseases.
노루궁뎅이균사로 발효한 율무 열수추출물의 항산화, NO 생성저해, tyrosinase 합성 억제, melanin 생성 저해 및 유용성분 분석을 수행하였다. 노루궁뎅이균사발효율무열수추출물의 ergosterol 함량은 740.2 mg%으로 나타났으며, 원료로 사용한 율무 열수추출물에서는 검출되지 않았다. 노루궁뎅이균사발효율무 열수추출물의 β-glucan 함량은 245.3 ± 5.1 mg%으로 나타났다. 노루궁뎅이균사발효율무 열수추출물은 100%, 104.1%, 107.2%, 105.3%, 102.1%, 101.3%, 100.4%의 세포생존율이 측정되어, 율무열수추출물보다 노루궁뎅이균사발효율무 열수추출물의 세포생존율이 더 높게 나타났다. B16F10 cell 500 ug/mL 농도로 처리했을 때, 노루궁뎅이균사발효율무 열수추출물은 8.9 μM의 NO 생성율을 보여, 율무 추출물(10.6 uM)의 NO생성율 보다 낮은 NO 생성율을 나타내었다. 10, 30, 50, 100, 200, 300 및 500 mg/mL 모든 농도에서 율무 열수추출물보다 노루궁뎅이균사발효율무 열수추출물이 유의적으로 tyrosinase 및 melanin 생성을 억제함을 확인 할 수 있었다. 노루궁뎅이균사발효에 따른 DPPH radical 및 ABTS radical 소거활성 측정결과 노루궁뎅이 균사발효 율무열수추출물이 율무 열수추출물보다 항산화 효과가 높음을 확인하였다. 따라서 추가적인 연구를 통해 노루궁뎅이균사발효 율무열수추출물은 기능성식품 원료와 식품 첨가물, 화장품 산업에 이용될 수 있을 것으로 생각된다.
게르마늄(Ge)은 거의 대부분의 영양분, 동물, 식물에서 발견되는 미량원소로 많은 연구를 통해 항균성 항바이러스성 항종양성 항돌연변이성 및 면역조절 효과를 지닌 것으로 알려져 있다. 또한, 동충하초는 중국의 전통적인 약용 버섯으로 항종양성, 항산화성 및 면역조절 효과 등 다양한 생물학적 활성을 지니고 있으며 미량원소를 축적시키기 효과적인 것으로 알려져 있다. 이런 특성을 이용하여 본 연구는 게르마늄 농도를 증가시킨 동충하초(CMGe)의 열수 추출액을 얻어내고 그 생물학적 특성을 실험하였다. 네 가지 암세포주 Ramos, A549, HepG2, CEM와 MSC에 대한 CMGe의 세포독성을 MTT assay를 통해 확인한 결과, CEM에서 항증식성이 가장 높고 MSC에 대한 세포독성은 낮은 것으로 확인되었다. 마지막으로 누드마우스에 인간 신경아교세포종(U87MG)을 이종이식하여 종양의 부피와 무게를 조사한 결과, CMGe열수 추출액 처리군에서 종양 부피와 무게의 감소를 확인할 수 있었다. 이런 결과는 CMGe가 앞으로 의약 및 제약산업에 다양하게 적용될 수 있을 것으로 기대된다.
균사형성 미생물에 의한 항생물질의 대량생산은 적절한 산소공급이 요구되며, 산소전달속도는 생산성에 영향을 미치는 속도제한단계이다. 그러므로 발효에 이용하기 위해 Streptomyces avermitilis 와 같은 균사형성 미생물 배양액에서의 산소전달계수를 측정하였다. 그러나 회분식 배양에서 (K$_{L}$A) 측정을 위한 적절한 용존산소 유지가 어려웠으며, 이를 극복하기 위해서 유가식 배양을 도입하였다. 배지의 단계적 공급으로 미생물 성장속도를 조절할 수 있었고, 낮은 교반속도에서도 적정용존산소의 유지가 가능하였으며, 결과적으로 (K$_{L}$A) 측정도 용이하였다. 7 g/L 이하의 낮은 균체량에서 350 rpm의 교반속도가 교반효율과 전단응력을 고려했을 때 가장 적절한 조건임을 알수 있었다. 그러나 균체가 증가할수록 배양액 점도가 증가하여 혼합이 효과적이지 못한 이유로 더 높은 교반속도가 필요하였다. 통기량의 증가에 의한 (K$_{L}$A) 증가율은 건조균제질량이 고 농도 일수록 미미하였다. 그러므로 높은 균체농도에서는 이차대사산물에 영향을 주지 않은 범위에서 교반속도를 증가하여 용존산소 농도를 조절하는 것이 통기속도의 조절보다 더 효율적 일 것으로 판단되었다.판단되었다.
본 연구는 농업과학기술원 응용미생물과에 보존된 망태버섯속(Dictyophora sp.)에 대한 인공배양 자실체 및 균사체의 형태적 특징을 관찰하였다. 이 버섯의 알과 성숙한 자실체는 대, 치마, 갓, 대주머니로 이루어져 있다. 알은 타원형으로 내피막, 젤라틴층, 외피막으로 싸여 있으며, 표면에는 백색의 침상 균사돌기로 싸여 있다. 성숙한 자실체는 대주머니 안에 젤라틴층이 액화되어 남아 있으며, 포자는 갓 위에 짙은 녹색의 포자층을 형성하고 있다. 치마는 대주머니 위로 길게 내려오고, 그물망의 눈은 다각형이며, 밤꽃 냄새가 난다. 균사체에서 후막포자 모양의 팽대세포(swelling cell)가 확인되었으며, clamp connection도 존재하였다. 본 연구를 통하여 공시균주 KACC 50650은 Dictyophora echinovolvata로 동정되었으며, 한국명으로는 '흰돌기망태버섯'으로 명명하고자 한다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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