본 연구는 글라디올러스 캘러스로부터의 재분화 조건을 구명함으로써 캘러스 배양시스템을 확립하는데 기여하고자 하였다. 글라디올러스 캘러스로부터의 유식물체 획득은 캘러스를 2,4-D 무첨가 1/2 MS고체배지에 치상한 후 24시간 일장하에서 15$^{\circ}C$로 배양하였을 때 효과적이었다. 캘러스로부터의 기관형성에 미치는 배양방법의 영향을 검토한 결과, 부정근의 형성은 액체진탕배양이 그리고 부정아의 형성은 액채정치배양이 각각 우수한 것으로 확인되었다. 본 실험의 결과를 통해 글라디올러스 ‘Topaz' 캘러스로부터의 재분화를 위한 최적 배양 조건을 선발하는 한편, 액체진탕배양법에 의해 기관-캘러스 혼합체를 유도할 수 있었으며, 이를 이용하여 기내 유식물체를 대량생산할 수 있는 가능성을 확인할 수 있었다.
갈색부후균 Tyromyces palustris를 이용하여 CCA, CCFZ처리 목재에서 구리를 제거하였다. 균에 의한 구리의 제거효율을 높이기 위한 전처리 방법으로서 증기압처리와 수산처리를 검토하였으며, 적정 배양 방법을 찾기 위하여 진탕배양, 고체배양, 정치배양에서 구리 제거율을 비교하였다. 전처리 방법에서, 증기압 처리만으로는 효과적인 구리제거가 불가능하였으며, 수산처리는 구리제거율은 낮았으나 수산처리 후 균처리를 하면 제거율이 향상되었다. 배양 방법에서는 정치 배양의 구리 제거효율이 높게 나타났다. 대량 배양을 위한 공기부양식 생물반응기에 의한 구리의 제거율은 7일 배양 이후 61%의 제거율을 보였다. T. palustris에 의한 구리제거기작을 탐색하기 위하여 배양액 중에 생성된 물질을 LC/Mass 분석 결과 T. palustris에서 분비되어진 수산과 방부처리 목재 중의 구리가 결합된 수산구리 착염체의 형성이 배양액 중에 존재함이 확인됨으로 균체 외 수산의 작용이 처리재의 구리제거에 크게 관여함이 밝혀졌다.
Various parameters such as solvent selection, concentration, solid/liquid ratio, soaking time, temperature, stationary, shaking conditions, and repeated extractions were investigated in order to determine the optimum extraction conditions of ${\beta}$-glucosidase from bagasse fermented by mixed culture of Aspergillus niger NRC 7A and Aspergillus oryzae NRRL 447. Among various solvents tested, non ionic detergents gave the best results than the inorganic or organic salt solutions and distilled water. The optimum conditions for extraction of ${\beta}$-glucosidase were 30 min soaking time at $40^{\circ}C$ under shaking condition at 150 rpm, with solid/liquid ratio 1:15 (w/v), which yielded $2882.74{\pm}95.52U/g$ fermented culture (g fc) of enzyme activity. With repeated washes under the above optimum conditions, the results showed that enzyme extracted in the $1^{st}$ and $2^{nd}$ washes represents about 90% of the total activity.
In order to clarify the best cultural conditions of Rhizopus niveus the effects of aeration, pH and various nutrients, such as different carbon and nitrogen sources, vitamins, and growth substances, on the mycelial growth were studied through liquid culture, and amylase activities of the fungus at different cultural periods were measured. Soluble starch, xylose and galactose are excellent sources of carbon for growth of the fungus. Sorbose and lactose are utilized slightly for growth. peptone, ammonium sulfate and alanine are excellent nitrogen sources for growth, tyrptophane nad potassium nitrate are utilized slightly for growth and sodium nitrite is not utilized. Thiamine nad gibberellin are excellent growth substances for the fungal growth, and biotin, nicotinamide and indole acetic acid (IAA) are also effective. Rhizopus niveus grows better at rotatory culture than at stationary culture and earlier growth of the fungus increases remarkably at rotatory culture. Optimum pH than at pH3. Growth increases linerly with an increase of soluble starch content up to 100g per liter medium, but 5 grams of ammonium sulfate per liter is the optimum nitrogen concentration for growth, if Pfeffer's medium is employed. Amylase activities of Rhizopus at different cultural periods showed that the maximum amylase production takes place after the cell population has reached its peak in the culture. Dextrinogenic amylase production has reached maximum at stationary phase, and maximum saccharogenic maylase production takes place in the pahse of negative gorwth acceleration.
The effect of nutrient nitrogen on the degradation of pentachlorophenol (PCP) by Phanerochaete chrysosporium in a liquid culture was investigated. PCP disappeared at almost the same rate in both nutrient nitrogen-sufficient (NS) and -limited (NL) sttionary cultures. However, more pentachloroanisole (PCA) was accumulated in the NS culture than in the NL culture. The effect of nitrogen on the degradation of PCA was also tested in both cultures. PCA disappeared faster in the NL culture than in the NS culture, indicating that the lower accumulation of PCA during the degradation of PCP in the NL culture was due to the faster degradation of PCA in the NL culture than in the NS culture. In another experiment, PCA was added to shaking cultures rather than stationary cultures to search for any other metabolite(s). While no other metabolite but PCA was found in the NS stationary culture, 2,4,5,6-tetrachloro-2,5-cyclohexadiene-1,4-dione(TCHD) was found as the only indentifiable product in the NL shaking culture. Thus, PCP would appear to be metabolized to TCHD via PCa or directly oxidized to TCHD by lignin peroxidase. Since all the above results indicate that no innocuous metabolite was formed during the degradation of PCP by the fungus, it is quite feasible to use the fungus in the biotreatment of PCP.
본 연구는 개고사리의 기내 조직배양 시 적정 배지구성 물질과 배양방법을 구명하여 효율적인 대량생산체계를 구축하기 위하여 시행하였다. 개고사리의 엽신, 엽병 및 근경의 절편 중 근경의 절편에서만 포자체가 분화되었다. 근경의 절편으로부터 포자체의 재생을 촉진시키기 위해서는 1/2MS 배지가 가장 적합하였으며, 배지 내 sucrose는 1%, $NaH_2PO_4$는 50 $mg{\cdot}L^{-1}$으로 첨가하는 것이 가장 효과적이었다. 생장조절물질은 BA보다 kinetine을 첨가하는 것이 포자체의 분화를 촉진하는데 적합하였으며, kinetin 2 ${\mu}M$와 IBA 5 ${\mu}M$를 혼용하여 첨가하는 것이 근경의 절편으로부터 포자체를 형성하는데 가장 효과적이었다. 포자체 형성에 가장 효과적인 것으로 나타난 변형 1/2MS배지(sucrose는 1%, $NaH_2PO_4$는 50 $mg{\cdot}L^{-1}$, kinetin 2 ${\mu}M$와 IBA 5 ${\mu}M$, pH 5.8)에 활성탄을 0 또는 0.1% 첨가하여 고체 또는 액체배지에서 배양한 결과, 개고사리 근경의 절편은 고체배지에서 포자체의 재생 및 생육이 가장 우수하였다. 배지에 활성탄을 첨가하는 것은 고체, 액체 정치 및 액체 현탁배양 모두에서 근경절편의 포자체 분화를 억제하였다.
The effect of cadmium ions on ligninolytic and decolourizing activities in cultures of two white-rot fungi, Cerrena unicolor and Trametes versicolor, were examined. Cadmium was added to the shallow stationary cultures growing on a liquid mineral medium. Both examined strains sorbed Cd ions in the first 24 hr of incubation. An appreciable stimulation of the activity of extracellular laccase (LAC) and inhibition of the extracellular manganese-dependent peroxidase (MnP) were simultaneously observed when 25 mgL-1 and 50 mgL-1 of cadmium ions were added to the cultures. On the other hand, the addition of cadmium ions also resulted in stimulating the decolorization activity of C. unicolor to decolorize Remazol Brilliant Blue R (RBBR) in the cultures, but decreasing it in the culture of T. versicolor, which is compared to the inhibition of MnP activity in this fungus. Our data indicate that the presence of Cd(II) ions can affect the ligninolytic activity of white-rot fungi. It was found that C. unicolor is a strain resistant to the presence of Cd ions in the liquid culture media, and has a potential to use this strain for bioremediation of sites contaminated with both heavy metals and aromatic pollutants.
송이(Tricholoma matsutake)균을 고체배양과 액체배양에서 균사 생장의 적합한 조건을 구명함으로 앞으로 송이균을 대량 배양하여 접종함으로 송이를 생산할 수 있는 가능성을 얻기 위하여 본 연구를 실시하였다. 송이균은 고체배지의 경우 HA, TMM 배지에서 생장이 양호하였으며, 액체배지의 경우 PDB, TMM 배지에서 균사의 생장이 우수하게 나타났다. 온도에서는 $25^{\circ}C$에서 균사의 생장이 가장 효과적이었다. 송이균이 잘 생장하는 탄소원은 다당류인 Dextrin이고 질소원은 Yeast extract와 Peptone이고 $Fe_{2}(SO_{4})_{3}{\cdot}H_{2}O$와 KCl이었다. 액체배양에서는 균사의 생장은 플라스크 배양에서 진탕배양에서 정치배양보다 $2{\sim}7$배 정도의 균사의 생장이 좋았으며, 100 ml 가장 양호하였다. 균사의 절편을 삼각플라스크에 $6{\sim}7$개 넣어서 배양하는 것이 양호하였으며 배양기간은 접종 후 4주에서부터 균사의 생장과 펠릿의 분화가 나타나기 시작하여 9주까지 활발하게 생장하였다. 대량배양에서 균사생장이 양호한 배지로는 감자추출배지이었으며 8리터 병에 200 ml 접종량을 넣고 8주간 배양하면 송이의 균사체량이 가장 많이 얻을 수 있었다.
Lactic acid bacteria were isolated from silage, which produce high level of hydrogen peroxide in cell culture supernatant. The 16S rDNA sequences of the isolate matched perfectly with that of Lactobacillus fermentum (99.9%), examined by a 16S rDNA gene sequence analysis and similarity search using the GenBank database, thus named L. fermentum CS12-1. L. fermentum CS12-1 showed resistance to low pH and bile acid. The production of hydrogen peroxide by L. fermentum CS12-1 was confirmed by catalase treatment and high-performance liquid chromatography. L. fermentum CS12-1 accumulated hydrogen peroxide in culture broth as cells grew, and the highest concentration of hydrogen peroxide reached 3.5 mM at the late stationary growth phase. The cell-free supernatant of L. fermentum CS12-1 both before and after neutralization inhibited the growth of enterotoxigenic Escherichia coli K88 that causes diarrhea in piglets.
본 연구는 청나래고사리의 기내 포자체 유묘를 이용한 효율적인 대량생산 방법을 개발하기 위하여 시행되었다. 유묘의 엽신, 엽병, 근경을 곱게 다져 활성탄 0.1%를 첨가한 1/2MS배지에 배양한 결과, 근경의 절편에서만 포자체 유묘가 생산되었다. 곱게 다진 근경 절편은 1/2MS 배지에서 포자체 재생이 가장 왕성하였으며, sucrose 농도를 2%로 조절하고 $NaH_2PO_4$$50mgL^{-1}$을 첨가할 경우 포자체 재생이 더욱 촉진되었다. Kinetin과 BA를 단용 또는 NAA, IBA와 각각 혼용하여 배양한 결과, kinetin $1{\mu}M$ 단용 처리구에서 포자체 재생이 가장 왕성하였다. BA 첨가구에서는 분열조직의 증식이 왕성하였으나. 분열조직이 포자체로 분화되지 못하는 특징을 보였다. 변형 1/2MS 배지(sucrose 2%, $NaH_2PO_4$$50mgL^{-1}$, kinetin $1{\mu}M$, pH 5.8, agar 0.8%)에 활성탄 0 또는 0.1%를 첨가하여 고체, 액체 정체, 액체 진탕배양한 결과, 포자체 재생은 액체 진탕배양시 가장 왕성하였으며, 활성탄의 첨가는 포자체 재생을 촉진하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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