• Journal of Plant Biotechnology
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• 제31권4호
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• pp.267-271
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• 2004

국내 고구마 율미 품종의 배발생 캘러스를 Agrobacterium 매개 방법을 이용하여 형질전환 식물체를 개발하였다. 배발생 캘러스를 7일 동안 전배양 한 후 Agrobacterium과 2일 간 공동배양할 경우 일시적인 형질전환 효율이 가장 높았다. Agrobacterium과의 공동배양 후 배발생 캘러스를 1mg/L 2,4-D, 100mg/L kanamycin, 400mg/L claforan 이 첨가된 선발배지에서 4주 간격으로 계대배양하였다. 선발된 kanamycin 저항성 캘러스를 2,4-D를 제거한 선발배지로 옮겨 체세포배를 유도하였으며 이후 소식물체로 발달하였다. Southern 분석으로 1-3 copy의 GUS 유전자가 고구마 염색체내로 도입되었음을 확인하였다. 또한 조직학적 분석으로 GUS 유전자가 형질전환 고구마의 배발생 캘러스, 재분화 식물체의 잎, 엽병, 및 뿌리 조직에서 강하게 발현됨을 알 수 있었다.

• 한국산림과학회지
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• 제77권2호
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• pp.199-207
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• 1988

포플러류(類)에 대(對)한 유용유전자(有用遺傳子) 삽입에 관(關)한 기초(基礎) 연구(研究)로서, 북미(北美)의 자연잡종(自然雜種) 포플러, P. alba ${\times}$ P. grandidentata 3 클론을 대상으로 Agrobacterium tumefaciens A281과 A348 strain의 감염력을 조사(調査)하였다. Kanamycin 저항성(低抗性)의 neomycin phosphotransferase (NPT-II) 유전자(遺傳子)를 가진 Agrobacterium binary pGA 472 vector와 이들 조직배양(組織培養)된 세 클론의 잎조각을 함께 배양(培養)하여, 형질전환(形質轉換)된 부위(部位)를 선발(選拔)하기 위해서 kanamycin sulfate의 적정농도(適正濃度)를 조사(調査)하였다. A281과 A348 strain 중(中) A281 strain이 가지고 있는 pTiBo542가 binary vector system의 helper plasmid로서의 역할에 가장 적합한 것으로 나타났다. 비교적 저농도(低濃度)(10mg/l)의 kanamycin sulfate가 잎조각배양으로 부터 식물체(植物體) 유도를 억제하였다. Kanamycin 저항성(低抗性) 유전자(遺傳子)가 내포된 Agrobacterium binary vector와 잎조각을 함께 배양(培養)한 후(後) kanamycin에 대한 저항성(低抗性)을 가진 callus가 kanamycin(60mg/l)이 들어있는 식물체 유도배지에서 선발(選拔)되었다. Kanamycin 저항성(低抗性) 유전자(遺傳子)에 의해 형질전환된 이들 kanamycin 저항성(低抗性) callus와 정상적인 비교 callus를 kanamycin이 들어있는 식물체(植物體) 유도배지에서 배양(培養)했을때 정상적인 비교 callus는 50mg/l의 kanamycin 농도(濃度)에서 생장(生長)이 억제된 반면, 형질전환(形質轉換)된 kanamycin 저항성(低抗性) callus는 200mg/l의 kanamycin 농도(濃度)에서도 생장(生長)을 계속하였다.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제38권4호
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• pp.308-314
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• 2011

Efficient transformation and regeneration methods are a priority for successful application of genetic engineering to vegetative propagated plants such as grape. In this study, methods for Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation and plant regeneration of grapevine (Vitis vinifera) were evaluated. Tamnara, Heukgoosul, Heukbosek, Rizamat were co-cultivated with Agrobacterium strains, LBA4404 containing the vector pBI121 carrying with CaMV 35S promoter, GUS gene as reporter gene and resistance to kanamycin as selective agent. Seven percent of the maximum regeneration frequency was obtained from co-cultivated with explants from Rizamat with LBA4404 strain on selection medium with kanamycin. The addition of acetosyringone, 200 ${\mu}m$ in virulence induction step was a key factor for successful GUS reporter gene expression in grapevine transformation. Transgenic plants showed resistance to kanamycin and the GUS positive response in leaf ($T_0$) stem ($T_0$) and petiole ($T_0$).

• 한국수산과학회지
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• 제56권6호
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• pp.826-832
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• 2023

Clostridium perfringens causes diarrhea and other diseases in humans and animals. We investigated the prevalence, toxin gene profiles, and antimicrobial resistance of C. perfringens isolated from commercial jeotgal sample. C. perfringens was isolated from 11 of 22 commercial jeotgals. All C. perfringens strains were positive for the alpha toxin gene, but not for the beta, epsilon, iota, CPE or NetB toxin genes; therefore, all strains were identified as type A C. perfringens. However, the beta2 toxin gene was identified in 54.5% of isolates. Disk diffusion susceptibility tests showed that most isolates were resistant to kanamycin (90.9%), nalidixic acid (72.7%), oxacillin (54.5%), erythromycin (27.3%), ciprofloxacin (9.1%) and clindamycin (9.1%). However, all strains were susceptible to 14 other antimicrobial including amoxicillin, ampicillin, and chloramphenicol. The average minimum inhibitory concentrations against C. perfringens of clindamycin, kanamycin, and nalidixic acid were 128.0, 128.0, and 54.0 ㎍/mL, respectively. These results provide new insight into the necessity for sanitation of commercial jeotgal, and provide evidence to help reduce the risk of contamination with antimicrobial-resistant bacteria.

• 식물조직배양학회지
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• 제27권6호
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• pp.475-478
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• 2000

상추에 particle bombardment를 이용한 배추 Glutathione Reductase (GR)유전자의 형질전환효율 향상 및 형질전환체의 유전분석에 관한 실험을 수행하여 얻은 결과를 요약하면 다음과 같다. Particle bombardment 이용시 사출 전 4시간, 사출 후 16시간 동안 삼투조절제인 0.6M serbitolfmannitol 을 처리하여 형질전환시킨 상추 자엽조직에서 GUS 반응 spot이 가장 많았다. 0.3, 0.6, 1.5 kbp로 나타나는 3가지 종류의 primer를 사용하여 PCR한 결과 각각의 primer에 homology를 타나내는 band를 확인하여 355 promoter와 BcGRl유전자가 삽입이 된 것을 확인하였다. 형질전환된 상추의 자식 종자를 채종하여 kanamycin 200mg/L이 첨가된 MS배지에 파종하여 형질전환시키지 않은 상추의 자식 종자와 비교해 본 결과, 형질전환된 상추의 종자에서 발아된 유묘의 약 70%정도가 kanamycin에 대해 내성을 나타내었다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제31권2호
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• pp.250-258
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• 2021

Among various species of marine bacteria, those belonging to the genus Halomonas have several promising applications and have been studied well. However, not much information has been available on their antibiotic resistance. In our efforts to learn about the antibiotic resistance of strain Halomonas socia CKY01, which showed production of various hydrolases and growth promotion by osmolytes in previous study, we found that it exhibited resistance to multiple antibiotics including kanamycin, ampicillin, oxacillin, carbenicillin, gentamicin, apramycin, tetracycline, and spectinomycin. However, the H. socia CKY01 resistance pattern to kanamycin, gentamicin, apramycin, tetracycline, and spectinomycin differed in the presence of 10% NaCl and 1% NaCl in the culture medium. To determine the mechanism underlying this NaCl concentration-dependent antibiotic resistance, we compared four aminoglycoside resistance genes under different salt conditions while also performing time-dependent reverse transcription PCR. We found that the aph2 gene encoding aminoglycoside phosphotransferase showed increased expression under the 10% rather than 1% NaCl conditions. When these genes were overexpressed in an Escherichia coli strain, pETDuet-1::aph2 showed a smaller inhibition zone in the presence of kanamycin, gentamicin, and apramycin than the respective control, suggesting aph2 was involved in aminoglycoside resistance. Our results demonstrated a more direct link between NaCl and aminoglycoside resistance exhibited by the H. socia CKY01 strain.

• 식물조직배양학회지
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• 제26권4호
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• pp.281-287
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• 1999

본 연구에서는 제초제 저항성 더덕을 개발하고자 하여 제초제 저항성 bar유전자의 형질전환을 수행하였고, 더덕 종자 발아 생리, 체세포배 유도 및 선별배지 농도 등에 대해 조사하였다. 기내종자발아는 GA$_3$를 첨가한 MS배지에 치상하여 15$^{\circ}C$에서 배양하였을 때 광, 암 두 조건 모두에서 90%의 발아율을 나타내었다. 식물체 재분화는 체세포 배발생 경로를 통하여 이루어 졌다. 배발생 캘러스는 자엽, 줄기,잎을 2,4-D와 Zeatin을 혼용처리하여 유도할 수 있었다. Basta와 PPT는 10mg/L 이상의 농도에서 식물체가 갈변고사 하였다. Explant는 l00mg/L 이상의 kanamycin에서 캘러스를 형성하지 못하였다. Explant를 제초제 저항성 bar유전자의 식물 형질전환 벡터를 포함하는 Agrobacterium tumefaciens LBA4404과 2일간 공존 배양한 후, 100mg/L kanamycin, 500mg/L carbenicillin과 1.0mg/L 2,4-D이 포함된 배지에서 형질전환체를 선발하였고, 계대배양으로 배발생 캘러스를 유도하고 체세포배를 얻었다. 체세포배를 200 mg/L kanamycin,500mg/L carbenicillin이 포함된 N6배지에 치상하여 발아시켰다. PCR 수행결과 NPTII와 bar유전자가 증폭되어 나타남으로서 도입된 유전자가 잠정적인 형질전환체 내에 존재함을 확인할 수 있었다. 본 연구를 통하여 얻어진 bur유전자 형질전환 식물체는 RNA및 단백질 수준에서의 발현 여부 검정을 거친 후, 제초제 저항성 더덕 생산 및 제초제 저항성 유전자의 후대 유전 양상 분석을 위한 기초 자료로 이용될 수 있을 것이다.

• 한국동물위생학회지
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• 제39권3호
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• pp.175-181
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• 2016

Staphylococcus pseudintermedius is an important opportunistic pathogen of dog and cats. Since 2006 there has been a significant emergence of methicillin-resistant S. pseudintermedius (MRSP) mainly due to clonal spread. The aim of this study was to investigated the prevalence of antibiotic resistance and presence of mecA and femA gene in 91 S. pseudintermedius isolates isolated from dogs and cats associated with various clinic infections. Methicillin resistance was confirmed by oxacillin disc diffusion method. MRSP isolate was detected 19 isolates (20.9%). MRSP and methicillin-resistant S. pseudintermedius (MSSP) isolates were highly resistant to penicillin, kanamycin, tetracycline, erythromycin, trimethoprim-sulfamethoxazole, clindamycin, ciprofloxacin, enrofloxacin and choloramphenicol (100~47.3% and 90.3~33.3%, respectively). About 90% of MRSP isolates were multi-drug resistance (resistance to at least five or more antimicrobials), and MSSP isolates was ca 74%. Among the 91 isolates, mecA gene was detected in 25 isolates (27.5%, 19 in MRSP isolates and 6 in MSSP isolates), but none carried the femA gene. Our results indicated MRSA isolates show a strong resistance to antimicrobials commonly used in veterinary medicine. A continuous surveillance and monitoring should be called for to prevent the contamination and spread of MRSP in dogs and cats.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제34권4호
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• pp.323-329
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• 2007

토마토 형질전환체에서 NPTII 및 TPSP 유전자의 발현양상을 조사하였다. 4개 line 토마토 형질전환체가 선발배지에서 kanamycin에 저항성을 보이며 생산되었다. 그러나, 1번 line과 11번 line의 후대에서 NPTII 유전자의 발현이 억제되었으며, Kanamycin 저항성을 보이지 못했다. Southern 분석 결과, 1번 11번 line은 여러 copy의 외래 유전자를 가지고 있었으며, 2번, 10번 line은 1-2 copy의 외래유전자를 가지고 있었다. 형질전환 line 11번은 methylation sensitive 제한효소처리 후 DNA methylation 분석 결과, TPSP coding부위 및 도입유전자의 발현을 조절하는 CaMV35S 프로모터 주위에서 CpG methylation이 축적되었음이 확인되었다. 따라서 여러 copy의 외래유전자를 가진 토마토 형질전환 line 11번에서 NPTII 유전자 및 TPSP유전자의 발현이 억제된 것은 transcriptional gene silencing 기작에 의한 것으로 추정되었다.

• 식물조직배양학회지
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• 제26권1호
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• pp.21-26
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• 1999

쌍떡잎식물체 형질전환에 널리 쓰이는 Agrobacterium의 binary vector를 이용하여 왜화성을 나타내는 pGA643-rolC gene을 엽절편 transformation방법으로 petunia에 도입하였다. Petunia hybrida의 재분화에 있어 엽조직으로부터 식물체 재분화에 미치는 생장조절물질의 효과는 0.1mg/L NAA와 1.0mg/L BA의 조합에서 높았고 재분화된 식물체도 양호하였다. 식물체 형질전환 선발배지에 에틸렌 억제제인 AgNO$_3$와 KMnO$_4$의 첨가시 형질전환체 재분화율이 높게 나타났으며, AgNO$_3$에 비해 KMnO$_4$처리구에서 보다 많은 식물체 재분화율을 나타내었으나 AgNO$_3$와 KMnO$_4$의 고농도 첨가시 다소의 유리화 현상이 발생하였으므로 3mg/L KMnO$_4$ 첨가가 식물체 재분화에 적합한 것으로 생각된다. 항생제 200mg/L kanamycin, 500mg/L carbenicylin 과 1.0 mg/L BA, 0.1mg/L NAA가 첨가된 형질전환 선발배지에서 엽절편으로 부터 형질전환 된 것으로 추정되는 식물체들을 일차 선발하였고 기외로 이식한 후 genomic DNA를 분리하여 Southern blot analysis법으로 분석한 결과 외래 유전자가 식물체의 genomic DNA내로 삽입된 것을 확인할 수 있었다.