본 연구는 $_L-lysine \; (_{-2}$, 6-Diaminohexanoic acid)의 영향을 받는 남조류와 남조류에 영향을 주는 $_L-lysine $의 농도를 파악 하고자 20종의 Microcystis.를 실험에 사용하였다. 남조류의 생장 억제 능력은 double-layered agar method와 microplate method를 이용하여 측정하였다. L-lysine의 농도를 100-${\mu}g\; ml-1~300 ${\mu}g\; ml^{-1}$이상에서 처리한 경우 Microcystis ichthyoblabe NIER-10021외 7종의 Microcystis sp.에서 투명대가 형성되었다. Microplate method서는10~500${\mu}g\; ml^{-1}$의 농도에서 생장억제 및 lysis를 나타내어TEk. 그리고 Microcystis viridis NIER-10020 외 3종은 10${\mu}g\; ml^{-1}$이하의 낮은 농도에서도 생장억제 및 분해를 나타내는 높은 활성을 보였다.
수도 도열병균(Pyricularia oryzae)의 균사체로부터 다량의 원형질체의 분리 및 세포벽 재생을 하기 위하여 필요한 몇가지 조건을 선발하였다. 나출을 위하여 기본용액으로 0.02M potassium phosphate buffer와 pH 5.2, 0.6M KCl로 삼투압을 조절하였고 분해효소는 ml당 각각 20mg Cellulase R-10, 5mg Macerozyme $-10, 10mg Driselase를 사용하였는데 각각의 단독처리구보다 3가지 효소의 복합처리구에서 원형질체 나출 정도가 우수하였다. 또한 선발된 복합효소액에 2일간 액체배양된 어린 균사체를 3시간, $30^{\circ}C$ 항온기에서 진탕했을 때 가장 많은 원형질체가 분리되었다. 원형질체로부터 세포벽의 재생은 순수 정제한 원형질체를 0.2M potassium phosphate와 0.6M KCl을 삼투압을 조절한 감자한철배지에 접종시켜 가장 높은 재생율을 얻을 수 있었다.
The root of Bupleurum falcatum L.(BF) has been widely used in oriental medicine as a major camponent in many prescriptions for chronic hepatitis, renal disease, tuberculosis and some other infectious diseases. Many attempts have done to investigate the therapeutic effects of these principles. However, any kinds of screenig on immune regulatory- and antitumor- effects of BF has not been reported. The present study, therefore, was undertaken to investigate the BF-effects on cellular- and humoral-immune responses, phagocytic activities of macrophages, lymphokine- and Immunoglobulin(Ig)-production of lymphocytes, tumorigenesis of implanted sarcoma 180 cells and B16 melanoma cells, and proliferations of some tumor cell lines(Fsa II, 3LL and EL4). BF increased phagocytic activities of mouse peritoneal macrophages in a dose- and time-dependent fashion. Arthus reaction and antibody responses to SRBC were slightly enhanced but delayed hypersensitivity was depresed when BF was injected before- and after-SRBC sensitization. BF inhibited the proliferative responses of human tonsillar lymphocytes to PHA- and Con A-stimulation but slightly augmented the response of these cells to Staphylococcus aureus Cowan 1(SAC)-activation. Ig secretion of human mononuclear cells activated with SAC was slightly increased by BF. BF significantly augmented the SAC-induced IL 6 production of human mononuclear cells but not influenced Con Ainduced IL 2 secretion. NK cell activities of mouse splenocytes were somewhat increased when BF was pretreated and this responses were due to the increment of binding affinities of effector cells to target cells and of lytic activities of effector cells against target cells. In vitro BF significantly inhibited the proliferations of cancer cells such as Fsa II, 3LL and EL4 strains. BF decreased not only the frequency of tumor induction but also the tumor size per sarcoma 180 or B16 cell-implanted mouse. Taken together, these results indicate that BF is one of the potential immunomodulator, and suggest its possibility to be used as a desirable antitumor agent.
Levamisloe(LMS)이 뱀장어의 면역반응에 미치는 영향을 측정하기 위해서 뱀장어의 혈액 및 신장으로부터 백혈구를 분리하여, 림프구의 증식능, MIF 생산능, 자연살해세포활성능, 탐식세포의 탐식능, superoxide anion, hydrogen peroxide 및 lysozyme 활성능 등을 측정하였다. LMS는 T-cell 마이토젠인 Con A 및 PHA 처리시에는 LMS 농도에 비례감소를 보인 반면에 B-cell 마이토젠인 LPS에는 LMS 처리와는 무관하게 큰 차이를 보이지 않았다. 한편 MIF 및 MAF의 생성에는 LMS 처리 농도에 비례 증가되었다. NK 세포의 활성은 LMS 첨가농도에 비례 증가하였는데, 이는 표적세포에 대한 결합율을 증가시킨 결과 NK 세포의 활성이 증가된 것으로 보인다. LMS는 백혈구의 탐식능, superoxide anion의 생성능, hydrogen peroxide 생성능 및 Iysozyme의 활성을 증가시켰다. 이러한 결과로부터 LMS가 어체의 면역작용에 관여하는 작용기전은 면역 작동세포수의 증가를 촉진시키기보다는 분화를 촉진시켜서 cytokine의 방출증가 및 세포의 기능활성을 증강시킴을 알수 있다.
The rapid spread of superbugs leads to the escalation of infectious diseases, which threatens public health. Endolysins derived from bacteriophages are spotlighted as promising alternative antibiotics against multi-drug resistant bacteria. In this study, we isolated and characterized the novel Salmonella typhimurium phage PBST08. Bioinformatics analysis of the PBST08 genome revealed putative endolysin ST01 with a lysozyme-like domain. Since the lytic activity of the purified ST01 was minor, probably owing to the outer membrane, which blocks accessibility to peptidoglycan, antimicrobial peptide cecropin A (CecA) was fused to the N-terminus of ST01 to disrupt the outer membrane. The resulting CecA::ST01 has been shown to have increased bactericidal activity against gram-negative pathogens including Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae, Acinetobacter baumannii, Escherichia coli, and Enterobacter cloacae and the most affected target was A. baumannii. In the presence of 0.25 µM CecA::ST01, A. baumannii ATCC 17978 strain was completely killed and CCARM 12026 strain was wiped out by 0.5 µM CecA::ST01, which is a clinical isolate of A. baumannii and resistant to multiple drugs including carbapenem. Moreover, the larvae of Galleria mellonella could be rescued up to 58% or 49% by the administration of CecA::ST01 upon infection by A. baumannii 17978 or CCARM 12026 strain. Finally, the antibacterial activity of CecA::ST01 was verified using 31 strains of five gram-negative pathogens by evaluation of minimal inhibitory concentration. Thus, the results indicate that a fusion of antimicrobial peptide to endolysin can enhance antibacterial activity and the spectrum of endolysin where multi-drug resistant gram-negative pathogens can be efficiently controlled.
We have previously shown that crude water extract of Euonymus alatus (EA) had strong prophylactic effect against chemically induced-and tumor cell implanted-cancer, and that the mechanisms responsible for its antitumor effects were due to nonspecific enhancement of the NK cell activities and the cell mediated immunity. However, it was unknown that any components of crude extract did work so, since it consisted of several components. In this paper, we fractionated the crude watar EA-extract into several fraction such as hexane-, ethylether-, ethyl acetate-, n-butanol- and water soluble-fraction, and screened the immune regulating activities of each fraction by the evaluation of lymphokine production and activated lymphocyte proliferation. As a result of the component fraction of EA-extract, it was found that n-butanol fraction was a potent immunostimulator, and the remained water soluble fraction also contained some stimulator, But, other fraction did not showed any remarkable effect. It is therefore suggested that EA-glycosides in n-butanol fraction may be new one of the potent biological response modifiers. The present study was also undertaken in an efforts to investigate the effects of elm-bark(EB, Ulmus clavidiana var japonica), which has been used for curing ulcer and inflammation as a folk medicine without any kind of experimental evidence to support this, on the cellular- and humoral-immune responses, lymphocyte function and NK cell activities in mice. Regardless of time and duration of EB-treatment, Arthus reaction and antibody response to SRBC were not modified by EB, but delayed hypersensitivity to SRBC was significantly enhanced only when EB was treated prior to SRBC-sensitization. EB slightly inhibited the proliferation responses of splenocytes to PHA-stimulation, but it significantly augmented the responses of these cells to S aureus Cowan 1 and Con A-activation, and these effects were manifested only when EB was added at culture initiation. EB did not influence Ig secretion of spleen cells but it significantly augmented the Con A-induced 1L 2 and MIF production of splenocytes. NK cell activities of splenocytes were markedly riled when effector cells were pretreated with EB and this augmentation was dine to the increase of binding affinity of effector cells to target cells and the target cell lytic activities of effector cells. These results led to the conclusion that EB triggers increase of cellular immune responses, such as delayed hypersensitivitiy, lymphokine production and NK cell activities. Also these results suggested that EB contains potent immune stimulants, which may provide the rational basis for their therapeutic use as one of the new biological response modifiers.
오골계 난백 lysozyme의 용균특성을 조사하고, 이를 식품보존료로 이용하기 위한 자료를 얻고자 오골계 난백으로부터 추출 분리한 lysozyme의 각종 미생물에 대한 용균성을 조사하였다. 그 결과, 공시균중 Gram 양성균인 Staphylococcus aureus phage type 29와 Bacillus subtilis ATCC 6633에 대하여는 용균성이 인정되었으나, Gram 음성균인 E. coli를 비롯한 여타의 균종과 Staphylococcus aureus phage type 57은 lysozyme에 대한 용균 감수성이 인정되지 않았다. 분리된 lysozyme은 S. aureus phage type 29를 공시균주로 하여 이를 육즙배지에 접종하고, $37^{\circ}C$에서 24시간 정치배양하여 세포를 회수한 후 540nm에서 흡광도가 0.6이 되도록 0.05M 초산완충액(pH 4.5)에 현탁시켜, 여기에 0.05%의 lysozyme을 가하여 $30^{\circ}C$, 30분간의 조건으로 반응시킬 때 용균성이 가장 좋았다. 또한 0.05%의 lysozyme은 반응액 중에 glycine(1%)을 첨가하므로서 공시균에 대한 용균효과가 양자의 상승작용에 의하여 그 단용시보다 현저히 증대(<50%) 되었으나, 기타 다른 첨가제와 금속이온 및 lysozyme과의 혼용효과는 인정되지 않았다.
Objectives : The purpose of this experiment is comparing the difference on natural killer cell activity through Korean red ginseng and Chinese red ginseng by $^{51}Cr$ release assay. Methods : Thirty rats were equally divided into a Korean red ginseng group, a Chinese red ginseng group and a control group. Korean and Chinese red ginseng were administrated to the rats at 200mg daily for a weak, while 0.9% normal saline was given to the control. Percent specific lysis (PSL) and lytic units (LU) were calculated from spleen cells by $^{51}Cr$ release assay. Results : Percent specific lysis of the Korean red ginseng group was significantly higher than that of the control in the ratio of 100:1, effector cell:target cell (p<0.05). Percent specific lysis of Korean red ginseng group was also significantly higher than that of the Chinese red ginseng group in the ratio of 25:1, effector cell:target cell (p<0.05). Chinese red ginseng showed no effect on NK cell activity. Conclusions : These findings suggest that Korean red ginseng improves immunologic function and shows superior effects than Chinese red ginseng.
The root rot of pepper (Capsicum annuum L.) caused by Phytophthora capsici is one of the most important diseases affecting this crop worldwide. This work presents the evaluation of the capacity of Streptomyces griseus H7602 to protect pepper plants against Phytophthora capsici and establishes its role as a biocontrol agent. In this study, we isolated an actinomycete strain H7602 from rhizosphere soil, identified it as Streptomyces griseus by 16S rRNA analysis and demonstrated its antifungal activity against various plant pathogens including P. capsici. H7602 produced lytic emzymes such as chitinase, ${\beta}$-1,3-glucanase, lipase and protease. In addition, crude extract from H7602 also exhibited destructive activity toward P. capsici hyphae. In the pot trial, results showed the protective effect of H7602 against pepper from P. capsici. Application of H7602 culture suspension reduced 47.35% of root mortality and enhanced growth of pepper plants for 56.37% in fresh root and 17.56% g in fresh shoot as compared to control, resulting in greater protection to pepper plants against P. capsici infestation. Additionally, the enzymatic activities, chitinase and ${\beta}$-1,3-glucanase, were higher in rhizosphere soil and roots of pepper plants treated with H7602 than other treated plants. Therefore, our results indicated a clear potential of S. griseus H7602 to be used for biocontrol of root rot disease caused by P. capsici in pepper.
Zymolyase 조효소로부터 분리, 정제되었고, 효모세포벽 용해 촉진물질로 밝혀진 바 있는 Arthrobacter luteus로부터 유래한 염기성 protease(AL-protease)의 효소학적 성질 및 활성 아미노산 잔기를 검색한 결과는 다음과 같다. 1. AL-pretense는 저해제 DFP 및 PMSF에 의해서 그 Protease 활성 및 용해 촉진활성이 동시에 완전히 소멸 되었으며, 그 저해 반응속도는 chymotrypsin에 대한 것에 비하여 대단히 완만하였다. 1.반응에서 AL-protease와 DFP의 결합 mole비는 1:1로 추정 되었다. 2. 정제된 AL-protease의 동결건조품 중에는 종래효모세포벽 용해반응에 관여하는 것으로 알려진 yeast phosphomannase를 비롯한 다당류 가수분해효소들의 활성은 그 어느 것도 인정되지 않았다. 3. AL-protease의 casein에 대한 최적 pH 및 최적 온도는 pH 10.5와 $65^{\circ}C$이었고, 그 활성은 pH 5${\sim}$11 사이와 $65^{\circ}C$이하에서 안정하였다. 또한, AL-Protease의 활성에 미치는 여러가지 금속이온의 영향은 인정되지 않았다. 4. [$^{32}P$]-DFP에 의하여 화학수식된 [$^{32}P$]-DIP-AL-protease에 대한 활성부위의 아미노산 잔기를 검색, 동정하기 위하여 조제용 PAG-전기영동, SDS-PAG-전기영동, Dowex 이온교환 크로마토그래피 및 고압 여지 전기영동을 실시하였고, 그 결과, AL-protease는 활성 부위에 1분자당 1 mole의 serine 잔기를 가지는 염기성 protease로 밝혀졌다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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