A new method for antimicrobial susceptibility testing of vitro-cultured bacteria on an ordinary fluorescence spectrometer was developed. The viable bacteria reduced 3-(4,5 dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT) to produce insoluble particles that displayed intense resonance scattering light. The assay showed a linear relationship between the number of viable bacteria and the intensity of resonance scattering light. Dead bacteria were unable to reduce MTT. Methicillin-resistant Staphylococcus aureus exposed to flavonoids from Marchantia convoluta showed a flavonoids concentration-dependent inhibition of the ability to reduce MTT. In the assay, less than 12 h was required to attain susceptibility results and fewer bacteria were utilized than in traditional methods. The RLS technique could, in combination with the MTT assay, be a rapid and sensitive measuring method to determine the in vitro activity of new antimicrobials.
Kim, Kyeong-Ho;Kim, Hyun-Ju;Hong, Seon-Pyo;Shin, Sang-Deok
Archives of Pharmacal Research
/
제23권5호
/
pp.441-445
/
2000
Achiral-chiral column switching HPLC assay was developed to allow the separation and quantification of the enantiomers of terbutaline in human plasma by means of fluorescence detection. Plasma samples were prepared by solid-phase extraction with sep-pak silica, followed by HPLC assay. The enantiomers of terbutaline and the internal standard were separated from the biological matrix on a silica column, and the two enantiomers were resolved and quantified on a Sumichiral OA-4900 column. The two columns were connected by a switching valve equipped with silica trap column, The trap column was used to concentrate the terbutaline in the eluent from the achiral column before back flushing onto the chiral phase. For each enantiomers, the assay was linear between 2.5-125 ng/$m\ell$ (r=0.9999) and detection limit was 1.0 ng/$m\ell$ .
이 연구의 목적은 물-오일 계면에서 특이적인 lipase 활성을 측정할 수 있는 high-throughput assay 방법을 확립하는 것이다. 이 방법은 pH에 따라 형광의 세기가 변하는 fluorescein의 특성을 이용하여 lipase의 작용으로 방출되는 지방산으로 인한 pH 변화를 fluorescein의 형광 변화로 측정하도록 되어 있다. 활성의 측정은 오일 에멀션과 fluorescein 그리고 효소를 포함하는 반응 용액을 반응시키면서 일정한 간격으로 형광을 측정함으로써 이루어진다. 이 방법을 통해 형광의 세기가 효소의 양에 비례하는 속도로 감소하는 것을 관찰할 수 있었으며 시간에 따른 형광 변화 그래프로부터 계산한 반응 속도가 효소의 양에 선형으로 비례한다는 것을 확인할 수 있었다. 또 한 가지 중요한 사실은 assay를 하는데 있어서 pH 6.0-8.0의 범위에서 다른 pH 조건을 사용할 수 있었다는 점이다.
A sandwich-type enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the quantification of human apolipoprotein A-I (apoA-I) was developed using monoclonal antibodies. For this assay, we used three monoclonal antibodies to trap and detect apo A-I. HDAI16 and HDA15 monoclonal antibodies were used for trapping apoA-I and HDAI8 monoclonal antibody was for detecting apoA-I. These three monoclonal antibodies were produced by immunizing mice with high density lipoprotein (HDL) isolated from human plasma. By immunoblot analysis, these three monoclonal antibodies were specific to apoA-I and showed no cross-reactivities with other plasma proteins. The results of competition assays for epitope cross-reactivity test also verified that these monoclonal antibodies identified separate and distinct epitopes on HDL and apoA-I. Affinity constants of monoclonal antibodies were measured by ELISA. Their association constants ranged from $10^7$ to $10^8$$M^{-1}$. For this assay, pure apoA-I was isolated by affinity chromatography using monoclonal antibodies. In this sandwich assay, the amount of HRP-labeled HDAI8 bound to apoA-I trapped by HDAI16 and HDAI5 was proportional to apoA-I concentration in the range of 0 to 500ng/ml. ApoA-I concentration in plasma was calculated from the linear regression equation of standard curve. The precision and reliability of the assays are reflected in the low intra-and interassay coefficients of variation that averaged 3.25% and 4.30%, respectively. This assay is sensitive, simple, reproducible, convenient in incubation interval, and does not use radioisotope: thus it can be widely applied in clinical laboratories.
Among semi-quantitative or fully quantitative lateral flow assay readers, an image sensor-based instrument has been widely used because of its simple setup, cheap sensor price, and compact equipment size. For all previous approaches, monochrome CCD or CMOS cameras were used for lateral flow assay imaging in which the overall intensities of all colors were taken into consideration to estimate the analyte content, although the analyte related color information is only limited to a narrow wavelength range. In the present work, we introduced a color CCD camera as a sensor and a color decomposition method to improve the sensitivity of the quantitative biosensor system which utilizes the lateral flow assay successfully. The proposed setup and image processing method were applied to achieve the quantification of imitatively dispensed particles on the surface of a porous membrane first, and the measurement result was then compared with that using a monochrome CCD. The compensation method was proposed in different illumination conditions. Eventually, the color decomposition method was introduced to the commercially available lateral flow immunochromatographic assay for the diagnosis of myocardial infarction. The measurement sensitivity utilizing the color image sensor is significantly improved since the slopes of the linear curve fit are enhanced from 0.0026 to 0.0040 and from 0.0802 to 0.1141 for myoglobin and creatine kinase (CK)-MB detection, respectively.
A new assay method for delta-l-dehydrogenated-3-ketoco-rticosteroid in the presence of proteinous material or whole-cell-enzyme and 3-ketocorticosteroid has been developed. This method makes use of the linear relationship between the ratio of absorbances at 265 nm and at 242 nm and the fractional concentration of delta-1-3-ketosteroid. Theoretical values were calculated based on the absorbances of proteinous material at fixed concentrations of the 3-ketosteroid and delta-1-dehydrogenated-3-ketosteroid. The values obtained experimentally showed good agreement with the values obtained experimentally showed good agreement with the values theoretically predicted. The new assay method developed for the steroid mixtiure containing proteinous material is of some practical importance. The use of such assay method enables one to determine the enzyme activity and the rate of enzyme reaction or conversion rather quickly, easily and accurately. By the use of this assay method, the reaction kinetics of whole-cell-enzyme has also been studied. It was found that it followed the simple Michaelis-Menten type enzyme kinetics. Also the reversibility of this reaction with actively metabolizing cell was examined. It was found that delta-l-dehydrogenated-3-ketosteroid could not be hydrogenated reversibly to 3-ketosteroid by this enzyme system.
The suitability of the single cell gel electrophoresis (SCGE) assay as a test for the monitoring of genotoxicity of aquatic environment was evaluated. The SCGE assay was employed to detect DNA damage induced in clam (Spisula sachalinensis) exposed to a direct mutagen, N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG) or an indirect mutagen, benzo[a]pyrene (B[a]P). The cells of gill and digestive glands were isolated from clam by homogenization, which was the optimized cell dissociation method, and the level of DNA damage was assessed and expressed as mean tail length. In the gill cells, significant dose- and time-dependent increase was observed in the mean tail length at the concentration from 0.01 to 0.5 ppm MNNG for 96 h. The linear correlation between relative dam-age index (RDI) values was suggested to provide criteria of genotoxicity monitoring for direct acting mutagen. The dose- and time-dependent responses of the digestive glands cells were less sensitive than those of the gill cells. In contrast, the genotoxic response resulting from the exposure of 0.01~1.0 ppm B[a]P to clam revealed a higher sensitivity in the digestive glands cells than the gill cells. The comparison between the time profiles of genotoxic responses in clam and carp, the latter had been obtained in our previous study, indicated that the metabolism of genotoxic compounds in the two aquatic organisms were quite different each other. We conclude that the SCGE assay has the potential as a screening test for routine genotoxicity monitoring of aquatic organisms because of its higher sensitivity and simplicity.
Among short-term in vitro genotoxicity assays, micronucleus assays are rapid, inexpensive, and less labor-intensive system. We have undertaken a comparative study of sensitivity of cigarette smoke condensate(CSC) by general micronucleus(MN) assay and cytokinesis-block micronucleus(CBMN) assay. In this study, V79 Chinese hamster cells were employed to evaluate and compare the genotoxicity of CSC of Kentucky Reference Cigarette 2R4F by 2 kinds of in vitro MN assay methods. To determine the optimum concentration of cytochalasin B(CYB) to obtain the maximal number of binucleated cells for CBMN assay, triplicate cultures of growing cells were treated with CYB for 15 h. CYB treatments caused a concentration-dependent increase in cytotoxicity($1\~4{\mu}g/mL$) and proportion($0.25\~1\;{\mu}g/mL$) of binucleated cells. These data suggested that 1 ug/mL of CYB is as an optimum dose for CBMN assay in binucleated V79 cells. Short treatment(4 h) of CSC induced a micronucleated cells with a concentration-dependent response in the presence or absence of CYB, but CSC-induced MNs were weakened when S9 was present. Long treatments(19 h) of CSC also induced a significant increase MN formation with a concentration-dependent response. At a concentration of 75 ${mu}g/mL$, the MN cell frequencies of general MN assay and CBMN assay were $6.5\%\;and\;11.7\%$, respectively. Linear regression analysis revealed a good correlation in CBMN assay between a concentration of CSC and MN cell frequency. All these data indicated that CBMN assay is more sensitive to the induction CSC-induced MN than general MN assay.
The MTT assay is one of superior evaluation methods widely used to analyze the viability of metabolically active cell. It can be used to determine the percentage of viable sperm through measurement of the reduction of MTT granules at mitochondria in sperm tail. The purpose of this study is to determine the optimal condition of a simple and easy MTT assay to validate boar sperm viability and compare the accuracy of this test with microscopic examination. The MTT reduction rate for sperm viability were analyzed in microtiter plates (96 well) from 1 hr to 5 hr incubation periods at $37^{\circ}C$ using spectrophotometer (microplate reader) at 550 nm wavelength. The remainder of semen sample was simultaneously examined to compare the correlation of accuracy between MTT assay and other sperm parameters. Those sperm parameters were included the motility, survival rates, membrane integrity, mitochondria activity and acrosome integrity. The OD values of MTT assay (MTT reduction rates) did not greatly change at 1 hr to 5 hr incubation periods in different proportion of live and freeze-killed sperms (dead sperm). The MTT reduction rates or survival rates were decreased according to the different concentration of live and dead sperm. The linear regression at 1 hr and 4 hr incubation periods in sperm MTT assay was y=291.55x-72.176 and y= 180.64x-44.569, respectively. There are high correlation between 1 hr and 4 hr incubation periods (p<0.001). The results of MTT assay and other sperm parameters has a positive correlation (p<0.01 or 0.05). The correlation coefficients for MTT assay was 0.88115 for motility, 0.89868 for survival rates, 0.91722 for membrane integrity and 0.77372 for acrosome integrity, respectively. In conclusion, the MTT assay can be used as a reliable and efficient evaluation method for boar sperm viability. It can be use practical means to evaluate the quality of boar sperm by a fast, inexpensive and easy method.
To evaluate the antitumor activity, antimetastatic and radioprotective effects of Kamisasammaekmundongtang(KSMT), studies were done experimentally. The results were obtained as follows: 1. In cytotoxicity against P388, A549 and B16-F10, KSMT was not showed satisfiable cytotoxicity as compared with control. 2. In Inhibitory effect on activity of DNA topoisomerase I, KSMT has strong inhibitory effect. 3. The inhibitory effect on adhesion of A549 to complex extracellular matrix was significantly increased at 0.5mg/ml, 1mg/ml of KSMT. 4. The T/C% was 122 in KSMT treated group in S-180 bearing ICR mice. 5. In antiangiogenetic effect on CAM assay, inhibitory rate was 33% in KSMT treated group. 6. In pulmonary colonization assay, a number of colonies in the lungs were decreased significantly in KSMT treated group as compared with control group. 7. By FACS analysis of splenic leukocyte after exposure to radiation by linear accelerator, T-helper cell, B cell and macrophage in KSMT treated group were significantly increased while splenocytes were decreased in control group. 8. In histological changes of jejunum of $Bald{\setminus}C$ mice after exposure to radiation by linear accelerator, exclusion and fusion of villi were decreased as compared with control group. But in duodenum and ileum, exclusion and fusion of villi were not decreased as compared with control group. 9. WBC, PLT were increased in KSMT treated group as compared with control group after exposure to radiation by linear accelerator, but the increasing effect was not significant. Above results suggest that KSMT may be useful in prevention of cancer metastasis and protection from damage by radiotherapy. But the further study of KSMT would be demanded.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.