In the present study, we separated the marker particles from the suspending particle mixture solution using isotacho-electrophoresis technique, a novel quantitative ionic particle separation method, in the microchannel. A multiple stacking zone of the suspending particle was visualized with variations in electric field strength, pH value and concentration of the ionic solution. In particular, the electrophoretic mobility of ionic particle (fluorescein) was estimated based on the electrophoretic velocity value measured by the particle image velocimetry. As a result, isotacho-electrophoresis zones were clearly visualized as going downstream in the electric field. The particle migration velocity increased proportional to the applied voltage increase; it was also affected by the pH value variations in the ionic solution.
Fine dust has emerged as seriously hazardrous particles, which can cause respiratory and cardiovascular diseases. Thus, we have developed a natural complex extract consisted of Codonopsis lanceolata (Siebold & Zucc.) Trautv., Platycodon grandiflorum A. De Candolle, and Glycyrrhiza uralensis Fischer in the ratio of 3 : 5 : 2, which have a beneficial effect on respiratory system. In this study, simultaneous quantitative analysis of marker compounds, lobetyolin, platycodin D, and glycyrrhizic acid in the natural complex extract was developed and validated with high performance liquid chromatography-photodiode array detector. The marker compounds were shown in a large linearity with a correlation coefficient (R2) of 1.000. The limit of detection (LOD) of lobetyolin, platycodin D and glycyrrhizic acid were 5.40 ㎍/mL, 3.94 ㎍/mL and 5.86 ㎍/mL, respectively. The limit of quantification (LOQ) of lobetyolin, platycodin D and glycyrrhizic acid were 16.36 ㎍/mL, 11.94 ㎍/mL and 17.75 ㎍/mL, respectively. The content analysis revealed that the amounts of lobetyolin, platycodin D, and glycyrrhizic acid were 0.039±0.013 mg/g, 0.337±0.048 mg/g, and 1.171±0.003 mg/g, respectively, in the natural complex extract. Therefore, these results could be used as basic data for the standardization and quality control of the natural complex extract.
Cymbidium속 난의 형질전환계를 확립하기 위해서, microprojectile bombardment 방법을 이용하여 춘란(Cymbidium virescence)의 rhizome 조직세포에 외래 유전자를 도입하는 조건을 검토하였다. 각 parameter별 적정조건으로서 텅스텐 입자의 크기는 $1.11\;{\mu}m$, He 가스 압력은 $77.33kg/cm^2$, gap distance는 6.35mm, target distance는 7.0cm 이었다. DNA피복입자를 투사한 $400{\mu}m$ 두께의 rhizome 절편을 2개월간 배양한 뒤 GUS 활성을 조사한 결과 이 유전자가 발현되는 세포들이 관찰되었다. Kanamycin (100 mg/L)을 첨가한 배지에서 6개월 동안 선택배양을 통해 얻은 rhizome의 DNA를 PCR로 분석한 결과 nptII 유전자의 삽입을 확인할 수 있었다.
The Urechis unicinctus sperm and spermatogenic cells prepared from the testis are investigated to identify $\alpha-tubulin$ of axoneme microtubules using mouse monoclonal $anti-\alpha-tubulin$ as the first Ab and Gold(10nm) conjugated goat anti-mouse IgG as the Ab marker. The Ag-Ab reaction analyzed excellently the localization of $\alpha-tubulin$ and the gold particles incorporated with the proximal and distal centrioles, manchette microtubules, and flagellum. The gold particles can be also observed in the spermatogenic cells while the cells are still in sperm ball which is composed of a somatic cell and spermatogenic cells. The sperm ball is the functional unit of sperm production in U unicinctus testis. The spermatids are developed from the spermatogenic cells in the sperm ball and released into the testis cavity through a cortical cytoplasmic opening. The spermatid architectures are similar with the mature sperm of the testis cavity in aspects of shape of discoid acrosome, degree of nuclear condensation and ring type of mitochondrion. However, the distal centriole connecting with the flagella can be observed from the mature sperm while the both proximal and distal centrioles reveal only in the spermatids. The proximal centriole is directly connected with nuclear outer membrane during the stage of nuclear condensation and oriented perpendicularly to the distal centriole whose axis coinciding with the longitudinal axis of the spermatozoon. There are indications that the distal centriole is intimately associated with the polymerization of the flagellum. The manchette microtubules appear during spermatid development but the mature sperm have round head and no conspicuous middle piece.
본 연구에서는 층류 점성유동에서 원형 실린더를 기준으로 홈을 이용한 실린더의 형상변화가 유동 특성에 미치는 영향 분석을 2차원 수치 해석으로 수행하였다. 사용한 좌표계는 직교 좌표계로서 가상경계법과 표시 입자 기법을 사용하여 실린더를 구현하였다. 홈의 개수와 위치를 변수로 Re=40, 50에서 계산하였으며, 홈의 수와 위치에 의한 유동 불안정성을 해석하여 임계 레이놀즈 수를 구하였다.
The nucleolus is the largest, membrane-less organelle within the nucleus of eukaryotic cell that plays a critical role in rRNA transcription and assembly of ribosomes. Recently, the nucleolus has been shown to be implicated in an array of processes including the formation of signal recognition particles and response to cellular stress. Such diverse functions of nucleolus are mediated by nucleolar proteins. In this study, we characterized a gene coding a putative protein containing a nucleolar localization sequence (NoLS) in the rice blast fungus, Magnaporthe oryzae. Phylogenetic and domain analysis suggested that the protein is orthologous to Rrp8 in Saccharomyces cerevisiae. MoRRP8-GFP (translational fusion of MoRRP8 with green fluorescence protein) co-localizes with a nucleolar marker protein, MoNOP1 fused to red fluorescence protein (RFP), indicating that MoRRP8 is a nucleolar protein. Deletion of the MoRRP8 gene caused a reduction in vegetative growth and impinged largely on asexual sporulation. Although the asexual spores of DMorrp8 were morphologically indistinguishable from those of wild-type, they showed delay in germination and reduction in appressorium formation. Our pathogenicity assay revealed that the MoRRP8 is required for full virulence and growth within host plants. Taken together, these results suggest that nucleolar processes mediated by MoRRP8 is pivotal for fungal development and pathogenesis.
고기구이 스모크와 같은 바이오매스 소각에서 발생하는 스모크는 도시의 미세먼지중 유기성 탄소물질을 구성하는 주요 오염원이다. 미세먼지의 오염원 기여도를 산출하기 위한 화학수지모델(Chemical Mass Balance:CMB)에서는 배출원 오염물분포자료(Source Profile)가 필수이다. 바이오매스를 비롯한 고기구이 스모크의 오염물분포자료를 작성하기 위하여 유기성 지표물질들을 분석하였다. 고기구이에서 발생한 스모크를 PM10 채취기로 채취하여 용매추출, 유도체화반응, 중수소가 함유된 표준물질을 투입하여 Gas chromatography/Mass Spectrometry(GC/MS)로 팔미트산, 스테아르산, 올레인산과 같은 지방산과 콜레스테롤, 다환방향족탄화수소를 측정하였으며, 동시에 PM10 필터시료의 유기성(OC) 및 원소성 탄소(EC)를 OCEC 분석기에 의하여 측정하였다. 쇠고기구이 스모크로부터 채취한 PM10시료의 OC에서 콜레스테롤, 총포화지방산, 불포화지방산의 함량은 0.056 wt%, 2.727 wt%, 0.278 wt%이며, 돼지고기 구이 스모크로부터 채취한 PM10시료의 OC에서는 0.062 wt%, 2.022 wt%, 0.438 wt%를 차지하고 있었다. 쇠고기와 돼지고기 구이 스모크 OC에서 총 PAH화합물의 함량은 0.116 wt%와 0.044 wt% 이었는데, 그중에 단일 화합물로서 benzo(a)pyrene은 0.0071 wt%와 0.0023 wt%이었다. 콜레스테롤을 기준으로 각 지표물질의 무게 비율은 외국에서 발표된 고기구이 배출원 오염물분포자료와 거의 일치하여 유기성 에어로솔의 오염원 기여도를 산출하는 배출원 오염물분포자료로서 사용할 수 있음이 확인되었다.
Since 1993, the White Spot Syndrome Virus (WSSV) disease occurred in China among cultured shrimps resulting in mass mortality. Epizootiological surveys undertaken during the outbreak period of 1993-1994 indicated that all stages of Penaeus chinensis, P. japonicus and P. monodon were infected. Consequent to the transport of contaminated shrimp seedlings and seawater, the disease spread all over the farms of China. The disease was more rapidly transmitted at temperatures above $25^{\circ}C$. Challenge experiments showed the causative agent was highly virulent. White spots appeared on the carapace of both span-taneous and experimentally infected shrimps. Moribund shrimps contained turbid hemolymph, hypertrophied Iymphoid organ and a necrotic mid-gut gland. Electron microscopy showed the presence of viral particles in the gills, stomach, lymphoid organ, and epidermal tissue of the infected shrimp. The visions were slightly ovoid with an envelope and averaged 350 $\times$ 150 nm; nucleocapsids measured 375 $\times$ 157 nm. With discontinuous sucrose gradient of 35, 50 and 60% (w/v), the virus was separated from hemolymph of the infected shrimp. The estimated molecular weight of genomic DNA was 237 Kb with EcoR I, 247 Kb with Hind III and 241kb with Pst I. A total of 9 hybridoma colones secreting monoclonal antibodies (MAbs) were produced from mouse myeloma and spleen cells immunized with WSSV. The immunofluorescence assay of gill tissue showed that the MAbs reacted with diseased but not with healthy shrimp. The MAbs belonged to IgGl, IgG2b subclass and IgM class, all with kappa light Immune-electron-microscopy with colloidal gold marker showed the presence of 5 MAbs epitopes on the envelope and one on the capsid of the virus. Baculoviral mid-gut gland necrosis showed the specificity of the MAbs produced. For diagnosis 5 different methods were selected. Using Kimura primers for PCR, or MAbs for immunoblot, ELISA or FAT method, in situ hybridization was carried out to show the gene. All these methods detected WSSV in the organ samples of the diseased shrimp but not in healthy one.
The cell growth inhibitor effect of cervical cancer cells was investigated by liposome mediated transfection (pRcCMVp53/lipofectin) and by transfection using adenovirus (AdCMVp57). The papilloma virus cancer cell lines we used in this study were HPV16 positive, having inhibiter gene, wild p53 gene, CaSki, SiHa, HPV18 positive HeLa, HeLaS3 and HPV negative C33A, HT3. LacZ gene of E.coli was used as the marker gene for the transfection efficiency. The effect on the inhibition of tumor cell growth was measured by cell count and cell viability though ELISA analysis and MTT assay. The inhibition of tumor cell growth was confirmed by measuring each assay for six days, comparing with the normal control cell growth. The cell growth of cervical cancer calls by transfection was significantly reduced and showed tittle differences among the cell lines. To eliminate the potential problem of Ad(adenovirus) contamination during rAAV production, rAAV can be produced by a triple transfection of vector plasmic, packaging plasmid, and adenovirus helper plasmid. To examine the helper functions of Ad plasmids on the production of rAAV vector, we carried out cotransfection of three plasmids, AAV vector, packaging construct, and Ad helper plasmids. The optimized transfection condition for calcium phosphate method is 25ug of total DNA per 10-cm-diameter plate of 293 cell. We found that rAAV yields peaked at 48hr after Ad infection. The titer of rAAV was measured by the dot blot analysis to measure the number of particles/ml based on the quantification of viral DNA. Recent1y, Kombucha(fungi) was identified as a very potent antileukefic agent. In the present study, effect of natural toxin(plankton) and Kombucha is PSP(GTXI-3, neoSTX), on various MTT assay cervical cancer cell line. Toxin(GTX 1-3, neoSTX) also inhibited the proliferation in primary cervical cancer calls in a dose-dependent toxin concentration. These results showed that toxin was very potent in inhibiting the proliferation of cervical cancer calls in vitro. Toxins and Kombuoha exhibited a dose dependent inhibition of cellular proliferation in cancer cell line.
Apolipoprotein (apo) C-III is a marker protein of triacylglycerol (TG)-rich lipoproteins and high-density lipoproteins (HDL), and has been proposed as a risk factor of coronary heart disease. To compare the physiologic role of reconstituted HDL (rHDL) with or without apoC-III, we synthesized rHDL with molar ratios of apoA-I:apoC-III of 1:0, 1:0.5, 1:1, and 1:2. Increasing the apoC-III content in rHDL produced smaller rHDL particles with a lower number of apoA-I molecules. Furthermore, increasing the molar ratio of apoC-III in rHDL enhanced the surfactant-like properties and the ability to lyse dimyristoyl phosphatidylcholine. Furthermore, rHDL containing apoC-III was found to be more resistant to particle rearrangement in the presence of low-density lipoprotein (LDL) than rHDL that contained apoA-I alone. In addition, the lecithin:cholesterol acyltransferase (LCAT) activation ability was reduced as the apoC-III content of the rHDL increased; however, the CE transfer ability was not decreased by the increase of apoC-III. Finally, rHDL containing apoC-III aggravated the production of MDA in cell culture media, which led to increased cellular uptake of LDL. Thus, the addition of apoC-III to rHDL induced changes in the structural and functional properties of the rHDL, especially in particle size and rearrangement and LCAT activation. These alterations may lead to beneficial functions of HDL, which is involved in anti-atherogenic properties in the circulation.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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