• Journal of Radiation Protection and Research
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• 제24권1호
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• pp.17-22
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• 1999

이온화방사선이 동물 생식세포에 미치는 생화학적 및 형태학적 영향을 알아보기 위해 본 연구를 시행하였다. 미성숙 생쥐 (ICR, 3 주령)에 $\gamma$선을 선량 $LD_{80(30)}$으로 전신조사하였다. 방사선 조사 후 6 시간, 12 시간, 1 일, 그리고 2 일 후에 난소를 적출하였다. 난소에서 추출한 과립세포의 세포주기를 DNA에 대한 유세포 분석으로 분석하였다. 세포자연사를 확인할 수 있는 $A_0$ 세포주기는 이온화방사선이 조사된 실험군에서 대조군에 비해 현저히 높은 값을 보였다. 이온화방사선을 조사한 후 6 시간 군에서 TUNEL 면역조직화학 염색도를 나타낸 난포의 수가 대조군에 비해 현저히 증가하였다. 따라서, 본 실험의 결과 방사선 조사에 의해 유발되는 난포의 퇴화는 6 시간 이내에 급성으로 진행되는 과립세포의 세포자연사에 의해 매개됨을 알 수 있었다. 유세포분석기를 이용한 세포주기 평가는 방사선에 의해 유발되는 세포자연사 기작의 이해와 퇴화난포의 정량화를 위한 수단이 될 수 있다.

• 한국식품영양과학회지
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• 제32권7호
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• pp.986-990
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• 2003

2001년 11월부터 2002년 10월까지 일년간 매월 통영 인근에서 어획한 살아있는 복섬(Takifugu niphobles) 10마리씩을 구입하여 근육, 껍질, 내장, 간장, 난소로 분리하여 각 부위별 독성 분포를 마우스 시험법으로 조사한 결과는 다음과 같다. 산란기인 5∼6월에는 근육, 껍질, 내장 및 간장의 독성이 비산란기에 비하여 감소한 것 이외에 계절에 따른 부위별 독성의 뚜렷한 차이는 없었다. 근육중의 독성은 0∼46.4 MU/g의 범위였으며, 총 120마리 중 92마리(76.7%)가 무독(10 MU/g 이하)으로 식용 가능하였으나, 나머지는 약독(10 MU/g∼100 MU/g)으로 식용에 부적합하였다. 껍질의 독성은 최소 10.0 MU/g에서 최고674.4 MU/g의 약독 및 강독 범위로서 전체 시료가 식용에 부적합하였다. 내장 및 간장의 독성 분포는 무독에서부터 맹독(1,000 MU/g이상)까지 계절에 상관없이 개체에 따라 차이가 심하였으며, 난소는 산란기인 5월에 7개의 시료에서 6월에 1개의 시료에서 분리되었으며, 독성 범위는 84.2 MU/g에서 2,191.3 MU/g 범위로서 독성이 가장 강하였다.

• Applied Microscopy
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• 제37권2호
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• pp.135-142
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• 2007

본 연구는 6 MeV LINAC에서 발생한 X-선을 생쥐 생체에 조사한 후 난소에서 난포의 형태적 변화 양상과 난포의 세포자연사가 일어나는 과정을 TUNEL 염색방법을 이용하여 광학현미경으로 관찰하였다. 정상난포와 퇴화난포 및 방사선이 조사된 난포에서 세포예정사가 발생하는 것을 확인하기 위해서 TUNEL 염색을 실시한 결과, 정상난소의 퇴화난포에서 양성반응을 보이는 과립층세포들은 갈색을 띠고 있었고, 핵은 응축되어 나타났다. 그러나, 정상난포에서는 양성반응이 나타나지 않았다. X-선을 조사한 난소의 난포는 TUNEL 염색에 강한 양성반응이 나타났고, 600 cGy의 X-선 조사에서 난모세포는 이미 세포예정사가 진행되어 파괴되었음을 확인할 수 있었다. 그리고 난포막을 형성하고 있는 난막세포의 핵들도 양성반응으로 나타나, 갈색으로 염색이 되었으며, 수질의 결합조직세포들의 핵도 갈색으로 염색되어 관찰되었다. 또한, 대부분의 세포들은 세포예정사가 진행되어 있으며, apoptotic body들이 난포 내에 산재되어 있었다. 이 시기의 난소조직의 전반적인 염색도는 저선량의 X-선 조사에서보다 더 현저히 강한 염색성이 나타났다.

• 생명과학회지
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• 제28권7호
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• pp.811-818
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• 2018

본 연구에서는 암컷 생식기관 내 축적된 수은 화합물의 위치와 시간에 따른 수은의 농도 변화를 확인하기 위하여 수행하였다. Methylmercuric chloride를 일주일에 한 번씩 총 3주간 사춘기 암컷 마우스에 피하 주사하였다. 시간에 따른 수은의 농도 변화를 확인하기 위해 투여 종료 후 10일, 150일, 300일째에 희생하였다. 투여 종료 후 10일에 희생한 경우 체중에 유의한 차이가 있었지만, 그 외 경우에는 체중과 난소의 무게에 있어서 대조군과 수은 투여군 사이에 유의한 차이가 없었다. 축적된 수은의 위치를 오토메탈로그라피 방법으로 확인하였고, 자궁, 난소, 난자에 축적된 수은 화합물의 위치를 광학현미경으로 분석하였다. 자궁의 경우, 투여 종료 후 10일째에 수은이 지질 세포와 자궁바깥막의 중피에 위치하였다. 150일째에는 수은 농도가 감소하였으며 300일째에는 나타나지 않았다. 투여 종료 후 10일째 난소의 경우, 수은이 피질 부위의 지질 세포와, 난포를 둘러싸는 난포막 세포, 황체에 분포하였다. 150일째에는 수은이 난소의 수질 부위에 축적되었으며, 300일째에는 분포하지 않았다. 투여 종료 후 10과 150일째 난자의 경우, 수은이 난자의 주변부에 주로 분포하였으며, 300일째에는 수은 농도가 감소되고 난자 전체에 고르게 분포하였다. 이런 결과는 암컷 마우스에서 수은에 의해 호르몬 생성, 착상, 그리고 발생 중인 배아가 영향을 받을 수 있다는 사실을 제시해 준다.

• 생명과학회지
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• 제19권12호
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• pp.1764-1768
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• 2009

본 연구는 소의 과립막세포 배양상층액에서 스테로이드 호르몬의 농도와 생쥐 배의 체외 발달에 미치는 효과를 검토하기 위하여 수행되었다. 소의 성숙난포(직경 6~15 mm)와 미성숙 난포(직경 2~5 mm)로부터 과립막세포를 각각 분리하여 15% FCS가 첨가된 Ham's F-10 배양약에서 16일간 배양하였다. 과립막세포들은 쉽게 단층배엽을 형성 하였으며, 배양과정 중 비슷한 성장패턴을 나타내었다. 또한 성숙 과립막세포와 미성숙 과립막세포 간에 형태적인 차이가 없었다. 과립막세포 배양 중 progesterone과 estradiol 생산이 활발하게 이루어졌으며, progesterone은 배양후기에, estradiol은 배양초기에 분비량이 높았다. 성숙 과립막세포와 미성숙 과립막세포에서 내분비 양상은 비슷하였다. 생쥐배가 상실배, 배반포 및 부화배반포 단계로 체외발달된 비율은 Ham'F-10배양액(86.7%, 41.7%, 13.3%)에 비하여 성숙 과립막세포 배양상층액(92.7%, 78.1%, 34.5%)과 미성숙 과립막세포 배양상층액(96.4%, 78.5%, 26.8%)에서 유의적으로 높았다(p<0.05). 그러나 배의 발달에 대하여 성숙 과립막세포배양상층액과 미성숙 과립막세포 배양상층액 간에는 차이가 없었다.

• 한국동물번식학회:학술대회논문집
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• 한국동물번식학회 2003년도 학술발표대회 발표논문초록집
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• pp.43-43
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• 2003

This study was conducted to produce transgenic pig harboring human tissue plasminogene activator (tPA) gene. Two different tPA genes containing bovine $\beta$-casein promoter and mouse uroplakin promoter were prepared for microinjection and confirmed the expression level of tPA protein from the CHO (Chinese hamster ovary) cell lines by gene transfection. Concentration of tPA expression from the six cell lines (all of CHO cells) were average 212.4 ng/ml. Reconstructed DNA to used the CHO cell were microinjected into the pronuclei of in vivo embryos The total of 2,307 zygotes were collected from 95 donors and 1,851 embryos were in 1-cell stage which were visualized the pronuclei for DNA microinjection. The concentration of linear DNA was 2.0 ng per microliter and injected into zygotes with two pronuclei on an inverted Nikon microscope equipped with narishige micromanipulator and modulation contrast optics. The 541 embryos injected with bovine $\beta$-casein promoter-tPA were transferred to 22 recipients. The 1,154 embryos injected with mouse uroplakin promoter-tPA were transferred to 51 recipients. Sixty nine offspring from 9 delivered sows were produced. We analysed the transgenes with PCR methods from 69 offsprings, but could not detect the PCR product from piglet tails DNA.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제26권2호
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• pp.219-223
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• 1999

Ovarian development of the vitrified neonatal ovaries after orthotopical transplantation into the ovariectomized adult recipient mouse were observed. Ovaries were collected from the neonatal females on day of birth and grouped for fresh, vitrification for 1-minute, and 3-minute. Vitrified and thawed neonatal ovaries were orthotopically transplanted into ovarian bursa of the adult mice from which endogenous ovaries have removed just prior to the transplantation (1 minute: n=25; 3 minutes n=23). Fresh ovarian tissue transplanted (n=25) mice were included as control groups. Returning of the estrus cycles and the survival and development of the transplanted ovaries were evaluated. Intact ovaries from neonatal, and four weeks old mice were used for comparison of the ovarian development as in vivo-developed control. From 2 weeks after transplantation, 64%, 36%, and 75% of the transplanted mice showed return of the estrus cycles in fresh, 1-minute, and 3-minute groups, respectively. Four weeks after transplantation, all mice were sacrificed and ovarian tissues were recovered for histological analysis. 57.1%, 33.3%, and 64.7% mice in fresh, 1-minute, and 3-minute groups, respectively, had survived ovaries with follicles at various stages of growth from primordial to preovulatory follicles. Corpus lutea were also observed. Results of the present study suggest that 1) normal folliculogenesis has initiated in vivo after vitrification, and 2) the vitrification may be used as a preservation method for ovarian tissues for establishment of ovarian tissue bank.

• BMB Reports
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• 제38권4호
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• pp.414-419
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• 2005

The production of recombinant antibodies has been generally recognized as time-consuming and labor-intensive. The aim of our study is to construct mammalian expression vectors containing the cDNA encoding the human constant regions and murine variable regions to massively and cost-effectively produce full-length chimeric antibodies. Unique restriction sites flanking the Ig variable region were designed to allow for the replacement of variable regions generated by PCR. Western blot analysis of the chimeric antibodies revealed that the expressed products were of the predicted size, structure and specificity. The usefulness of the vectors was confirmed by construction of human-mouse chimeric antibody-HCAb which secretes murine antibody against the human colorectal cancer. Selected in medium containing gradually increasing methotrexate (MTX), clones with increased expression of the product gene can be efficiently generated. The secretion of recombinant chimeric antibody-HCAb yielded $30\;pg\;cell^{-1}\;day^{-1}$ at $10^{-6}\;M$ MTX. With this high-level expression from pools, the convenient and rapid production of over 100 milligram amounts per liter of recombinant antibodies may be achieved, which indicates the significant roles of pYR-GCEVH and pYR-GCEVL in the production of chimeric antibodies.

• Animal cells and systems
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• 제10권4호
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• pp.227-231
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• 2006

Micro-deletions at specific loci of the Y chromosome have been observed frequently in male infertility patients, suggesting that genes in these regions are involved in male germ cell development. DAZ is a representative male infertility gene at the AZFc locus of the Y chromosome. Since DAZ contains an RNA binding motif along with so-called a DAZ domain, it was proposed to participate in RNA metabolism during spermatogenesis. A mouse gene homologous to the human DAZ gene has been cloned and named Dazl (DAZlike). Dazl is autosomal and expressed in the testis and also at a low level in the ovary. Male mice homozygous for the Dazl null allele have small testes with a few spermatogonia and almost complete absence of germ cells beyond the spermatogonial stage, suggesting the requirement of Dazl for entry or progression through meiosis. However, its exact cellular functions have not been understood yet. In order to investigate cellular functions of Dazl, we decided to isolate candidate interacting protein genes of the mouse Dazl, using yeast two-hybrid screening. A number of candidate Dazlinteracting proteins have been isolated, such as Bprp, Acf, Hgs, Murr1, Nbak3 and Ranbp9, but dynein light chain 1 (Dlc1) was most predominant. A strong interaction of Dazl with Dlc1 suggests that Dazl might function as an mRNA adaptor to the dynein motor complex.

• Molecules and Cells
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• 제27권6호
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• pp.697-701
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• 2009

We previously identified cancer-upregulated gene 2 (CUG2) as a commonly up-regulated gene in various human cancer tissues, especially in ovary, liver, and lung (Lee et al., 2007a). CUG2 was determined to be a nuclear protein that exhibited high proto-oncogenic activities when overexpressed in NIH3T3 mouse fibroblast cells. To identify other cellular functions of CUG2, we performed yeast two-hybrid screening and identified CENP-T, a component of CENP-A nucleosome complex in the centromere, as an interacting partner of CUG2. Moreover, CENP-A, the principle centromeric determinant, was also found in complex with CENP-T/CUG2. Immunofluorescent staining revealed the co-localization of CUG2 with human centromeric markers. Inhibition of CUG2 expression drastically affected cell viability by inducing aberrant cell division. We propose that CUG2 is a new component of the human centromeric complex that is required for proper chromosome segregation during mitosis.