• Biomolecules & Therapeutics
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• 제24권5호
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• pp.543-551
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• 2016

This study was designed to evaluate the pharmacological effects of Vaccinium bracteatum Thunb. methanol extract (VBME) on microglial activation and to identify the underlying mechanisms of action of these effects. The anti-inflammatory properties of VBME were studied using lipopolysaccharide (LPS)-stimulated BV-2 microglial cells. We measured the production of nitric oxide (NO), inducible NO synthase (iNOS), cyclooxygenase (COX)-2, prostaglandin $E_2$ ($PGE_2$), tumor necrosis factor-alpha (TNF-${\alpha}$), interleukin-1 beta (IL-$1{\beta}$), and interleukin-6 (IL-6) as inflammatory parameters. We also examined the effect of VBME on intracellular reactive oxygen species (ROS) production and the activity of nuclear factor-kappa B p65 (NF-${\kappa}B$ p65). VBME significantly inhibited LPS-induced production of NO and $PGE_2$ and LPS-mediated upregulation of iNOS and COX-2 expression in a dose-dependent manner; importantly, VBME was not cytotoxic. VBME also significantly reduced the generation of the pro-inflammatory cytokines TNF-${\alpha}$, IL-$1{\beta}$, and IL-6. In addition, VBME significantly dampened intracellular ROS production and suppressed NF-${\kappa}B$ p65 translocation by blocking $I{\kappa}B-{\alpha}$ phosphorylation and degradation in LPS-stimulated BV2 cells. Our findings indicate that VBME inhibits the production of inflammatory mediators in BV-2 microglial cells by suppressing NF-${\kappa}B$ signaling. Thus, VBME may be useful in the treatment of neurodegenerative diseases due to its ability to inhibit inflammatory mediator production in activated BV-2 microglial cells.

• 생명과학회지
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• 제25권11호
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• pp.1255-1264
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• 2015

천궁(C. officinale)은 예로부터 민간처방 약재로 사용되었으며, 항염증, 항산화, 항암 및 신생혈관억제 등의 효능을 가지는 것으로 알려져 있다. 하지만 혈구암세포에서 apoptosis 유발과 관련된 분자생물학적 기전에 대해서는 명확히 밝혀져 있지 않다. 본 연구에서는 인체 혈구암세포인 U937 세포에서 천궁의 열수, 에탄올 및 메탄올 추출물(WECO, EECO 및 MECO)이 유발하는 항암효과 및 항암기전을 조사하였다. 먼저 WECO, EECO 및 MECO가 유발하는 증식억제 정도를 조사한 결과 EECO가 가장 뛰어난 효능을 가진다는 것을 알 수 있었으며, 이러한 현상이 apoptosis 유발에 의한 것임을 annexin-V 염색, apoptotic body 형성, DNA 단편화 및 MMP 소실 등을 통하여 확인하였다. EECO 처리에 의한 apoptosis 유발에는 DR4의 발현 증가와 함께 cIAP-1, Bcl-2 및 total Bid의 발현감소가 관여하였으며, caspases-3, -8 및 -9의 활성화와 함께 caspases-3의 기질 단백질인 PARP, β-catenin 및 PLC γ1의 단편화도 관찰되었다. 또한 EECO는 AMPK signaling pathway를 활성화시키는 것으로 나타났으며, AMPK 억제제인 compound C를 이용하여 AMPK의 활성을 억제하였을 경우 EECO에 의하여 유발되었던 apoptosis가 현저하게 감소되는 것으로 나타났다. 이상의 결과를 살펴볼 때 인체 혈구암세포인 U937 세포에서 EECO에 의하여 유발되는 apoptosis는 AMPK가 중요한 조절자로서 작용하는 것으로 생각된다.

• 한국식품영양과학회지
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• 제41권7호
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• pp.901-906
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• 2012

본 연구에서는 넓패 메탄올 추출물의 농도별 처리가 인체 자궁암 세포 HeLa의 세포사멸에 미치는 영향을 확인하기 위하여 세포독성 측정, Hoechst 33258 staining, flow cytometry 분석을 통하여 세포사멸을 확인하였다. 넓패 메탄올 추출물 처리 시 HeLa 세포에서 농도 의존적으로 세포의 증식을 억제하였으며, 또한 넓패 메탄올 추출물은 농도 의존적으로 핵을 응축하고 apoptotic bodies을 생성하였다. 유세포 분석을 통하여 apoptosis를 측정한 결과, 넓패 메탄올 추출물의 농도가 증가함에 따라 유의적으로 apoptotic 세포가 증가하였다. Western blot을 통해 PARP 단백질의 절단 현상을 분석한 결과, 넓패 메탄올 추출물의 처리 농도와 시간에 따라 PARP 단백질의 절단 현상이 증가하였다. 또한 넓패 메탄올 추출물은 caspase-8, caspase-9 및 caspase-3 활성을 농도와 시간에 따라 증가시켰으며, caspase 저해제인 z-VAD-fmk로 처리 시 넓패 메탄올 추출물에 의한 세포사멸이 유의적으로 감소되어 넓패 메탄올 추출물에 의한 HeLa 세포의 apoptosis 유도에 caspase가 중요한 역할을 하고 있음을 확인하였다. 따라서 넓패 메탄올 추출물은 HeLa 자궁암 세포의 apoptosis를 유도하는 것으로 나타나 넓패의 항암효과 가능성을 제시하였다.

• Applied Microscopy
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• 제40권4호
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• pp.201-209
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• 2010

한방에서 사용되는 약재 중 가자와 지모, 단삼은 면역조절 및 항암효과, 항염증효과가 있다고 알려졌다. 그러나 비만세포와 관련된 아나필락스를 이해할 수 있는 세포학적 기전에 대한 가자와 지모, 단삼의 효과에 대해서는 알려진 바 없다. 본 연구에서는 가자와 지모, 단삼의 메탄올 추출물이 아나필락시스 반응에 대해 어떠한 영향을 끼치는지를 조사하였다. 시험관내 실험과 생체 실험을 통하여, 가자와 지모, 단삼의 메탄올 추출물이 compound 48/80에 의한 아나필락시스와 비만세포 활성화 및 IgE에 의한 피부반응을 관찰하였다. 실험결과는 다음과 같다. 1) 가자와 지모, 단삼의 메탄올 추출물은 compound 48/80에 의한 전신성 아나필락시스와 귀부종 반응, IgE에 의한 피부반응을 억제하였다. 2) Compound 48/80에 의한 비만세포 탈과립과 흰쥐 복강 비만세포로부터 히스타민 유리가 가자와 지모, 단삼의 메탄올 추출물 전처리에 의해 억제되었다. 3) Compound 48/80에 의한 흰쥐 복강 비만세포내로의 칼슘 유입이 가자와 지모, 단삼의 메탄올 추출물 전처리에 의해 현저하게 억제되었다. 이상의 결과로 가자와 지모, 단삼의 메탄올 추출물은 비만세포 탈과립과 비만세포로부터 히스타민 유리, 비만세포내로 칼슘유입을 억제함으로써 compound 48/80에 의한 아나필락시스와 IgE에 의한 피부반응을 억제한다는 것을 알 수 있었다. 이로써 가자와 지모, 단삼은 알레르기 질환에 대한 효과적인 치료제로 이용될 수 있을 것으로 생각된다.

• 생명과학회지
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• 제23권4호
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• pp.578-585
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• 2013

최근 식생활의 변화에 따라 당뇨병, 비만 등의 만성대사질환의 발병률이 증가함에 따라 예방과 치료를 위한 물질연구가 많이 진행되고 있다. 본 연구에서는 선행 연구에서 항당뇨 효능이 확인된 Vigna nakashimae (VN) 메탄올 추출물로부터 VN 클로로포름층 분획물과 물층 분획물을 얻어 각 분획물의 항당뇨 효능과 분자적 기전을 살펴보았다. 각각의 VN 분획물을 제 2형 당뇨병질환모델인 db/db 마우스에 경구투여하여 VN 분획물의 혈당 및 지질 대사 변화 등을 측정하였다. VN 클로로포름층 분획물은 공복 혈당과 당화혈색소를 물층 분획물보다 더 효과적으로 감소시켰다. 또한 내당능도 개선하였으며, 혈중 지방산과 중성지방도 감소시켰다. VN 클로로포름층 분획물은 HepG2와 C2C12세포에서 인산화된 AMPK와 AMPK 하위 유전자인 CPT-1의 유전자 발현을 증가시켰다. VN 클로로포름층 분획물은 AMPK의 활성화와 일치하게 HepG2에서 당 생성 효소인 PEPCK와 G-6Pase의 발현을 감소시켰으며, C2C12에서는 당 유입을 증가시켰다. 이상의 결과는 VN 클로로포름층 분획물은 AMPK의 활성화를 통해 공복혈당을 감소시켰으며, 이러한 효과는 물층 분획물보다 더 효과적이었다.

• 생명과학회지
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• 제16권7호
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• pp.1199-1206
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• 2006

Plasminogen kringle 5는 plasminogen kringles 1-4로 구성된 내생의 혈관 신생 억제제인 angiostatin과 같이 내피세포의 분열을 강력하게 억제한다고 알려져 있다. 본 연구에서는 plasminogen kringle 5의 재조합 단백질을 효모 발현 체계에서 생산하여 내피세포의 이동에 대한 저해 효과와 이에 대한 작용기전을 조사하였다 재조합 단백질 PK5는 plasminogen의 Thr456에서 Phe546까지 이르는 cDNA 부분을 ${\alpha}-factor$ prepro-peptide의 분비 신호 서열 뒤에 도입하여 Pichia pastoris GS115에서 발현시켰다. 메탄올 유도 후 얻은 배양액을 S-spin column을 이용하여 정제하였다. 정제된 단백질을 SDS-PACE하였을 때 약 10kDa의 단일 밴드를 나타냄을 확인할 수 있었다. 정제된 PK5는 bFGF나 VEGF에 의해 유도된 인간의 제대 유래 내피 세포의 이동을 약 500nM의 $IC_{50}$ 값으로 농도 의존적으로 감소시켰다. 내피 세포에 PK5 500M을 처리한 결과 bFGF에 의해 유도된 ERK1/2의 인산화를 감소시켰다 또한, PK5는 bFGF에 의해 유도된 내피세포의 골격 재형성을 강력하게 억제하는 것으로 관찰되었다. 따라서, 이러한 결과들은 효모 생산 PK5가 내피세포의 이동을 효과적으로 억제하며, 이는 ERK1/2의 활성과 세포골격의 재배열을 억제함으로써 나타나는 것으로 부분적으로 설명될 수 있다.

• Journal of Applied Biological Chemistry
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• 제65권3호
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• pp.215-219
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• 2022

코스모스 꽃을 MeOH : H₂O = 4 : 1 용매로 추출하여, 얻어진 추출물을 EtOAc n-BuOH 및 water로 용매 분획 하였다. 이 중 n-BuOH 분획으로부터 silica gel (SiO₂)과 octadecyl silica gel(ODS) column chromatography로 정제하여 2종의 화합물을 분리하였다. NMR, MS 및 IR 등의 스텍트럼 데이터를 통해 화합물의 화학구조를 benzyl O-β-ᴅ-glucopyranoside (1)와 and 2-phenylethyl O-β-ᴅ-glucopyranoside (2)로 동정하였다. 분리한 두 화합물의 자외선(UVB)으로 광노화가 유도된 HaCaT 세포주를 이용한 항아토피 효능을 평가하기 위해 실험을 진행하였으며, 1-1,000 ㎍/mL의 농도범위에서 2종의 화합물에서 모두 독성을 나타내지 않았다. TARC생성억제활성을 통한 항아토피 활성결과에서는 2종의 화합물에서 모두 농도의존적인 TARC 억제활성이 나타났지만, 특히 화합물 1에서 낮은 농도범위인 10 ㎍/mL에서도 유의적인 활성이 나타났으며, 다른 농도범위에서도 타 화합물에 비해 억제활성이 높은 것으로 나타나, 항아토피 활성이 가장 우수한 것으로 확인되었다. 이 결과를 통해 기능성 화장품 원료로 활용이 가능할 것으로 사료된다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제50권4호
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• pp.574-583
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• 2022

Ficus vasculosa Wall. ex Miq. (FV) has been used as a herbal medicine in Southeast Asia and its antioxidant activity has been shown in previous studies. However, it has not yet been elucidated whether FV exerts anti-inflammatory effects on activated-macrophages. Thus, we aimed to evaluate the ameliorative property of FV methanol extract (FM) on lipopolysaccharide (LPS)-induced inflammatory responses and the underlying molecular mechanisms in RAW264.7 macrophages. The experimental results indicated that FM decreased the production of inflammatory mediators (NO/PGE2) and the mRNA/protein expression of iNOS and COX-2 in LPS-stimulated RAW264.7 cells. FM also reduced the secretion of interleukin (IL)-1β, IL-6, tumor necrosis factor (TNF)-α and monocyte chemoattractant protein (MCP)-1 in LPS-stimulated RAW264.7 cells. Results also demonstrated that FM improved inflammatory response in LPS-stimulated A549 airway epithelial cells by inhibiting the production of cytokines, such as IL-1β, IL-6 and TNF-α. In addition, FM suppressed MAPK activation and NF-κB nuclear translocation induced by LPS. FM also upregulated the mRNA/protein expression levels of heme oxygenase-1 and the nuclear translocation of nuclear factor erythroid 2-related factor 2 in RAW264.7 cells. In an experimental animal model of LPS-induced acute lung injury, the increased levels of molecules in bronchoalveolar lavage (BAL) fluid were suppressed by FM administration. Collectively, it was founded that FM has anti-inflammatory properties on activated-macrophages by suppressing inflammatory molecules and regulating the activation of MAPK/NF-κB signaling.

• Food Science and Biotechnology
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• 제17권2호
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• pp.343-348
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• 2008

In this study, antioxidant activity of methanol extract of Glycyrrhiza uralensis Fisch (GUE) against $H_2O_2$-induced DNA damage in human leucocytcs and cell death in PC12 cells was determined. The effect of GUE on $H_2O_2$-induced DNA damage in human leucocytcs was evaluated by the comet assay, where GUE ($1-50\;{\mu}g/mL$) was a dose dependent inhibitor of DNA damage induced by $H_2O_2$. The protective effect of GUE against $H_2O_2$-induced damage on PC12 cells was investigated by MTT reduction assay and lactate dehydrogenase release assay. A marked reduction in cell survival induced by $H_2O_2$ was significantly prevented by $1-50\;{\mu}g/mL$ of GUE. The enzyme activity of caspase-3 was elevated in $H_2O_2$-treated PC12 cells, while preincubation with GUE for 30 min inhibited $H_2O_2$-induced caspase-3 activation in a dose-dependent manner. In conclusion, GUE ameliorates $H_2O_2$-induced DNA damage in human leucocytes and has neuroprotective effect by preventing cell death in PC12 cell, suggesting that GU may be a potential candidate for novel therapeutic agents for neuronal diseases associated with oxidative stress.

• 대한화장품학회지
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• 제23권3호
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• pp.101-107
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• 1997

Phellinus linteus was artificially cultivated in kangwon province in Korea. The air-dried phellinus linteus was frozen in liquid nitrogen tank and powdered in jar. 10g of the powder was extracted with each 200g of ethanol, methanol, distilled water and 1,3-butylene glycol/distilled water 4 hours under refluxing and then the liquidextract was concentrated under reduced pressure. As a result of analysis by high performance liquid chromatography and thin layer chromarography, many kinds of sugar and flavonoids were detected. Also we knew that phellinus linteus' extract had a strong UV-ray absorption. In the efficacy test for applying to cosmetics, free radical scavenging effect was confirmed. As a result, 2% of sample was the most potent inhibitory effect and the free radical savenging activity, was 0.31%. This is more effective than any other meterial. In the test of antioxidative activity against lipid autoxidation, phellinus linteus' extract had a good effect by 46% while vitamine E was 42.3%. The immunological activity of phellinus linteus was showed through the activation of macrophage cell. Actually, phellinus linteus activated macrophage function of 1.1-1.8 times including nitrite production compared to control. The whitening effect of phellinus linteus was showed through the inhibition of tyrosinase activity, melanin biosynthesis of S. bikiniensis and B-16 melanoma cells. Phellinus linteus' extract was showed strong mushroom tyrosinase inhibitory activity with IC50 value of 0.5% and inhibited melanin biosynthesis with 28mm inhibition zone at 0.005%/paper disc in S. bikinniensis, a bacterium used as an indicator organism in this work. Also it inhibited melanin biosynthesis in B-16 melanoma cells with a minimum inhibitory concentration of 0.134%.