Pediococcus pentosaceus ID-7 was isolated from kimchi, a Korean fermented food, and it showed high activity for lactose hydrolysis. The ${\beta}$-galactosidase of P. pentosaceus ID-7 belongs to the GH2 group, which is composed of two distinct proteins. The heterodimeric LacLM type of ${\beta}$-galactosidase found in P. pentosaceus ID-7 consists of two genes partially overlapped, lacL and lacM encoding LacL (72.2 kDa) and LacM (35.4 kDa). In this study, Escherichia coli MM294 was used for the production of LacL, LacM, and LacLM. These three types of recombinant proteins were expressed, purified, and characterized. The specific activities of LacLM and LacL were 339 and 31 U/mg, respectively. However, activity was not detected with LacM alone. The optimal pH of LacLM and LacL was pH 7.5 and pH 7.0, and the optimal temperature of LacLM and LacL was $40^{\circ}C$ and $50^{\circ}C$, respectively. The optimal temperature changes indicate that LacLM is able to achieve higher activity at a relatively lower temperature. LacLM was strongly activated by $Mg^{2+}$, $Mn^{2+}$, and $Zn^{2+}$, which was not true for LacL. Consistent with this, EDTA strongly inactivated LacLM and LacL, but the presence of reducing agents did not dramatically alter the activity. Taken together, multiple alignment of amino acid sequences and phylogenetic analysis results of LacL and LacM of P. pentosaceus ID-7 suggest the evolution of LacL into LacLM and that the use of divalent metal ions results in higher activity.
Bahar, Habibullah;Islam, Tarikul;Islam, Monirul;Mannan, Abdul
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제15권1호
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pp.79-82
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2007
Lac is the dermal secretion of lac insect, Kerria lacca Kerr., which is used to make expensive natural dye, burnish, coating materials, in cosmetics and jewelry industry. Though it is very perspective industry and available of host plants over the country especially in southern districts of Bangladesh, lac cultivation is confined within some northern districts of Bangladesh. Experiment was conducted to find out the possibility of lac cultivation in two southwestern districts of Bangladesh: Khulna and Satkhira compared to Chapainowabgonj, the key lac producing district in Bangladesh, during February-October, 2006. The bark thickness, bark weight of ber plant, ratio of harvested and inoculated lac sticks, harvested raw lac, and harvested processed lac were measured and compared. Statistically, similar performance of lac cultivation was found regarding all parameters in three districts. These results recommended that lac cultivation is possible at the south-western coastal part of Bangladesh.
L. casei YIT9018에서 자연적으로 발생하는 Lac$^-$ mutant의 발생빈도와 이러한 변이주의 특성을 검토하였다. 보존균주로부터 spontaneous Lac$^-$ mutant의 발생은 MRS 배지에서 0.5%, 10% 환원탈지유에서 0.29%, pure Lac$^+$ colony로부터의 발생은 MRS 배지에서 0.25%, 10% 환원탈지유에서 0.1%의 빈도로 나타났다. 분리된 spontaneous mutant는 대부분이 Lac$^-$ mutant였고 가끔 Lac-Gal-도 나타났다. Lac$^-$ Gal$^+$ mutant는 배양 4일째부터 partial revertant가 출현하였으나 Lac$^-$ Gal$^-$는 전혀 나타나지 않았으며 Lac$^-$ mutant는 wild type보다 우유를 응고시키는데 더 많은 시간을 요하였다.
여과제균한 배추즙에 김치에서 분리한 7주의 젖산균을 단독 접종하고 1$0^{\circ}C$, 2$0^{\circ}C$, 3$0^{\circ}C$ 및 4$0^{\circ}C$에서 배양하면서 각각의 증식곡선을 작성하고, 이를 이용하여 각 배양온도에서의 유도시간과 세대시간을 구하였다. 3$0^{\circ}C$에서 배양할 때의 유도시간은 Leu. mesenteroides subsp. dextranicum은 168분, Leu. mesenteroides subsp. mesenteroides는 204분, Leu. paramesenteroides는 612분, Lac. bavaricus는 258분, Lac. homohiochii는 228분, Lac. plantarum은 270분 그리고 Lac. brevis는 264분이었고, 세대시간은 Leu. mesenteroides subsp. dextranicum 및 Leu. mesenteroides subsp. mesenteroides는 36분, Lac. bavaricus는 33분, Lac. homohiochii는 39분, Lac. plantarum은 66분, Lac. brevis는 42분 그리고 Leu. paramesenteroides는 162분이었다. 배양온도를 3$0^{\circ}C$에서 1$0^{\circ}C$로 낮출 때 모든 균주들의 유도시간과 세대시간이 크게 연장되었는데, 이러한 연장은 Lac. plantarum에서 더욱 현저하게 나타났다. 1$0^{\circ}C$, 2$0^{\circ}C$ 및 3$0^{\circ}C$에서는 Leu. mesenteroides subsp. mesenteroides의 유도시간과 세대시간이 Lac. plantarum의 그것보다 더 짧았다. 그러나 4$0^{\circ}C$에서는 이러한 양상이 완전히 전도되었다. 전반적으로 보아 배양온도가 낮아질수록 Leu. mesenteroides subsp. mesenteroides의 증식에 상대적으로 더 유리하였고, 배양온도가 높아질수록 Lac. plantarum의 증식에 상대적으로 더 유리하였다.
Growth curves of seven strains of lactic acid bacteria isolated from Kimchi were graphed, when they were cultivated at 3$0^{\circ}C$ in filter sterilized Chinese cabbage juice containing 0, 2, 4 and 6% salt, and then lag time and generation time were calculated. The shapes of growth curves were changed differently among strains, as salt concentrations were increased. The addition of 2~4% salt resulted in prolongation of lag time were most omspicuous in Leu. Paramesenteroides and Leu. Mesenteroides subsp. Dextranicum, and the next in Leu. Mesenteroides subsp. Mesenteroides,m Lac. Bavaricus and Lac. Gomohiochii, and the least in Lac. Plantarum and Lac. Brevis. And then the prolongations of generation time were most remarkable in Lac. bavaricus and Lac. Homohiochii, and the next in Leu. Mesenteroides subsp. Mesenteroides, Leu. Mesenteroides subsp. Dextranicum and Leu. Paramesenteroides, and the least in Lac. Plantarum and Lac. brevis. By increasing salt concentrations from 0 to 2%, the generation times of Leu. Cesenteroides subsp. Dextranicum and Leu. Mesenteriodes subsp. Mesenteroides were prolonged slightly, while those of Lac. Homohiochii and Lac. Brevis were not changed, and those of Lac. Plantarum, Lac. Bavaricus and Leu. Paramesenteroides were shortened slightly. As salt concentrations were increased from 2% to 4%, inversions in the order of generation time occurred among strains. As a whole, lower salt concentrations were more favorable for the growth of Leuconostoc strains, while higher salt concentrations were for Lactobacillus strains.
Kim, Hong-Il;Kwon, O-Chul;Kong, Won-Sik;Lee, Chang-Soo;Park, Young-Jin
Mycobiology
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제42권4호
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pp.322-330
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2014
The aim of this study was to identify and characterize new Flammulina velutipes laccases from its whole-genome sequence. Of the 15 putative laccase genes detected in the F. velutipes genome, four new laccase genes (fvLac-1, fvLac-2, fvLac3, and fvLac-4) were found to contain four complete copper-binding regions (ten histidine residues and one cysteine residue) and four cysteine residues involved in forming disulfide bridges, fvLac-1, fvLac-2, fvLac3, and fvLac-4, encoding proteins consisting of 516, 518, 515, and 533 amino acid residues, respectively. Potential N-glycosylation sites (Asn-Xaa-Ser/Thr) were identified in the cDNA sequence of fvLac-1 (Asn-454), fvLac-2 (Asn-437 and Asn-455), fvLac-3 (Asn-111 and Asn-237), and fvLac4 (Asn-402 and Asn-457). In addition, the first 19~20 amino acid residues of these proteins were predicted to comprise signal peptides. Laccase activity assays and reverse transcription polymerase chain reaction analyses clearly reveal that $CuSO_4$ affects the induction and the transcription level of these laccase genes.
김치류 발효 중에 분리 될 수 있는 젖산균은 Leu. mesenteroides, Lac. plantarum, Lac. brevis 및 Ped. pentosaceus와 같이 이미 잘 알려진 젖산균 외에도 젖산 생성능은 약하나 발효초기에 숫자나 번식속도면에서 Leu. mesenteroides와 비슷한 간균들이 여러종 발견되었다. 이 초기간균들은 Lac. leichimannii, Lac. fermentum, Lac, sake 등으로서 이들을 합쳐 초기 숫자가 $10^4\;cells/ml$를 능가하였고 발효 중 최대숫자 $10^9cells/ml$까지 번식하였다. 김치로부터 분리동정된 젖산균을 식염이 첨가되지 않은 배추즙액과 3.9%의 식염이 첨가된 배추즙액을 개별적으로 순수배양했을 때 Leu. mesenteroides한 종과 Lac. leichimannii는 산생성에 차이가 없었으나 Leu. mesenteroides 다른 한 종과 Lac. fermentum 및 Lac. plantarum은 식염이 존재할 때 산생성능이 저하되었다. 분리된 젖산균을 조합하여 복합균주로 3.9% 식염이 첨가된 배추즙액을 발효시켰을 때 초기간균들은 발효에 유의할만한 영향을 주지 못하였고, Leu. mesenteroides가 조합에 포함되어 산이 생성되었으며 최종 산생성량도 많았다. 김치원료 혼합물 중의 초기 젖산균수는 $10^4cells/ml$ 이상이었으며 Lac. plantarum수는 이보다 훨씬 적어서 $0.36{\sim}240cells/g$으로 나타났고 각 원료당 Lac. plantarum의 수는 특이하게 높은 숫자 $(3.6{\times}10^2{\sim}4.4{\times}10^6cells/g)$를 나타내는 깐마늘을 제외하고는 $0.0{\sim}240cells/g$의 범위에 있었다.
유산균을 종균으로 하여 유제품을 만드는 경우에 종균의 취급관리는 매우 중요한 일이다. 종균을 취급하는 과정에서 어떤 원인으로 인하여 종균의 활력 특히 산생성력이 감퇴되어 종균으로 사용할 수 없는 경우가 발생한다. 이러한 경우의 원인을 분석하여 그 예방책을 수립하기 위한 기초 연구로써 발효유의 종균으로 사용하고 있는 L. casei YIT9018의 spontaneous lac 변이주의 발생빈도 및 이러한 Lac 변이주의 특성을 검토하였다. parent colony에서의 Lac의 발생빈도는 MRS 배지에서 400 coloney중에서 1개, 10% 환원 탈지분유에서는 984개중 1개의 배율로 나타났다. 분리된 Lac 변이주중에는 Lac Gal도 검출되었다 대부분의 Lac를 탈지유배지에 배양할 경우 10일이 지나면 우유를 응고시켰으나 Lac Gal는 30일이 지난뒤에 응고시켰다. Lac변이주를 MRS-lactose 배지의 plate에 도말하여 배양하면 4일 이후부터는 revertant가 나타났으나 Lac Gal Cell에서는 인정되지 않았다. 얻어진 Lac 변이주의 plasmid를 분리하여 parent와 비교한 결과 plasmid DNA가 소실되었음을 확인하였다.
HAN , RI-NA;CHO, ICK-HYUN;CHUNG, SUNG-OH;HAN, JONG-KWON;LEE, JIN-HOO;KIM, SOO-KI;CHOI, KANG-YELL
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제14권6호
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pp.1249-1255
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2004
This study has developed Corynebacterium ammoniagenes (c. ammoniagenes) purine gene transcriptional reporters (purF-lacZ and purE-lacZ) that function in Escherichia coli (E. coli) DH5a. After transformation of a C. ammoniagenes gDNA library into E. coli cells harboring either purF-lacZ or purE-lacZ, C. ammoniagenes clones were obtained that repress purF-lacZ and purE-lacZ gene expression. The potential purE and purF regulatory genes are homologous to the genes encoding transcription regulators, the regulatory subunit of RNA polymerase, and genes for purine nucleotide biosynthesis of various bacteria. The C. ammoniagenes purE-lacZ and purF-lacZ reporters were repressed by adenine and guanine within E. coli, indicating similarity in the regulatory mechanism of purine biosynthesis in C. ammoniagenes and E. coli. Gene regulation of pur-lacZ by adenine and guanine was partly abolished in cells expressing potential purine regulatory genes, indicating functionality of the purine gene regulators in repression of purE-lacZ and purF-lacZ. The purE-lacZ and purF-lacZ reporters can be used for the screening of genes involved in the regulation of the de novo synthesis of the purine nucleotides.
산개성단 NGC 7209에 속한 쌍성 SS Lac에 대하여 원자외선 영역의 IUE 관측을 수행하였다. IUE 저 분산의 짧은 파장과 긴 파장 영역의 스펙트럼을 합성하여 에너지 분포 곡선을 완성하고 적색 화 현상을 제거한 후, Kurucz 항성대기 모델과 비교하여 SS Lac의 표면온도, gravity, abundance 등을 결정하였다. SS Lac의 식 현상이 중단되기 이전의 광도곡선을 분석하고, SS Lac의 가능한 거리를 구하여, SS Lac이 산개성단 NGC 7209의 구성원임을 확인하였다. 식이 중단된 이유는 충돌에 의한 합병보다는 제 3체에 의한 공전궤도 기울기의 변화가 더 타당성이 있는 것으로 판명되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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