Monoacylglycerol acyltransferase 1 (MGAT) is a microsomal enzyme that catalyzes the synthesis of diacylglycerol (DAG) and triacylglycerol (TAG). However, the subcellular localization and catalytic function domain of this enzyme is poorly understood. In this report, we identified that murine MGAT1 localizes to the endoplasmic reticulum (ER) under normal conditions, whereas MGAT1 co-localize to the lipid droplets (LD) under conditions of enriching fatty acids, contributing to TAG synthesis and LD expansion. For the enzyme activity, both the N-terminal transmembrane domain and catalytic HPHG motif are required. We also show that the transmembrane domain of MGAT1 consists of two hydrophobic regions in the N-terminus, and the consensus sequence FLXLXXXn, a putative neutral lipid-binding domain, exists in the first transmembrane domain. Finally, MGAT1 interacts with DGAT2, which serves to synergistically increase the TAG biosynthesis and LD expansion, leading to enhancement of lipid accumulation in the liver and fat.
회분식 반응기(stirred-tank batch reactor)를 사용한 DAG, MAG 함유 기능성유지를 비용매계(solvent-free system) 조건에서 효소적 반응을 이용하여 합성하였다. 48시간 동안 합성된 지질을 HPLC를 사용한 TAG, 1,3-DAG, 1,2-DAG 및 MAG 함량 분석결과 각각 45.05, 16.27, 23.05 및 14.98%로 분석되었으며 체중개선 기능성 유지의 지방산 조성 분석결과 palmitic, palmitoleic, stearic, oleic, linoleic 및 linolenic acid가 13.21, 0.15, 2.02, 34.36, 49.12 및 1.14 mol%로 분석되었다. 합성된 지질의 ${\alpha},\;{\gamma}$ 및 ${\delta}-tocopherol$ 함량을 분석한 결과는 각각 0.014, 0.029 및 0.010%로 분석되었으며 총 tocopherol 함량은 0.053%로 나타났다. 또한 재구성된 지질을 사용하여 산가, 비누화가, 요오드가를 측정하였으며 융점 및 결정화점을 살펴보고 이를 통하여 옥수수유로 유래된 DAG, MAG를 함유한 체중개선 기능성 유지의 이화학적, 물리적 특징을 규명하였다. 체중개선 기능성 유지의 산화 안정성 실험을 시행한 결과 체중개선 기능성 유지가 원료유인 옥수수유보다 높은 과산화물가와 p-anisidine가를 보였으며 각기 달리 혼합한 rosemary추출물(100, 200 및 300ppm)이 체중개선 기능성 유지와 옥수수유의 산화를 감소 시켰다.
Lipozyme RM IM 효소적 촉매를 사용한 glycerolysis에 의한 옥수수유로부터 $1,3-DAG(Y_1),\;1,2-DAG(Y_2)$, 총 $DAG(Y_3),\;MAG (Y_4)$, 및 총 DAG + MAG 의 합성 양$(Y_5)$의 생성 최적화를 반응 표면분석을 이용하여 모니터링 하였으며 반응온도$(35-75^{\circ}C,\;X_1)$, 반응시간$(1-11시간,\;X_2)$ 및 hexane 의 혼합 양$(0-2mL,\;X_3)$을 변수로 한 중심합성계획으로 최적화 실험하였다. 1,3-DAG는 반응온도$(44.92^{\circ}C)$, 반응시간(10.24시간) 및 hexane 첨가량(1.16mL) 조건에서 20.43 area%로 최대값을 나타내었으며 1,2-DAG는 $56.32^{\circ}C$, 6.95시간 및 1.04mL 조건에서 26.78 area% 로 최대값을 예측할 수 있었다. 총 DAC는 $53.82^{\circ}C$, 8.03시간 및 1.08mL 실험 조건에서 45.09 area% 최대값을 보였다. 또한 MAG 생산 최적조건은 $64.14^{\circ}C$, 7.00시간 및 0.13mL에서 최대값 9.57 area%로 예측되었으며 총 DAG+MAG 생산 최적조건은 $54.07^{\circ}C$, 7.98시간, 1.02mL이었으며 이때 예측된 값은 53.54 area%이었다.
Lipids were extracted from marine rotifer, Brachionus rotundiformis in order to examine the functionality of lipid enzymatic modification. The fatty acids, palmitic, linoleic, oleic and stearic acids were the dominant forms accounting for approximately 35.8%, 21.5%, 15.9% and 7.7% of the total lipid content, respectively. Lipid fractions were categorized as neutral lipids (38.5%), glycolipids (45.9%) and phospholipids (17.6%), and after extraction from the rotifer were isolated by thin-layer chromatography (TLC) as free fatty acids (FFA), monoacylglycerol (MAG), diacylglycerol (DAG) and triacylglycerol (TAG). The production of polyunsaturated fatty acid (PUFA) concentrate from rotifer lipids was studied using lipase-catalyzed hydrolysis. In addition, rotifer lipids were modified by hydrolysis using lipases such as porcine pancreas, Candida rugosa and Rhizomucor miehei. The lipase from Rhizomucor miehei was effective in extracting linoleic acid (C 18:2), while the lipase from Candida rugosa was effective in palmitic acid (C16:0) extraction.
고도불포화지방산 중 EPA(eicosapentaenoic acid)와 DHA(docosahexaenoic acid)는 여러 가지 생리활성 효과를 나타내는 것으로 알려져 있으며, 최근 관심이 주목되고 있다. 본 실험에서는 특히 DHA의 함량이 높은 해양미생물, 즉 조류(microalgae)인 Schizochytrium sp.에서 얻어진 DHA powder로부터 두 가지 방법으로 유지를 추출한 뒤 그 성질을 비교.분석하였다. 먼저, 8$0^{\circ}C$, soxhlet extractor로부터 6시간 동안 추출하고, 55$^{\circ}C$, shaking water bath로부터 같은 시간 동안 추출한 결과, 각각 25.5, 24.0%의 수율을 나타내었다. GC에 의한 지방산 조성 분석 결과, soxhlet extractor에서 추출한 경우, palmitic acid, DHA가 각각 30.98, 30.04 mol%로 주요 지방산인 것으로 나타났으며, shaking water bath에서 추출된 유지는 그 함량이 각각 31.44, 34.78 mol%를 나타내었다. 또한 pancreatic lipase에 의한 가수분해를 통해 sn-2 위치의 지방산 조성 분석 결과, DHA가 sn-2 위치에 주로 함유되어있는 것으로 조사되었다. 한편, HPLC-ELSD system을 이용하여 중성지방의 구성 성분을 분석 결과, 유지의 99%이상이 TAG(triacylglycerol) 형태로 이루어져 있었으며, 소량의 MAG(monoacylglycerol) 존재를 확인할 수 있었다.
본 실험에서는 DG, MG를 함유한 기능성 유지를 합성하기 위해 lipase(IM 60)를 이용하여 현미유와 글라이세롤을 회분식 교반기에서 glycerolysis화 반응을 하였다. 합성한 기능성 유지와 현미유의 이화학적, 영양학적 특성 을 비교하기 위해 지방산 조성, 기능성 물질 함량 및 동물 식이 실험을 실시하였다. 실험 결과 기능성 유지는 DG(46.19%), MG(11.15%)와 7G(41.71%) 그러고 미량의 자유 지방산으로 구성되어 있었으며, 지방산 조성은 현미유와 흡사하였다. 비검화 물질함량 또한 현미유와 유의적 차이를 보이지 않았으며, 주요물질로써 Phytosterol(2.04$\pm$0.17 mg/g), ${\gamma}$-oryzano1(1.06$\pm$0.04 mg/g), $\alpha$ -tocopherol(0.13$\pm$0.04 mg/g)이 검출되었다. 동물 식이실험 에서는 기능성 유지와 현미유 식이군이 ACAT activity를 저해하였으며, HCHF 식이군과 옥수수유 식이군 보다 유의적으로 낮게 나타낮다(p<0.05). 간과 지방 조직의 지방산 조성은 기능성 유지를 비롯한 모든 식이군에서 oleic acid의 함량이 가장 높았다.
Knowledge regarding lipid catabolism has been of great interest in the field of animal sciences. In the livestock industry, excess fat accretion in meat is costly to the producer and undesirable to the consumer. However, intramuscular fat (marbling) is desirable to enhance carcass and product quality. The manipulation of lipid content to meet the goals of animal production requires an understanding of the detailed mechanisms of lipid catabolism to help meticulously design nutritional, pharmacological, and physiological approaches to regulate fat accretion. The concept of a basic system of lipases and their co-regulators has been identified. The major lipases cleave triacylglycerol (TAG) stored in lipid droplets in a sequential manner. In adipose tissue, adipose triglyceride lipase (ATGL) performs the first and rate-limiting step of TAG breakdown through hydrolysis at the sn-1 position of TAG to release a non-esterified fatty acid (NEFA) and diacylglycerol (DAG). Subsequently, cleavage of DAG occurs via the rate-limiting enzyme hormone-sensitive lipase (HSL) for DAG catabolism, which is followed by monoglyceride lipase (MGL) for monoacylglycerol (MAG) hydrolysis. Recent identification of the co-activator (Comparative Gene Identification-58) and inhibitor [G(0)/G(1) Switch Gene 2] of ATGL have helped elucidate this important initial step of TAG breakdown, while also generating more questions. Additionally, the roles of these lipolysis-related enzymes in muscle, liver and skin tissue have also been found to be of great importance for the investigation of systemic lipolytic regulation.
In this study, we examined the effects of different water activities (Aw: 0.3, 0.5, and 0.8) on the lipid composition and oxidation of wheat flour after 28 days of storage in the dark at $60^{\circ}$C. The lipid content of the flour was 2.7%, and had decreased significantly (p<0.05) at the end of the storage period. Decrease in monoacylglycerol and increase in free fatty acids were observed, however, phosphatidic acid, phosphatidylglycerol, and phosphatidylinositiol were not detected after storage. Phosphatidylehtanolamine was more stable than phosphatidylcholine during the dark storage of flour. The flour lipids consisted of palmitic (18%), stearic (1%), oleic (14%), linoleic (63%), and linolenic (4%) acids, and the relative content of linolenic acid decreased after 28 days of storage. The conjugated dienoic acid content of the flour lipid had increased due to lipid oxidation during dark storage. Hydrolysis of neutral lipids and glycolipids, and lipid oxidation, were higher in the flour stored at Aw 0.8 than in the flour stored at Aw 0.3 or 0.5.
Objectives: This study aimed to investigate the impact of Ephedra sinica pharmacopuncture on the weight and lipid metabolism of obese mice.Methods: Obesity was induced in male C57BL/6 mice by a 60% fat diet. The animals were divided into three groups (n=5) fed a normal diet, high-fat diet, and high-fat diet with Ephedra sinica pharmacopuncture. After 13 wk, fasting blood sugar levels were measured in each group, and oral glucose tolerance tests were conducted. After 15 wk, body weight, epididymal fat pad weight, subcutaneous fat pad weight, and serum lipid and gene expression of hormone sensitive lipase (HSL), adipose triglyceride lipase (ATGL), monoacylglycerol lipase (MGL), perilipin, and peroxisome proliferator-activated receptor (PPAR)-γ were measured in each group.Results: In the Ephedra group, body weight, fasting blood sugar, and oral glucose tolerance were significantly decreased. In addition, in the Ephedra group, the gene expression of HSL was significantly increased, whereas that of perilipin was significantly decreased.Conclusions: These results provide evidence that E. sinicapharmacopuncture affects obesity and obesity-induced metabolic syndrome, including insulin resistance and dyslipidemia, by activating lipolysis via the HSL pathway in adipose tissue.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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