• 한국발생생물학회지:발생과생식
• /
• 제14권4호
• /
• pp.297-306
• /
• 2010

내분비교란물질로 알려진 Tributyltin(TBT)는 흰쥐 정소 내 생식세포와 간질세포의 세포자연사를 일으켜 정소의 기능을 감소시키는 것으로 보고되고 있으나, 그 기전은 명확히 밝혀져 있지 않다. 따라서 본 연구에서는 정소 내 간질세포를 표적으로 TBT에 의해 지방세포로 분화가 유도되는 지를 확인하고, 이로 인한 정소 내 세포자연사와의 연관성을 알아보고자 하였다. 3주령 된 수컷 흰쥐에 각각 TBT 1 mg과 10 mg/kg/day을 1주일 동안 경구 투여한 후 정소를 분리하여 무게를 측정하였다. 획득된 정소의 일부는 냉동 절편을 만들어 BODIPY로 지방세포를 염색하였고, 일부는 파라핀 절편을 만들어 TUNEL 염색을 수행하였다. 나머지 정소는 정소 백색막을 제거한 후 세정관 사이에 존재하는 간질세포를 분리하였다. 분리된 간질세포에서 total RNA를 추출한 다음 real-time PCR 방법으로 지방세포 유도 유전자들과 세포자연사 관련 유전자들을 분석하였다. 정소의 무게는 대조군에 비교해 TBT 10 mg을 투여한 군에서 유의하게 감소하였다. BODIPY 염색 결과, TBT 10 mg을 투여한 군의 간질세포에서 염색된 세포의 수가 증가하였고, TUNEL 염색 결과에서도 대조군과 비교해 TBT 투여한 군에서 간질세포 내 세포자연사가 증가하는 것을 확인할 수 있었다. Real-time PCR을 이용해 간질세포 내 유전자 발현을 분석한 결과, 투여된 TBT의 농도가 증가할수록 PPAR${\gamma}$, aP2, PLIN, PGAR 등 지방세포 유도 유전자들의 발현이 증가하였고, 이와 함께 TNFRSF1A, TNFSF10과 같은 세포자연사 관련 유전자의 발현도 증가하는 것을 확인할 수 있었다. 이상의 결과에서 환경성 내분비 교란물질로 알려진 TBT에 노출될 경우 정소 내 간질세포의 지방세포로의 분화가 유발되면서 세포자연사가 증가하고, 이에 따른 정소 기능의 저하를 야기시킬 수 있는 것으로 사료된다.

• Toxicological Research
• /
• 제14권2호
• /
• pp.143-149
• /
• 1998

This study was carried out to evaluate the testicular toxicity of 2-bromopropane (2-BP), which recently caused occupational intoxication on the reproductive and hematopoietic system in Koreans, using light microscopy, immunohistochemistry and flow cytometry. 10 weeks old male Sprague-Dawley (SD) rats were treated with 0.5 g/㎏/day of 2-BP orally for 8 consecutive weeks. The testes of the rats were vascularly perfused with Karnovsky's solution or immersed in Bouin's solution, embedded in plastic and evaluated with light microscopy. And relative proportions of haploid, diploid, and tetra-ploid states of DNA ploidy in the testicular cell suspensions of the SD rats were examined by flow cytometry. 2-BP induced severe testicular atrophy, depletion and degeneration of spermatogonia, spermatocytes, and spermatids and mild hyperplasia of Leydig cells without significant morphological changes. The Leydig cell hyperplasia was confirmed by immunohistochemistry using proliferating cell nuclear antigen (PCNA). The immunopositive cells against PCNA were observed in the nuclei oj some interstitial cells. Relative proportions of haploid states of DNA ploidy decreased in the atrophic testicular cell suspensions comparing with those of the control. In conclusion, 2-BP induced testicular atrophy with Leydig cell hyperplasia as examined by histopathology, immunohistochemistry and DNA flow cytometry.

• 대한한방부인과학회지
• /
• 제32권1호
• /
• pp.1-14
• /
• 2019

Objectives: This study was designed to investigate the effect of Bombycis corpus on reproductive dysfunction caused by aging. Methods: The experimental group was divided into three groups: a control group consisting of 8-week-old male ICR mice without any treatment, An aging-elicited group (AE group) consisting of 50-week-old ICR male mice without any treatment, and a Bombycis corpus treatment group (BC group) consisting of 50-week-old ICR male mice with treatment Bombycis corpus extract (0.78 g/kg/day) for 6 months. After 6 months, histochemistry and immunohistochemistry of the testis were performed to investigate the effects of Bombycis corpus on the reproductive dysfunction caused by aging. Results: In the first step, Bombycis corpus increased spermatogenesis and distribution of sertoli cells in the seminiferous tubule, increased BrdU positive reaction in the spermatogonium at the basal part of the seminiferous tubule, and decreased the apoptosis of Sertoli cells in the seminiferous tubule. In addition, Bombycis corpus increased AR positive in Sertoli cells and $17{\beta}-HSD$ positive in leydig cells. Finally, Bombycis corpus decreased 8-OHdG positivite reaction in the spermatids of the seminiferous lumen, caspase-3 positivity in leydig cells, and HDAC1 positivite reaction in sertoli cells. Conclusions: These results suggest that Bombycis corpus increases spermatogenesis, decreases apoptosis of leydig cells and Sertoli cells, increases the production and action of testosterone in the testis, and inhibits DNA damages and DNA transcripts decrease in the testis, Thereby improving reproductive dysfunction caused by aging.

• Korean Journal of Acupuncture
• /
• 제20권1호
• /
• pp.57-64
• /
• 2003

목적: 오가피가 mouse testis에서 유래된 Leydig 세포주에서 에탄올에 의해 유발된 아폽토시스에 미치는 영향을 조사하였다. 방법: TM3 세포주에서의 아폽토시스 변화를 관찰하기 위해서 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay, 4,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI), DNA fragmentation assay, 및 reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) 방법을 이용하였다. 결과: MTT assay를 이용하여 분석한 결과 농도에 따른 세포독성의 효과가 에탄올 투여부터 관찰되었다. 또한 오가피로 전처치하고 에탄올을 처치하였을 때 세포독성이 크게 감소되었다. DAPI staining에서 오가피 투여군은 에탄올 투여군에 비해서 fragmentation이 억제되었다. RT-PCR의 분석에 의하여 caspase-3 mRNA 발현이 오가피 투여군은 알코올 투여군보다 유의성있게 억제됨을 보여주었다. 결론: TM3 Leydig 세포주에서 에탄올에 의해 유발된 아폽토시스는 전형적인 세포사멸 형태를 나타내었다. 반면에 오가피 투여군은 에탄올에 의해서 유발된 아폽토시스에서 세포보호 효과가 있음이 확인되었다.

• 한국가금학회지
• /
• 제32권2호
• /
• pp.125-133
• /
• 2005

한국재래 닭에서 고환 지지세포와 간질세포의 발달유형을 명확하게 이해하기 위하여 부화 후 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 21, 28, 32, 44, 52 및 64주령(n:13마리/일령)의 한국재래 닭을 이용하여 이 연구를 수행하였다. 한국재래 닭의 고환은 $2.5\%$ glutaraldehyde를 이용하여 전신 관류 고정하고 조직 처리과정을 거쳐 Epon-araldite에 포매하였다. 초박절편기를 사용하여 $1{\mu}m$로 절편한 다음 methylene blue로 염색하여 형태 계측을 하였다. 부화후 1주령의 한국재래 닭 고환의 평균용적은 $0.148\;cm^3$이었고 점진적으로 증가하여 21주령에는 $3.93\;cm^3$이고 21주령부터 64주령까지는 변화가 없었다. 곱슬정세관의 용적 치밀도는 1주령에 $32.6\%$이었으나 점차적으로 증가하여 64주령에서는 92.89이었다. 1주령의 한국재래 닭에서 고환 간질조직은 고환실질의 $67.4\%$를 나타내었고 이러한 비율은 성장하는 동안에 점차적으로 감소하여 64주령에 $7.11\%$를 나타내었다. 간질세포의 용적 치밀도는 1주령부터 14주령까지 단계적으로 감소하였고 이후에는 변화가 관찰되지 않았다. 이와는 다르게 지지세포의 용적 치밀도는 1주령에 $3.4\%$를 차지하고 있었고 점진적으로 증가하여 18주령에 $10.79\%$이었으며 이후에는 변화가 없었다. 고환조직내 지지세포와 간질세포의 절대용적은 일령에 1주령부터 24주령까지는 유의성 있게 증가하였으나 24주령부터 64주령까지는 차이가 없었다. 고환조직당 간질세포의 총 숫자는 1주령부터 21주령까지는 유의성 있게 증가하였으나 그 이후에는 변화가 없었고 지지세포의 숫자는 1주령부터 14주령까지 점진적으로 증가하였고 그 이후의 주령에서는 변화가 없었다.

• 대한임상검사과학회지
• /
• 제41권3호
• /
• pp.111-122
• /
• 2009

Cadmium (Cd) is known to exert gonadotoxic and spermiotoxic effects. The present study was performed to investigate the morphological effects and metallothionein (MT) expression by zinc pretreatment in the course of time of cadmium-induced testicular injury in rat. Fifty male Spraque-Dawley rats weighing 160~180 g were divided into two groups : saline-pretreated cadmium group and zinc-pretreated cadmium group. Rats of two groups received subcutaneous injection of saline and 100 mg/kg $ZnSO_4$ at 0, 2, 5 and 8 hrs intervals respectively. Cadmium chloride (4.5 mg/kg $CdCl_2$) was administrated intraperitoneally at 2 hrs after zinc injection and rats were killed 0, 12, 24, 48 and 72 hrs later. Testicular tissue damages, interstitial (Leydig) cells status and MT expression were determined using hematoxylin-eosin stained sections and a computerized image analysis system on sections immunostained with a mouse anti-metallothionein respectively. Zinc pretreatment was significantly reduced testicular damages in five pathological categories after cadmium administation. The number of surviving interstitial cells was significantly higher in the zinc-pretreated group than in the saline-preatreated group at 48 and 72 hrs after cadmium administration. Non-damaged testis showed the positivity of MT staining in spermatogenic cells, Sertoli cells and endothelium of blood vessel, but not in the Leydig cells. The positivity of MT staining in saline-pretreated group was significantly reduced at 24 hrs after cadmium administration, whereas zinc-pretreated group showed strong MT positive staining similar to the 0 hr by 42 hrs after cadmium administration. In damaged testis, MT positive staining was also observed in the Leydig cells of both groups. These results suggest that a major preventive effect of zinc against cadmium-induced testicular toxicity may be due to its ability to reduce the cytotoxicity of cadmium in spermatogenic cells and Leydig cells by inhibiting the susceptibility of the testis to cadmium but not MT production by cadmium.

• 대한임상검사과학회지
• /
• 제42권3호
• /
• pp.136-148
• /
• 2010

Cadmium (Cd) is known to exert gonadotoxic and spermiotoxic effects. The present study was performed to investigate the morphological effects and metallothionein (MT) expression by zinc pretreatment in the course of time of cadmium-induced testicular injury in rat. Fifty male Spraque-Dawley rats weighing 160-180 g were divided into two groups: saline-pretreated cadmium group and zinc-pretreated cadmium group. Rats of two groups received subcutaneous injection of saline and 100 mg/kg $ZnSO_4$ at 0, 2, 5 and 8 hrs intervals respectively. Cadmium chloride (4.5 mg/kg $CdCl_2$) was administrated intraperitoneally at 2 hr after zinc injection and rats were killed 0, 12, 24, 48 and 72 hrs later. Testicular tissue damages, Interstitial (Leydig) cells status and MT expression were determined using hematoxylin-eosin stained sections and a computerized image analysis system on sections immunostained with a mouse anti-metallothionein respectively. Zinc pretreatment was significantly reduced testicular damages in five pathological categories after cadmium administation. The number of surviving interstitial cells was significantly higher in the zinc-pretreated group than in the saline-preatreated group at 48 and 72 hrs after cadmium administration. Non-damaged testis showed the positivity of MT staining in spermatogenic cells, Sertoli cells and endothelium of blood vessel, but not in the Leydig cells. The potitivity of MT staining in saline-pretreated group was significantly reduced at 24 hrs after cadmium administration, whereas zinc-pretreated group showed strong MT positive staining similar to the 0 hr by 42 hrs after cadmium administration. In damaged testis, MT positive staining was also observed in the Leydig cells of both groups. These results suggest a major preventive effect of zinc against cadmium-induced testiculat toxicity may be due to its ability to reduce the cytotoxicity of cadmium in spermatogenic cells and Leydig cells by inhibiting the susceptibility of the testis to cadmium but not MT production by cadmium.

• 한국수정란이식학회지
• /
• 제19권2호
• /
• pp.75-80
• /
• 2004

Nicotine(2~15mg/kg 2주간, 100mg/kg 회 투여)을 생후 4개월령 수컷 생쥐에 투여한 후, 고환에 미치는 광학현미경적 소견은 다음과 같다. 1. Nicotine 2mg/kg 투여군에서는 정세관과 정세관 주위의 Leydig 세포도 핵과 세포질이 뚜렷한 정상적인 소견을 나타내었으나, 5 mg/kg 투여군에서는 Leydig 세포의 핵과 세포질이 다소 비후되었으며, 염색정도가 약하였다. 2. 10 mg/kg 투여군은 대부분 정세관내의 정자발생의 배열이 불규칙적으로 존재하여, 정세관의 단계를 구분할 수 없었고, Leydig 세포도 핵이 융해되어 관찰되지 않았고, 세포질 역시 불명확하게 나타났다. 3. 15 mg/kg 투여군에서는 정모세포 및 정자세포의 핵과 세포질이 파괴되었으며, 정세관의 내강이 관찰되지 않을 정도로 섬유화된 결합조직이 채워져 있었다.

• 생명과학회지
• /
• 제24권10호
• /
• pp.1039-1045
• /
• 2014

본 연구의 목적은 마우스 레이디히 세포인 mLTC-1 세포에 사람 융모성 성선자극호르몬인 hCG를 처리하여 유도되는 소포체 스트레스가 IRE1/XBP1 경로를 통하는지 분석하는 것 이다. 이전 연구에서 hCG처리에 의해 레이디히 세포는 소포체 스트레스 매개의 세포자멸사가 유도될 뿐만 아니라 ATF6경로를 조절함으로써 UPR이 성호르몬 합성효소의 발현에 중요한 역할을 하는 것을 증명하였다. UPR 경로는 또한 IRE1/XBP1 경로를 통하여 조절되는 것이 알려져 있지만 레이디히 세포에서 hCG에 의한 소포체 스트레스에 의해 IRE1/XBP1 경로의 활성화가 유도되는지에 대해서는 거의 알려져 있지 않다. mLTC-1세포에서 hCG 처리 후 IRE1/XBP1경로의 활성을 조사하기 위하여, 인산화된 IRE1 단백질 확인하기 위한 western blot, XBP1 mRNA splicing 확인하기 위한 RT-PCR을 수행하였다. 또한 우리는 IRE의 활성을 관찰하기 위하여 소포체 스트레스-활성 표지자(ERAI) construct를 이용하고 이를 형광현미경과 flow cytometry를 이용하여 분석하였다. 결과적으로, hCG 처리에 의해 인산화된 IRE1 단백질의 발현 수준이 두드러지게 증가하였다. F-XBP1-venus/F-$XBP1{\Delta}DBD$-venus가 도입된 mLTC-1 세포에서, hCG 처리에 의해 녹색 형광을 띄는 세포들이 유도되었고 각각 핵/세포질에서 발현하는 것을 확인할 수 있었다. 게다가 hCG 처리 후에 XBP1 mRNA의 splicing 또한 상당히 증가되는 것을 확인 할 수 있었다. 이 결과들을 통하여 종합해 볼 때 레이디히 세포에서 hCG 처리에 의해 유도되는 소포체 스트레스가 IRE1/XBP1 경로의 활성을 유발하는 것을 확인 할 수 있었다.

• Molecules and Cells
• /
• 제26권1호
• /
• pp.74-80
• /
• 2008

Bisphenol A bis (2,3-dihydroxypropyl) ether ($BADGE.2H_2O$) is a component of commercial liquid epoxy resins commonly used in the food-packing industry and in dental sealants. There is evidence that it has significant estrogenic activity. Nur77 plays a crucial role in the regulation of certain genes involved in LH-mediated steroidogenesis in testicular Leydig cells. It was previously demonstrated that Bisphenol A (BPA) stimulates Nur77 gene induction and steroidogenesis. In this study, we investigated the effects of $BADGE.2H_2O$ on Nur77 gene expression and steroidogenesis. Northern blot analysis showed that it increased the expression of Nur77 mRNA and protein, and transient transfection assays demonstrated that it increased the promoter activity and transactivation of Nur77. It also increased the expression of certain steroidogenic genes, such as StAR and $3{\beta}$-HSD. Finally, over-expression of a dominant negative Nur77 cDNA via adenoviral infection reduced $BADGE.2H_2O$-mediated progesterone biosynthesis. These results indicate that $BADGE.2H_2O$ disrupts testicular steroidogenesis by increasing Nur77 gene expression.