To study the effect of dietary docosahexaenoic acid (DHA) enrichment on the expression of hepatic genes in pigs, weaned, crossbred pigs (30 d old) were fed diets supplemented with either 2% tallow or DHA oil for 18 d. Hepatic mRNA was extracted. Suppression subtractive hybridization was used to explore the hepatic genes that were specifically regulated by dietary DHA enrichment. After subtraction, we observed 288 cDNA fragments differentially expressed in livers from pigs fed either 2% DHA oil or 2% tallow for 18 d. After differential screening, 7 genes were found to be differentially expressed. Serum amyloid A protein 2 (SAA2) was further investigated because of its role in lipid metabolism. Northern analysis indicated that hepatic SAA2 was upregulated by dietary DHA enrichment (p<0.05). In a second experiment, feeding 10% DHA oil for 2d significantly increased the expression of SAA2 (compared to the 10% tallow group; p<0.05). The porcine SAA2 full length cDNA sequence was cloned and the sequence was compared to the human and mouse sequences. The homology of the SAA2 amino acid sequence between pig and human was 73% and between pig and mouse was 62%. There was a considerable difference in SAA2 sequences among these species. Of particular note was a deletion of 8 amino acids, in the pig compared to the human. This fragment is a specific characteristic for the SAA subtype that involved in acute inflammation reaction. Similar to human and mouse, porcine SAA2 was highly expressed in the liver of pigs. It was not detectable in the skeletal muscle, heart muscle, spleen, kidney, lung, and adipose tissue. These data suggest that SAA2 may be involved in mediation of the function of dietary DHA in the liver of the pig, however, the mechanism is not yet clear.
To study the effects of anti-cancer, anti-metastasis and immune response improvement effects of herbal-accupunture with Orostachys japhonicus A.Berger, infusion solution put into Kansu(BL18) of mouse induced by Colon26-L5 human colon cancer cells, which are corresponding to humanbody. We observed the change of body weight, surviving number, median surviving time, increase of life span, changes in amount of leukocyte, erythrocyte, platelet, total protein, creatinine, glucose and LDH, weight of spleen and kidney, histological analysis on tissue metastasis of liver, splenic cell proliferation, the expression of cytokine gene, the number of CD4+, CD8+, CD9+ and NK cell, and concluded like this. The results were obtained as follows ; 1. In acute and sub-acute cytotoxicity experiment, significantly signs were not appeared in all groups. 2. Antimetastatic experiment in vitro and in vivo showed that Orostachys Japhonicus A.Berger Herbal-acupuncture at Kansu(BL18) has antimetastatic effects. 3. The spleen cells proliferation of the experimental groups treated with Orostachys Japhonicus A.Berger infusion solution extract has increased significantly compared with that of the control group. 4. As compared with control, the population of total T cell, helper T cell, cytotoxic T cell and macrophage were increased. 5. The production of Th 1 type cytokines from splenocyte and cytokines which is associated with anti-tumor activity form macrophage were increased significantly. Above the results revealed that herbal-accupunture with Orostachys Japhonicus A.Berger infusion solution has effects of anti-cancer, anti-metastasis and immune response improvement.
Zingerone (ZGR), a phenolic alkanone isolated from ginger, has been reported to possess pharmacological activities such as anti-inflammatory and anti-apoptotic effects. This study was initiated to determine whether ZGR could modulate renal functional damage in a mouse model of sepsis and to elucidate the underlying mechanisms. The potential of ZGR treatment to reduce renal damage induced by cecal ligation and puncture (CLP) surgery in mice was measured by assessment of serum creatinine, blood urea nitrogen (BUN), lipid peroxidation, total glutathione, glutathione peroxidase activity, catalase activity, and superoxide dismutase activity. Treatment with ZGR resulted in elevated plasma levels of BUN and creatinine, and of protein in urine in mice with CLP-induced renal damage. Moreover, ZGR inhibited nuclear $factor-{\kappa}B$ activation and reduced the induction of nitric oxide synthase and excessive production of nitric acid. ZGR treatment also reduced the plasma levels of interleukin-6 and tumor necrosis $factor-{\alpha}$, reduced lethality due to CLP-induced sepsis, increased lipid peroxidation, and markedly enhanced the antioxidant defense system by restoring the levels of superoxide dismutase, glutathione peroxidase, and catalase in kidney tissues. Our study showed renal suppressive effects of zingerone in a mouse model of sepsis, suggesting that ZGR protects mice against sepsis-triggered renal injury.
Angiotensin converting enzyme(ACE) is a zinc-containing dipeptidase widely distributed in mammalian tissues and is thought to play a significant role in blood pressure regulation by hydrolyzing angiotensin I to the potent vasoconstrictor, angiotensin II. Recently, the presence of ACE in pig ovary was reported and the ACE from pig kidney was isolated and characterized. However no nucleotide sequence of the ACE gene from pig is yet known. We report here the cloning of the ACE cDNA from pig kidney by using the reverse transcriptase-polymerase chain reaction. The complete amino acid sequence deduced from the cDNA contains 1309 residues with a molecular mass of 150 kDa, beginning with a signal peptide of 33 amino acids. Amino acid sequence analysis showed that pig kidney ACE is also probably anchored by a short transmembrane domain located near the C-terminus. This protein contains a tandem duplication of the two homologous amino acid peptidase domain. Each of these two domains bears a putative metal-binding site (His-Glu-Met-Gly-His) identified in mammalian somatic ACE. The alignment of pig ACE amino acid sequence with human, rabbit, and mouse reveals that both two domains have been highly conserved during evolution.
Journal of the Korea Academia-Industrial cooperation Society
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v.12
no.1
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pp.312-317
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2011
Vanilloid receptor TRPV1 (known as capsaicin channel, transient receptor potential vanilloid 1) is known to be a key protein in the pain signal transduction. However, the proteins controlling the activity of the channel are not much known yet. Recently mouse Rab11-FIP3 (Rab11-family interaction protein 3) was found and reported to interact with rat TRPV1. Rab11 has been shown to play a key role in a variety of cellular processes including plasma membrane recycling, phagocytosis, and transport of secretory proteins from the trans-Golgi network. Therefore, Rab11-FIP3 was proposed to be involved in the membrane trafficking of TRPV1. In this study, the unreported rat Rab11-FIP3 was yet cloned in order to show the specific interaction of the TRPV1 and Rab11-FIP3 in the same species of rat and to examine the membrane trafficking of TRPV1. The result showed that rat Rab11-FIP3 is expected to have 489 amino acids and showed 80% identity with that of human and over 90% identity with that of mouse. Rab11-FIP3 was found to be expressed in heart, brain, kidney, testis using northern and western blot analyses. We also found that rat Rab11-FIP3 was colocalized with rat TRPV1 but not with TRPV2 of same family in the rat brain by using immunohistochemistry showing that two proteins interact specifically, suggesting the role of Rab11-FIP3 in the membrane trafficking.
Transgenic mice were generated by microinjecting a plasmid DNA containing the SV40 (simian virus 40) large T antigen (Tag) gene fused with mouse albumin promoter/enhancer sequences into fertilized one-cell mouse embryos. Among eleven founder transgenic animals, four developed hepatocellular carcinoma, two showed kidney cancer and one developed skin and brain tumors. Three stable transgenic lines, #1-2, #1-6 and #1-11 were established. Members of the lines #1-6 and #1-11 reproducibly developed liver tumors by 8 to 10 weeks of age but did not exhibit any phenotypic changes in other tissues. Histological changes loading to liver tumor formation occurred with predictable kinetics and could be classified into three distinct stages; (a) newborn to 3 weeks of age, characterized by hyperplastic hepatocytes with reduced amounts of cytoplasm without any nuclear alterations, (b) between 4 to 8 weeks of age, characterized by diffuse liver cell dysplasia without observable tumor nodules, and (c) 9 weeks of age and thereafter, characterized by hepatocellular carcinomas in the background of extensive liver dysplasia. Metastasis to the lung from a liver carcinoma was observed in #1-11 founder animal. This transgenic mouse system displays similarities with human liver cancers in a number of aspects and provides a useful model for the study of molecular events involved in hepatocarcinogenesis.
Embryos of most mammalian species grown in vitro would undergo developmental arrest at the approximate time of genomic activation. Stage-specific cell block and the resulting rapid loss of embryo viability in conventional culture media have limited the duration for which embryos may be cultured prior to transfer. As a result, embryos are usually transferred to the uterus at the 4-to 8-cell stage to avoid the loss of viability associated with long-term in vitro culture. Early transfer has led to asynchrony of the endometrium-trophectoderm interaction at the time of implantation and a resultant reduction in the rate of implantation. To overcome these problems, a variety of co-culture systems has been devised in which embryos can develop for a longer period prior to embryo transfer. Vero cells, derived from African green monkey kidney, share a common embryologic origin with cells from the genital tract. In addition, they are potentially safe to use, since they are highly controlled for viruses and other contaminants. Therefore, co-culture using Vero cells has been widely utilized to enhance embryo viability and development, although not without controversies. We thus designed a series of experiments to demonstrate whether Vero cells do indeed enhance mouse embryo development as well as to compare the efficacy of co-culturing mouse 1-cell embryos on Vero cell monolayer in both Ham's F-10 and human tubal fluid (HTF) culture media. 1-cell stage ICR mouse embryos were cultured either in the presence of Vero cells (Group A) or in conventional culture medium alone (Group B). In Ham's F-10 significantly more 3-to-8cell embryos developed in group A than group B (59.8 versus 10.0%; p<0.01). In contrast, there was no significant difference in embryonic development both group A and group B in HTF. However, significant differences were noted only in later embryonic stage (13 and 0%; p<0.05 of group A and B respectively, hatching or hatched). In Ham's F-10, we also could observe the beneficial effect of Vero cell on hatching process (70.7 and 42.1%; p<0.05 of group A and group B respectively).
Cysteine-cysteine chemokine receptor 9 (CCR9) homologue cDNA was isolated from olive flounder leukocyte cDNA library. Olive flounder CCR9 homologue consisted of 1709 bp encoding 367amino acid residues. When compared with other known CCR peptide sequences, the most conserved region of the olive flounder CCR9 peptide is the seven transmembranes. A phylogenetic analysis based on the deduced amino acid sequence showed the homologous relationship between the olive flounder CCR9 sequence and that of Mouse CCR9. The olive flounder CCR9 gene was predominantly expressed in the Peripheral blood leukocytes (PBLs), kidney, spleen, and gills.
This study was performed to demonstrate the presence of large granular lymphocyte(LGL) in Sprague-Dawley(SD) rats and morphologically observe NK cell and also establish the method of isolation of natural killer cell in SD rats. By percoll discontinuous density gradients centrifugation, highly enriched LGL population were shown to fraction 2(border line between 44.2% and 50.8%). LGL were shown to bind selectively to YAC1 mouse lymphoma cell. This fraction expressed very high NK cell cytolysis. Therefore, we thought that LGL have NK activity in SD rats. The Morphology of rat LGL is very similar to that of human LGL. These cells have an eccentric kidney-shaped nucleus. Their most distinctive feature was their cytoplasmic azurophilic granules. Another distinguishing feature of rat LGL was their high cytoplasmic : nuclear ratio. It was concluded that LGL played a role part in mediating natural killer activity in this species.
The experimental manipulation of protooncogenes and their gene products is a valuable research tool for the study of human neoplasia. In this study, the recently identified human cervical cancer protooncogene (HccR-2) was expressed in transgenic mice under the control of the tetracycline regulatory system. Mice expressing the HccR-2 transgene showed an altered myeloid development characterized by an increased percentage of mature and band-form neutrophils in the peripheral blood, liver and spleen. This phenotype is similar to human chronic neutrophilic leukemia (CNL) in many ways, which is a rare chronic myeloproliferative disorder (CMD) that presents as a sustained leukocytosis of mature neutrophils with a few or no circulating immature granulocytes, an absence of peripheral blood monocytosis, basophilia, or eosinophilia, and an infiltration of neutrophils into the liver, spleen and kidney. Thus, the HccR-2 transgenic mouse model is imperative not only for investigating the biological properties of the HccR-2 protooncogene in vivo, but also for analyzing the mechanisms involved in the progression of CNL.
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