• 식물조직배양학회지
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• 제22권6호
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• pp.339-343
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• 1995

철이온이 Arabidopsis thaliana의 mesophyll protoplasts 배양에 미치는 영향을 조사하기 위하여 mesophyll protoplasts를 분리한 후 변형시킨 IMH 배지에 서로 다른 농도의 Fe-EDTA를 조성하여 배양하는 동안 나타나는 현상들을 관찰하였다. 세포분열률, 미세캘러스의 생장 및 첫번째 세포분열의 시기 등이 Fe-EDTA 농도에 따라 현저히 달라짐을 확인하였다. 대조군에서는 전혀 세포분열이 관찰되지 않았으며, 0.02 mM 미만의 저농도에서는 세포분열률이 낮았다. 0.5-1 mM에서 가장 빠른 세포분열과 높은 분열률을 보였으며 미세캘러스의 형성과 생장도 가장 빨랐다. 낮은 농도(0-0.25 mM)의 Fe-EDTA가 첨가된 배지에서는 농도의 증가와 비례하여 분열률이 높아졌고, 첫 세포분열의 시기와 미세캘러스의 생장 또한 농도의 증가에 비례하여 촉진되는 것으로 나타났다. 그러나 이러한 현상은 1 mM에서최고치를 보인 후 그 이상의 농도에서는 농도의 배가에 따라 효율이 현저히 감소되는 것으로 관찰되었다. 본 연구에서 엽육세포 원형질체의 세포분열 및 미세캘러스의 생장이 최대로 나타났던 0.5-1 mM 철이온 농도는 현재 일반적으로 사용되고 있는 배지들에 비해 5-10배의 높은 농도이다.

• 한국산림과학회지
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• 제74권1호
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• pp.29-36
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• 1986

이태리포푸라 I-214 (Populus euramericana cv. I-214)의 기내배양(器內培養)한 엽육조직(葉肉組織)에서 원형질체(原形質體) 분리(分離)에 미치는 몇가지 요인(要因)에 대(對)해 조사(調査), 검토(檢討)하였다. 기내(器內)에서 배양(培養)된 아(芽)를 다량(多量)으로 증식(增植)하기 위한 배지(培地)는 MS 기본배지(基本培地)에 $0.1mg/{\ell}$의 BAP를 첨가(添加)한 것이 가상 좋은 성적을 나타냈다. 엽(葉) 1g 당(當) $2.4{\times}10^6$개의 가장 높은 원형질체(原形質體) 분리(分離) 빈도를 나타낸 것은 Cellulase R-10 2 %, Macerozyme R-10 0.8 %, Hemicellulase 1.2 %, Driselase 2.0 %, Pectolyase Y-23 0.05 %에 DTT와 MES 완충액을 첨가(添加)한 후 삼투압 안정제로 0.6 M의 Mannitol을 넣고 pH를 5.6으로 조정한 효소용액(酵素溶液)이었다. CPW 용액(溶液)으로 세정(洗淨)한 후 0.6 M의 Sucrose 용액(溶液)에 처리(處理)한 것이 회수율(回收率) 51.8 %로 가장 높게 나타났다.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제49권4호
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• pp.331-338
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• 2022

Sunflower (Helianthus annuus L.) protoplasts were isolated from seven-day-old etiolated hypocotyls of 10 A line and four-week-old fully expanded young leaves of PI 441983 line in vitro seedlings using an enzymatic method. Purified protoplasts were collected by filtration and floatation in sucrose solution. Semi-solid protoplast culture was performed using the L4 regeneration protocol with various culture media and plating densities to achieve the highest efficiencies for protoplast culture of hypocotyl and mesophyll protoplasts of 10 A and PI 441983 lines, respectively. The concentrations in liquid L'4M medium and different plating densities were evaluated in two types of cytokinins, the adenine-type 6-benzyladenine (BA) and the phenylurea-type thidiazuron (TDZ). The highest colony formation was achieved in both sunflower lines when 0.5 mgL^-1 BA and 0.5 mgL^-1 TDZ were applied with a high plating density (3 × 10⁵ protoplasts mL^-1). These conditions led to 38.45% and 39.40% colony formation for hypocotyl protoplasts of the 10 A line and mesophyll protoplasts of the PI 441983 line, respectively. Moreover, many hypocotyl protoplast-derived colonies developed into micro-calli. In addition, superior development of both sunflower protoplasts was observed with all plating densities when BA was used in combination with TDZ. This finding will be applicable to future sunflower hybrid production via somatic hybridization.

• 한국산림과학회지
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• 제73권1호
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• pp.33-42
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• 1986

현사시 (Populus alla${\times}$P. glandulosa)의 기내배양(器內培養) 엽육조직(葉肉組織)으로부터 원형질체(原形質體)의 분리(分離) 및 배양(培養)을 시험하였다. 무균(無菌)의 엽육조직(葉肉組織)을 육성(育成)하기 위한 shoot의 대량증식에는 MS기본배지에 BAP 0.4 mg/l을 첨가하였을 때 가장 증식효과가 높았으며, 원형질체(原形質體)의 분리(分離)를 위한 효소농도는 Cellulase 2%, Macerozyme 0.8%, Hemicellulase 1.2%, Driselase 2%, Pectolyase Y-23 0.05%가 가장 효과적이었다. 효소용액의 삼투압은 mannitol 0.6 M이 적합하였으며, pH는 5.6이 적절하였다. 원형질체(原形質體)의 안정성을 높이기 위하여 DTT와 MES buffer를 첨가하여 좋은 결과를 얻었다. 분리(分離)된 원형질체(原形質體)의 정제를 위해서는 부유용액(浮遊溶液)의 sucrose 농도를 0.6M로 하였을 때가 가장 적합하였으며 dextran의 첨가효과도 높았다. 본 연구의 특징은 다소 높은 농도의 효소용액을 처리하여 단시간에 원형질체(原形質體)를 분리(分離)하는 것으로서 이 방법에 의해 나출(裸出)된 원형질체(原形質體)의 배양(培養)에 있어서 반응여부를 조사한 결괴 배양 3주 후에까지도 좋은 반응을 보였다.

• 한국환경과학회지
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• 제17권2호
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• pp.163-170
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• 2008

Protoplasts of Panax ginseng C. A. Meyer and Aralia continentalis K. (Araliaceae) were isolated from callus cells and mesophyll cells, respectively. The maximum yield of protoplasts isolated from callus cells of P. ginseng were obtained by incubation for 3 hrs in the enzyme mixture of 0.5% macerozyme, 1.5% cellulase, and 0.5 M mannitol as an osmoticum. In the case of mesophyll cells of A. continentalis, the highest yield of protoplasts were obtained by incubation for 5 hrs in the enzyme mixture of 1% macerozyme, 2% cellulase, and 0.6 M mannitol. A polyethylene glycol (PEG) treatment induced an intergeneric fusion of the protoplasts. The fusion products, that is, heterokaryocytes were obtained by treatment of 50% PEG containing 0.05 M Ca salts.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제7권3호
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• pp.169-174
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• 2005

The optimal culture conditions were studied for plant regeneration from mesophyll protoplasts of Solanum sisymbriifolium. Axenic seedlings of S. sisymbriifolium were used as a explant for protoplast culture. Many viable protoplasts were isolated by incubating leaf slices in an enzyme solution containing 0.25% Meicerase and 0.05% Macerozyme for 16 hr at $25^{\circ}C$ without shaking. Protoplast density of $5.0{\times}10^4\;ml^{-1}$ in Kao medium containing 5.0 mg/L NAA, 1.0 mg/L 2,4-D and 1.0 mg/L BA was optimal for colony formation. Most colonies were formed when protoplasts were cultured at $25^{\circ}C$ after initial culture at $30^{\circ}C$ for one week. On the MS agar medium with 1.0 mg/L zeatin, 38.4% of protoplast-derived calli differentiated shoots. These shoots rooted on 1/2MS medium with 5.0 g/L sucrose and 2.5 g/L gellan gum, and developed into whole plants.

• Journal of Plant Biology
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• 제29권3호
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• pp.197-205
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• 1986

Leaf mesophyll protoplasts from five cultivars of tobacco (N. tabacum L.) were cultured. The protoplasts did not survive in culture medium containing Murashige and Skoog inorganic salts for over 6 days. NH4NO3 and FeSO4.Na2EDTA concentration of Murashige and Skoog medium were toxic in tobacco leaf mesophyll protoplast culture. Therefore we investigated optimum condition in Murashige and Skoog medium. High plating efficiency was obtained by reducing the concentrations of NH4NO3 and FeSO4.Na2EDTA to 1/3 and 1/10, respectively, on the supplemented with 5$\mu$M IAA, 0.5 $\mu$M 2.4-D 5 $\mu$M BAP. Plants were regenerated from protoplast-derived calluses.

• 한국연초학회지
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• 제20권1호
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• pp.40-49
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• 1998

Protoplasts were isolated from mesophyll of tobacco(Nicotiana glauca) transformed with kanamycin-resistant gene (NPT II gene) and potato hairy root callus containing Ri plasmid of Agrobacterium rhiEogenes, and protoplasm fusion was made between the isolated protoplasts. The transgenic tobacco leaf tissue could grow on the media containing high concentrations of kanamycin, but not on the phytohormone-free media. On the other hand, the potato hairy root calli could be cultured on the phytohormone-free media but not on media containing more than 40 ㎍/ml kanamycin. In these conditions, the viability of both protoplasts were above 90%, These selection markers were used for the selection of protoplasts fused between the two, i.e. protoplast fusion was detected using selection media containing 100㎍/ml kanamycin and with no phytohormone. The mixture of 1.0% cellulase, 0.3% macerozyme, and 0.7M mannitol was best for the maximum protoplast production for tobacco, and that of 2.0% cellulase, 2.0% macerozyme, 1.0% dricelase, and 0.5M mannitol for potato. Both tobacco mesophyll and potato callus protoplasts were fused by using PEG solution on the selectable medium. Cell walls were regenerated after 5 days in this medium, and colonies were alive until 4 weeks after cultural, but died after 6 weeks.

• 식물조직배양학회지
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• 제22권5호
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• pp.277-281
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• 1995

칼슘이온의 농도가 Arabidopsis thaliana의 원형질체배양에 미치는 영향을 조사하기 위해 Arabidopsis thaliana의 원형질체를 분리하여 서로 다른 농도의 CaCl$_2$를 첨가한 IMH 배지에서 배양하면서 나타나는 현상을 관찰하였다. 대조군과 12.5 mM 이하의 농도에서는 배양세포들이 심하게 액포화되었으며 세포분열은 관찰되지 않았다. 0-50 mM 범위의 농도에서는 농도의 증가와 비례하여 세포의 액포화가 적었으며 이에 반하여 plasma rich cell의 비율은 높아졌다. 세포분열의 유도는 25 mM 이상의 농도에서 관찰되었고 50mM에서 가장 높은 평판효율(5-6%)을 나타내었다. 그러나 100 mM 이상의 농도에서는 뚜렷한 저해효과를 나타내었다. 칼슘이온의 투여 시기가 세포분열과 콜로니 형성과정에 미치는 영향을 조사하기 위하여 서로 다른 농도의 칼슘이온을 각각 원형질체 분리용액과 배양액에 투여하고 배양한 결과, 투여 시기에 따른 영향은 콜로니의 형성과정에 다소 차이를 보였다. 이처럼 높은 칼슘 농도가 원형질체 배양시 요구되는 것은 원형질체가 배지로부터 생장조절물질을 흡수하여 재분화하는 과정에서 칼슘이온이 중요한 조절작용을 하기 때문인 것으로 추측된다.

• 한국작물학회지
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• 제27권2호
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• pp.147-154
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• 1982

식물원형질체를 이용하여 체세포잡종을 육성하기 기초자료를 얻고자 식물의 엽육부위, Callus에서 효과적인 원형질체의 분리, 적합한 배양조건 및 세포융합에 관한 조건을 조사한 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 배양 융합조건에 적합한 식물원형질체의 분리 방법은 여러 종류의 효소농도에 따라 다르지만 담배 및 완두엽육 원형질체분리에는 Macerozyme 0.5%, Cellulase 2.0%, KDS 0.5%, Mannitol 0.7M의 효소용액에 처리시 활성 있는 원형질체를 얻을 수 있었다. 2. 배양중인 담배 및 대두의 Callus로부터 원형질체분리는 배양기간에 따라 세포활성도가 떨어지거나 쉽게 파괴되는 현상을 보여 양호한 원형질체를 얻을 수가 없었다. 3. 원형질체의 배양은 배양배지에 Plating할 경우 세포농도에 따라 차이가 있었으며 1.0$\times$$10^4$/ml이상이어야 분열이 가능하였고 배양조건은 150Lux 12시간 광암처리후가 세포분열 및 증식이 가장 왕성하였다. 4. 세포융합은 PEG농도가 중요하며 PEG 1500 0.33M에서 CaCl_2농도가 높을수록 융합율이 증가되는 경향이었다.