We tested effects of bioactive lysophospholipids including lysophosphatidic acid (LPA), lysophosphatidylcholine (LPC), sphingosylphosphorylcholine (SPC), and sphingosine I-phosphate (S1P) on membrane potential in C6 glioma cells to understand action mechanism of the lysophospholipids. Membrane potential was estimated by measuring fluorescence change of DiBAC-loaded glioma cells. LPA largely increased membrane potential and the increase was gradually diminished. LPC also increased the membrane potential, however, the increase sustained. SPC induced smaller increase of membrane potential than LPC. SIP was not able to change the membrane potential. We tested effects of suramin and pertussis toxin on lysophospholipid-induced membrane potential increase. However, there wasn't any effect. The membrane potential increase was partially diminished in $Na^+$-free media, suggesting $Na^+$ influx as a component of membrane potential changes. Thus, involvement of $Na^+$ influx in the increase of membrane potential by lysophospholipids and independence of suramin-sensitive GPCRs and pertussis toxin-sensitive G proteins are found in this study.
Lee Yun-Kyung;Liu Yong-Hong;Jung Jee-H.;Im Dong-Soon
Biomolecules & Therapeutics
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제14권2호
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pp.110-113
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2006
We tested effect of sarcotride A, a bioactive cyclitol derivative from a marine sponge, on membrane potential in C6 glioma cells. Membrane potential was estimated by measuring fluorescence change of DiBAC-loaded glioma cells. Sarcotride A increased membrane potential in a concentration-dependent manner. We tested effects of pertussis toxin, U73122, EIPA, and $Na^+-free$ media on sarcotride A-induced increase of membrane potential to investigate involvement of G proteins, phospholipase C, $Na^+/H^+$ exchanger, and $Na^+$ channels. However, we were not able to observe any significant effect of those pharmacological inhibitors, excluding the involvement of the molecules as candidate targets or signaling molecules of sarcotride A-induced increase of membrane potential. Further investigation is necessary to elucidate action mechanism of sarcotride A.
The membrane potential in the subepidermal cells of Lemna gibba G3 fronds was measured in the dark with glass capillary microelectrodes. At pH 7, the membrane potential, approximately-215 mV, could be depolarized to -82∼-88 mV by 0.1 mM dicyclohexylcarbodiimide (DCCD) or by KCN at 0.3 mM or higher concentrations. When the pH of the medium was altered the potential showed reversible changes, while it revealed no response to the external pH changes when energy transduction across the membrane was being blocked by 0.1 mM DCCD. The results support an assumption that the active component of the membrane potential of Lemna subepidermal cells is generated by electrogenic H+ -pump. By the addition of 0.10∼5.00 mM salicylic acid(SA) to the bathing medium the membrane potential was depolarized to a great extent, and the removal of SA from the medium repolarized the potential showing almost complete recovery, 92.3∼97.6% to the initial levels. Although the potential was greatly depolarized by 5.0% or higher concentrations of dimethylsulfoxide (DMSO), the recovery rate by DMSO removal was decreased as the pretreatment concentration had increased. Twenty percent DMSO pretreatment limited the recovery at only 47.1%. The presence of SA in the bathing medium could reversibly increase the permeability of the plasmalemma. DMSO at its concentration of 5.0% or higher increased the permeability of the membrane by irrevesibly impairing the membrane component involved in the membrane permeability.
Studies have been conducted to test the effect of Ginseng alcohol extract on the membrane potentials of frog skeletal muscle. The gastrocnemius muscle was isolated and placed in a chamber containing the Clark-frog Ringer solution. Membrane potentials were recorded using microelectrodes filled with 3 M KCI and muscle was electrically stimulated to obtain action potential. Changes in both the action potential and the resting membrane potential were observed after adding an appropriate amount of Ginseng alcohol extract in the perfusing Ringer solution. The results obtained from 346 muscle cells are summarized as follows : 1) The average resting membrane potential of the normal frog gastrocnemius muscle cell was -92.8 mV and the peak of the action potential reached at 29.8 mV. 2) Both the resting membrane potential and the peak of the action potential decreased by Ginseng alcohol extract, the effect being proportional to the dose of Ginseng alcohol extract. 3) The resting membrane potential and the peak of the action potential continuously decreased until about 40 min after Ginseng addition and leveled off thereafter. The potentials recovered to its original value after Ginseng was washed out. 4) The resting membrane potential was more sensitive to the Ginseng alcohol extract than was the action potential. These results strongly suggest that Ginseng alcohol extract increases both the $Na^+$ and $K^+$ permeability in the skeletal muscle cell membrane.
Ginseng has an anti-cancer effect in several cancer models. As a mechanism study of ginsenoside-induced growth inhibition in cancer cells, we measured change of membrane potential in prostate cancer and glioma cells by ginsenosides, active constituents of ginseng. Membrane potential was estimated by measuring fluorescence change of DiBAC-Ioaded cells. Among 11 ginsenosides tested, ginsenosides $Rb_2$, $Rg_3$, and $Rh_2$ increased significantly and robustly the membrane potential in a concentration-dependent manner in prostate cancer and glioma cells. Ginsenosides Rc, Ro, and $Rb_1$ slightly increased membrane potential. The ginsenoside-induced membrane potential increase was not affected by treatment with pertussis toxin or U73122. The ginsenoside-induced membrane potential increase was not diminished in $Na^+$-free or $HCO_3^-$-free media. Furthermore, the ginsenoside-induced increase of membrane potential was not changed by EIPA (5-(N-ethyl-N-isopropyl)-amiloride), SITS (4-acetoamido-4'-isothiocyanostilbene-2,2'-disulfonic acid), and omeprazole. In summary, ginsenosides $Rb_2$, $Rg_3$, and $Rh_2$ increased membrane potential in prostate cancer and glioma cells in a GPCR-independent and $Na^+$ independent manner.
1. INTRODUCTION : Recognition and binding of organic substrates by biological molecules are of vital importance in biophysics and biophysical chemistry. Most studies of the application focused on the development of biosensors, which detected reaction products generated by the binding between enzymes and substrates. Other types of biosensors in which membrane proteins (e.g., nicotinic acetylcholine receptor, auxin receptor ATPase, maltose bining protein, and glutmate receptor) were utilized as a receptor function were also developed. In the previous study[1], the shifts in membrane potential, caused by the injection of substrates into a permeation cell, were measured using immobilized glucose oxidase membranes. It was suggested that the reaction product was not the origin of the potential shifts, but the changes in the charge density in the membrane due to the binding between the enzyme and the substrates generated the potential shifts. In this study, $\gamma$-globulin was immobilized (entrapped) in a poly($\gamma$-amino acid) network, and the shifts in the membrane potential caused by the injection of some amino acids were investigated.
계면동전위라 불리는 제타전위(zeta potential)란 표면 전하적 특성을 정량화 한 값으로 전기동역학적 현상으로 발생하는 전위차를 말한다. 제타전위는 막오염(fouling)과 표면전하 분석을 통한 개질 확인 및 치환기 확인에 대한 연구가 활발히 진행되어 왔다. 그리고 제타전위를 측정하는 방법으로는 전기영동(electrophoresis), 전기삼투(eletrosmosis), 유동전위(streaming potential)를 기초로 개발되었고, 그중에서도 평막은 유동전위 측정이 적합하다고 알려졌다. 따라서, 본 연구에서는 poly(styrene-ethylene-butylene-styrene) 고분자에 암모늄을 도입하여 아민화된 SEBS 평막 형택의 분리막을 제조하고, 계면동전위 측정기를 이용하여 제조된 분리막들의 유동전위를 측정하여 결과를 분석하였다.
Kim, Se-Hoon;Choi, Kun-Moo;Kim, Hoe-Suk;Jeon, Byeong-Hwa;Chang, Seok-Jong
The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
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제3권1호
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pp.1-10
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1999
We sought to find out the mechanism of vascular relaxation by extracellular $K^+$ concentration $([K^+]_o)$ in the cerebral resistant arteriole from rabbit. Single cells were isolated from the cerebral resistant arteriole, and using voltage-clamp technique barium-sensitive $K^+$ currents were recorded, and their characteristics were observed. Afterwards, the changes in membrane potential and currents through the membrane caused by the change in $[K^+]_o$ was observed. In the smooth muscle cells of cerebral resistant arteriole, ion currents that are blocked by barium, 4-aminopyridine (4-AP), and tetraethylammonium (TEA) exist. Currents that were blocked by barium showed inward rectification. When the $[K^+]_o$ were 6, 20, 60, and 140 mM, the reversal potentials were $-82.7{\pm}1.0,\;-49.5{\pm}1.86,\;-26{\pm}1.14,\;-5.18{\pm}1.17$ mV, respectively, and these values were almost identical to the calculated $K^+$ equilibrium potential. The inhibition of barium-sensitive inward currents by barium depended on the membrane potential. At the membrane potentials of -140, -100, and -60 mV, $K_d$ values were 0.44, 1.19, and 4.82 ${\mu}M,$ respectively. When $[K^+]_o$ was elevatedfrom 6 mM to 15 mM, membrane potential hyperpolarized to -50 mV from -40 mV. Hyperpolarization by $K^+$ was inhibited by barium but not by ouabain. When the membrane potential was held at resting membrane potential and the $[K^+]_o$ was elevated from 6 mM to 15 mM, outward currents increased; when elevated to 25 mM, inward currents increased. Fixing the membrane potential at resting membrane potential and comparing the barium-sensitive outward currents at $[K^+]_o$ of 6 and 15 mM showed that the barium- sensitive outward current increased at 15 mM $K^+.$ From the above results the following were concluded. Barium-sensitive $K^+$?channel activity increased when $[K^+]_o$ is elevated and this leads to an increase in $K^+-outward$ current. Consequently, the membrane potential hyperpolarizes, leading to the relaxation of resistant arteries, and this is thought to contribute to an increase in the local blood flow of brain.
For the observations of both the membrane properties and the excitability on the unfertilized eggs of female mice, changes of the membrane resistance and the membrane potential by hyerpolarizing current stimulation were recorded. As current-voltage relation was linear over the entire range (-180mV~+60mV), membrane resistance($R_m$) was calculated from the amplitude of electrotonic potential to a given stimulus current. Also the presence of anode-break excitation was confirmed. The results were as follows; 1. There was a linear relation between the membrane resistance and resting membrane potential, the expected input resistance was 61. 4M$\Omega$(resting membrane potential was $-18.9{\pm}8.7mV$, mean${\pm}$SD, n=30). 2. Transient depolarization with overshoot was generated just after hyperpolarizing current stimulus and showed the dependency of stimulus duration. 3. Transient depolarization lasted over 30ms, amplitude of these depolarization was increased by high $Ca^{{+}{+}}$(20mM) and inhibited by $Ca^{{+}{+}}$-antagonist, $Mn^{{+}{+}}$. 4. From the above results, it was suggested that the unfertilized mouse egg showed the characteristics of the excitable cell.
Membrane potential of cells in the isolated rabbit coronary sinus was measured by conventional glass microelectrode and investigated the effect of $[K^+]_0$ variation in control, 20 mM and Ach-containing Tyrode solution. The results obtained were as follows: 1) The resting membrane potential exposed to normal Tyrode solution containing 3 mM $K^+\;was\;about\;-60{\sim}\;-65mV$. At extracellular $K^+$ concentrations from 1 to 30 mM the resting Potential was reasonably well described by Goldman -Hodgkin -Katz equation on the assumption that $[K^+]_1$ was 150 mM and that the ratio of membrane permeability coefficient for $Na^+\;and\;K^+,\;P_{Na}/P_K\;({\alpha})$ was 0.07. 2) In 20 mM Na-Tyrode solution (replacing by equimolar Tris) the resting membrane potential was hyperpolarized by 15 to 20 mV and showed slightly deviated to depolarized direction compared to the predicted value by Goldman-Hodgkin -Katz equation. 3) In the presence of $10^{-6}M$ Ach, the resting potentials at $[K^+]_0$ levels from 1 to 30 mM were well fitted with the predicted value on the assumption that $P_{Na}/P_K$ was 0.0144. It could be concluded that the low resting membrane potential of coronary sinus cells reflects a relatively high ratio $P_{Na}/P_K$ of about 0.07.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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