In search of dextran-hydrolyzing enzymes, approximately 500 strains of molds were checked for their ability to produce extracellular dextranase. Seven strains capable of producing dextranase were screened, and among them, one strain belonging to Aspergillus genus showed greater activity than the other. The strain was identified to be Aspergillus ustus and the most suitable culture conditions for the enzyme production were determined.
From the outer membrane portion of Gram-negative Klebsiella pneumoniae, the activity of 2-furaldehyde dehydrogenase depending upon beta-nicotinamide adenine dinucleotide was detected. Cytoplasmic membrane was preferentially extracted from crude membrane with $Mg^{2+}$ and Triton X-100, and then outer membrane was collected by ultracentrifugation. The crude enzyme was obtained by solubilization of outer membrane with lysozyme, ethylene diamine tetraacetate and Triton X-100. Thereafter 2-furaldehyde dehydrogenase was partially purified through column chromatography on QAE-Sephadex Q-50 and Sephadex G-150 and the enzyme activity was analyzed by means of high performance liquid chromatography. The optimal pH for the activity of the enzyme was about 9.5 and the optimal temperature was about $85^{\circ}C$. The partially purified enzyme retained tis activity at $85^{\circ}C$ for 5 hours. The optimal concentration of Triton X-100 for the activity of the enzyme was about 1.5% in the reaction mixture.
In order to study 5-nitro-2-furaldehyde derivatives having more effective antibacterial activity, four new $N^4$-(5-nitro-2-furfurylidene)-$N^1$-substituted sulfanilamides$N^1$-3,4-dimethyl-5-isoxazoyl-$N^4$-5-nitro-2-furfurylidene sulfanilamide, $N^1$-4,6-dimethyl-2-pyrimidyl-$N^4$-5-isoxazoyl-$N^4$-5-nitro-2-furfurylidene sulfanilamide, $N^1$-6-methoxy-3-pyridazinyl-$N^4$-5-nitro-2-furaldehyde with sulfa drugs such as sulfisoxazole, sulfamethazine, sulfamethoxypyridazine, and sulfadimethoxine. All compounds were tested for antibacterial activity in vitro on the following micro-organisms : Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Escherichia coli, and Proteus vulgaris. Each compound exhibited a fair bacteriostatic activity against each microorganism. Above all, sulfisoxazole derivatives showed higher activity than the others. Each compound was most active against Staphylococcus aureus, whereas least active against proteus vulgaris.
Effects of carbon sources, incubation time, incubation temperature, initial incubation pH, and vitamin B complex on the polygalacturonase activity of Byssochlamys fulva were studied to confirm the optimum conditions for the production of that enzyme. When pectin was used as carbon source, polygalacturonase activity reached to the maximum value of 0.50 units/ml. After 5 days of incubation, polygalacuturonase activity reached to its maximum of 0.48units/ml. Polygalacturonase activities were similar between $25^{\circ}C\;and\;45^{\circ}C$, however, decreased dramatically in the outside of this range. Polygalacturonase activity was not signicicantly influenced by the variation of initial incubation pH. However, at pH5.0, polygalacturonase activity was slightly through the addition of thiamine and riboflavin, and the optimum concentrations were $10^{-2}M$ in case of thiamine and $10^{-3}M$ in riboflavin.
Recombinant light chain of Clostridium botulinum neurotoxin type B stimulated transglutaminase activity in a dose dependent manner, Compared to native toxin, recombinant light chain showed av greater stimulatory effect on transglutaminase activity. Zn-chelating agents, inhibiting the proteolytic activity of the clostridial toxins, did not interfere with this stimulation. These results suggest that the light chain plays a major stimulatory role, which is not due to its metallopeptidase activity, but is possibly due to specific interaction with transglutaminase. More importantly, this report provides a new insight into the intracellular action of C. botulinum neurotoxins.
Progestrone bioconversion by immobilized Aspergillus phoenicis was studied. Progesterone was converted into 11$\alpha$-hydroxyprogesterone and 3-minor byproducts. Whole cells of A. phoenicis were immobillized by enreappment with calcium-alginate, K-carrageenan, or polyacrylamide. Of these materials tested, cell immobilized in $Ca^{2+}$ -alginate gels showed the highest activity for 11$\alpha$-hydroxylation of progesterone. In the case of mycelia immobilized in $Ca^{2+}$-alginate, futher progressing hydroxylation of 11$\alpha$-hydroxyprogesterone was greatly reduced. Spores of A. phoenicis which were immobillized with $Ca^{2+}$-alginate and germinatedin situ for 25 hours showed higher 11$\alpha$-hydroxylase activity than those of entrapped whole mycelia and maintained initial enzyme activity for all 8 times of repeated use. After 16 times of reuse, the activity was declined 30% or more. When culture media and $Zn^{2+}$ were introduced into the reaction media, the activity of the immobilized mycelia which had been lowered due to many times of reuse was effectively reactivated.
Poria cocos, a famous traditional Chinese medicine, was found to have nematicidal activity in experiments searching for nematicidal fungi. The experiment showed it could kill 94.9% of the saprophytic nematode, Panagrellus redivivue, 92.6% of the root-knot nematode, Meloidogyne arenaria, and 93.5% of the pine nematode, Bursaphelenchus xylophilus, on PDA plate within 12 hours. According to the nematicidal activity, three new compounds, 2, 4, 6-triacetylenic octane diacid, 2, 4, 5, 6-tetrahydroxyhexanoic acid and 3, 4-dihydroxy-2-keto-n-butyl 2,4,5,6-tetrahydroxyhexanate, were isolated from submerged cultures of Poria cocos. Of these, 2, 4, 6-triacetylenic octane diacid could kill 83.9% Meloidogyne arenaria and 73.4% Panagrellus redivivus at 500 ppm within 12 hours. Here, it is reported for the first time that Poria cocos has nematicidal activity.
Takjoo mashes which were collected from the Takjoo breweries in Seoul area were studied on the purpose of detection for the reciprocal actions between amylase activity and saccharifying ability. The results obtained are as follows. Amylase activity was found to be usually high in the primary brewing process as well as the main brewing process. And especially, .alpha.-amylase in the primary brewing process showed remarkably high activity, more than 5.0 D.P. per/ml of mash comparing with 3.8 D.P. per ml of mash in the main brewing process. However, it was revealed that the reducing sugar contents in the primary brewing process were much higher in its average contents, 5.5%, than 1.1% in the main brewing process.
A lipase from Aeromonas sp. LPB 4, a psychrotophile isolated from a sea sediment was purified and characterized. The lipase was purified 53.5 fold to a homogeneous state by acetone precipitation and QAE sephadex column chromatography and its molecular weight was determined to be 50 kDa by SDS-PAGE. The enzyme exhibited maximum activity at 10$^{\circ}C$ and was stable at temperatures lower than 50$^{\circ}C$. This lipase favored substrates containing medium carbon chain of acyl group, while too low and high carbon chain decreased its activity. The lipolytic activity of purified lipase was slightly increased by the addition of 0.1% detergent, but decreased by 1% of detergent. Butanol severely decreased the lipase activity while methanol increased the activity about 15%.
Bacillus subtilis BB-1 (KFCC l1344P)으로부터 분리된 혈전용해효소 유전자 (BCF-1)를 대량발현 벡터인 pEB 벡터에 크로닝하여 순수분리 된 혈전용해효소를 rat 경구 투여하여 출혈시간, 혈액의 응고, serum의 혈전용해능 등에 대한 in vivo 실험을 실시하였으며, 혈전용해효소의 단회경구투여에 따른 독성을 검사하였다. 효소의 경구투여에 따른 rat의 출혈시간에서는 대조군에 비하여 모든 경구 투여군에서 출혈시간이 유의적으로 약 1.75배 이상 길게 나타남을 확인하였고(P<0.05), 혈액의 출혈시간 또한 활발히 진행됨을 관찰하였다. 혈액으로부터 분리된 serum의 혈전용해작용 있어서는 경구투여 후 1시간부터 채혈한 혈액 내에서 혈전용해효소의 활성이 검출되기 시작하여 3시간째까지 높은 활성을 보였으며 4시간째부터 서서히 활성이 감소하는 것을 확인하였고 혈액의 응고 역시 대조군에 비하여 경구 투여군에서 상당히 지연되는 것을 알 수 있었다. Western blot에 의한 효소 검출에서는 경구 투여군에서 30,000 Da 크기의 단일밴드를 확인하였으며, 혈전용해효소의 rat에 대한 단회경구투여 독성실험에서 중량의 변화, 장기의 이상여부, 사망률 등에서 어떠한 이상이나 병변이 발견되지 않았다. 이상의 결과로 동물실험을 통한 혈전용해 효소의 경구투여에 의한 작용을 혈액 내에서 확인 할 수 있었으며, 본 효소의 단회 경구투여 시의 독성은 전혀 없음을 확인할 수 있었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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