• 제목/요약/키워드: isolation and purification

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Prevotella nigrescens에서의 Hemin조절 세포막 단백질의 순수분리 및 특성분석 (Isolation and Partial Characterization of a 50 kDa Hemin-regulated Cell Envelope Protein from Prevotella nigrescens)

  • 김경미;최점일;김성조
    • Journal of Periodontal and Implant Science
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    • 제32권2호
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    • pp.351-360
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    • 2002
  • In the study presented here, identification, purification, and partial characterization of a hemin-regulated protein in Prevotella nigrescens were carried out. The results of this study confirm that the availability of hemin influences the expression of a selected membrane protein as well as the growth rate of P. nigrescens ATCC 33563. The 50 kDa cell envelope associated protein, whose expression is hemin regulated, is considered to be a putative hemin-binding protein from P. nigrescens. Disulfide bonds were not present in this protein, and N'-terminal amino acid sequence analysis revealed that this protein belongs to a new, so far undescribed protein. The 50 kDa protein was found to be rich in hydrophilic amino acids, with glycine comprising approximately 60% of the total amino acids. The study described here is the first to identify, purify, and biochemically characterize a putative hemin-binding protein from P. nigrescens. Work is in progress to further characterize the molecular structure of this protein.

식물세포 Taxus chinensis 의 대량 배양액으로부터의 Taxane 유도체 생산 및 정체 (Production and Purification of tazane Derivatives from the Plane Cell Cultures of Taxus Chinensis in Large-scale Process)

  • 김진현
    • KSBB Journal
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    • 제15권4호
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    • pp.398-401
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    • 2000
  • Taxus chinensis 식물세포 배양에 의한 paclitaxel대량 생산의 경우 biomass내 paclitaxel이외에 다른 많은 유도체들이 확 인 되었다. 이를 목표 물질로 선정하여 Prep-LC를 이용하여 분리/정제하고 NMR, MS 등으로 화학구조분석을 하여 이들 물질들에 대한 동정을 하였다. 또한 Taxus chinensis 식물세포 배양에 의한 paclitaxel 대량 생산의 경우 paclitaxel 생산량에 따른 여러가지 유도체들의 생산 경향을 조사하였으며, paclitaxel의 생산량이 증가할 수록 유도체들의 생산량은 상대 적으로 감소함을 알 수 있었다. 이러한 연구는 결국 paclitaxel 이외의 새로운 유용성분 및 전구체 확인, 분리/정제 방법의 개발, paclitaxel 생산에서의 품질관리에 유용하게 사용되어 질 수 있다.

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육계의 혈청중 면역글로부린(IgA, IgG, IgM)농도의 발육시기별 변화상 - II. IgA 분리 및 발육시기별 농도수준 (Developmental Changes of Serum IgA, IgG and IgM Concentrations in Broiler Chicks - II. Isolation of IgA and Developmental Changes of Serum IgA Levels)

  • 김정우;이민호;김춘수;김상희;박근식
    • 한국가금학회지
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    • 제21권3호
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    • pp.169-174
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    • 1994
  • An experiment was conducted to establish a large scale production method of anti-serum against chicken IgA and to profile the developmental changes of serum IgA levels during the feeding period(from hatching to 7 weeks of age) in broiler chicks. Blood samples were taken from Hubbard chicken at the age of hatching, 3 days of age, and weekly thereafter till to 7 weeks of age. The pure IgA was isolated from ammonium sulfate treated chicken bile juice by gel filtration chromatography ( Sepharose GL-6B) - The quantitative assay of serum IgA were carried by RID method. Developmental changes of serum IgA concentrations were 0.42 mg /mL at hatching, thereafter dicreased gradually, lowest at 1 week of age(0.17 mg /mL), and gradually increased to 7 weeks of age(2.73 mg /mL). There was no sexual difference in serum IgA level, but female chicks showed higher IgA levels than male chicks during the experimental period.

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김엽체에서의 원형질체분리와 정제 (Isolation and Purification of Protoplasts from PorPhyra tenera Thalli)

  • 송상호;정규화
    • 한국양식학회지
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    • 제1권1호
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    • pp.103-108
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    • 1988
  • 김 (Porphyra tenera)의 생물공학적인 육종법개발을 위해 그의 엽체를 효소처리하여 원형질체를 분리하고 정제하였다. 원형질체의 수율은 효소의 농도와 효소액에 의한 조직의 처리시간에 비례하였다. $12\%$의 전복 내장 건조 분말로 조제된 효소액으로 $22^{\circ}C$에서 3시간동안 처리했을때 약 $2.5\times10^6$ 개의 원형질체가 분리되었다. 원형질체들의 크기는 $9\~25\mu$m로 다양했으며 평균 14.5$\mu$m였다.

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한국산 다시마 유래 Fucoidan의 정제 및 분해균의 분리 (Purification of Fucoidan from Korean Sea Tangle (Laminaria religosa) and Isolation of Fucoidan-Degrading Microorganisms)

  • 김대선;임동중;문성훈;서현효;박용일
    • 한국미생물·생명공학회지
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    • 제32권4호
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    • pp.362-365
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    • 2004
  • The fucoidan from Laminaria relicollected at Wando in Korea was purified with the yield of 2.3% in mass. The monosaccharide composiof the purified fucoidan was nearly identical to that of the commercial standard: fucose 63.71 %, xylose 22.98%, galactose 6.62%, mannose 0.24%, and uronic acid 3.26%. Microorganisms capable of degrading the purified fucoidan were isolated from the colonies on the minimal medium containing 0.2% of purified fucoidan as a sole carbon source. Of these isolates, a strain showing a relatively higher capability to degrade fucoidan, up to 63%, was partially characterized as a Gram positive, aerobic, moderately halophilic marine bacterium.

Fusarium graminearum이 생산하는 몇가지 물질의 분리정제 및 항균 활성 (Isolation and Purification of Several Substances Produced by Fusarium graminearum and Their Antimicrobial Activities)

  • 김병섭;김건우;이종규;이인원;조광연
    • 한국식물병리학회지
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    • 제11권2호
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    • pp.158-164
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    • 1995
  • 토마토의 엽권에서 분리한 Fusariym graminearum이 분비하는 물질은 벼 도열병균(Pyricularia oryzae)의 여러 종의 식물병원 진균에 대한 항균활성을 나타내었으며, 이러한 활성물질을 PDA에서 본 균을 배양 한 후 chloroform으로 추출하여 분리정제 하였다. HPLC에 의하여 5종류의 활성 물질을 분획하였으며, 그중 1번(F402) 화합물을 벼 도열병균(P. oryzae)을 포함한 22개 식물 병원 진균에 대하여 살균 활성범위를 조사한 결과, 이 화합물은 50$\mu\textrm{g}$/ml 농도에서 Pythium ultimum, Rhizoctonia solani, Sclerotinia sclerotiorum은 전혀 억제하지 못하였으며, Phytophthora spp., Cladosporium fulvum, Fusarium spp., Corynespora cassicola에는 어느 정도의 활성이 있었지만 낮게 나타났고, P. oryzae, Cochliobolus miyabeanus, Alternaria solani는 100% 억제하여 활성이 높게 나타났다. 또한 장내 세균에 대한 활성을 MIC로 비교할 때 Streptococcus pyogenes, Streptococcus faecium에 대하여는 각각 12.5, 25 $\mu\textrm{g}$/ml였고 Staphylococcus aureus는 25-50$\mu\textrm{g}$/ml으로 나타났으며, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium, Klebsiella aerogenes, Enterobacter cloacae에서는 100$\mu\textrm{g}$/ml 이상으로 활성이 나타나지 않았다. F402를 200$\mu\textrm{g}$/ml의 농도로 직접 살포한 식물체에서의 방제효과는 벼도열병, 벼 깨씨무늬병, 보리 흰 가루병에 대하여는 80%이상이었으나, 벼 잎집무늬마름병, 오이 잿빛곰팡이병, 토마토 역병, 밀 녹병에서는 낮았다.

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Penicillium oxalicum(HCLF-34)으로부터 남조세균 (Anabaena cylindrica) 분해효소의 분리 및 동정 (Isolation, Purification, and Characterization of the Lytic Enzyme of Anabaena cylindrica by Penicillium oxalicum (HCLF-34))

  • 현성희;이호용;최영길
    • 미생물학회지
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    • 제36권1호
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    • pp.14-19
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    • 2000
  • Penicillium oxalicum(HCLF-34)의 세포외 분비효소로부터 ultrafilration, gel filtration chromatograph와 anion exchange chromatography법을 이용하여 남조세균(Anabaena cylindrica) 분해효소를 분리하였다. 이 효소의 분자량은 약 22 kDa이며, renaturation SDS-PAGE에서 monomer로서 남조세균 분해 활성을 갖는다. 아미노산 서열은 N-말단부터$NH_(2)$-Glu-Ser-Tyr-Ser-Ser-Asn-Ala-Ala-Gly-Ala-Val-Leu-Ile---, 13개의 아미노산을 분석하였으며, 분석된 아미노산의 homology를 조사한 결과 aspergillopepsin II precursor(acid protease A)와 13개의 아미노산 중 11개(84%)의 유사도를 나타내었고, acid proteinase EapC precursor과 13개 중 10개(81%)의 유사도를 나타내었다.

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가자과(茄子科)의 엽육조직(葉肉組織) 원형질체(原形質체体)의 분리(分離) 및 융합(融合) (Isolation and Fusion of Solanaceous Species Mesophyll Protoplast)

  • 권오성;김달웅
    • Current Research on Agriculture and Life Sciences
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    • 제2권
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    • pp.15-22
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    • 1984
  • 감자의 엽육조직(葉肉組織)으로부터의 원형질체(原形質體) 분리(分離)에 있어서 최적생육환경(最適生育環境), 적정효소(適正酵素) 농도(濃度), 적정효소(適正酵素) 처리시간(處理時間) 및 순수분리(純粹分離)를 위(爲)한 적정(適正) sucrose의 농도(濃度)를 밝히고 감자 및 petunia의 세포융합(細胞融合)에 있어서 PEG의 분자량(分子量), 농도(濃度) 및 처리시간(處理時間) 그리고 DMSO의 첨가(添加) 효과(效果)를 밝히기 위(爲)해 수행(遂行)되었다. 원형질체(原形質體) 분리(分離)에 있어서 생육환경(生育環境)은 고습도(高濕度), 낮은 조도(照度)에서 생육(生育)된 엽육조직(葉肉組織)이 유리(有利)하였으며 pectolyase Y-23 효소(酵素)가 기내배양(器內培養)된 엽(葉)에서 원형질체(原形質體) 분리시(分離時) 좋은 효과(效果)를 나타내었다. Cellulase의 농도(濃度)는 2%(W/V)가 좋았으며 효소처리(酵素處理) 시간(時間)은 3~4시간(時間)이 좋았고 원형질체(原形質體)의 순수분리(純粹分離)는 감자의 경우(境遇) 0.4~0.5M sucrose가 효과(效果)가 좋다. 원형질체(原形質體)의 융합(融合) 시(時) 처리시간(處理時間)은 공히 30분(分)이 적당(適當)했으며 PEG의 분자량(分子量), 농도(濃度)가 높을수록 융합율(融合率)이 높았다. 감자의 두 품종간(品種間) 융합(融合)이나 감자와 petunia의 융합(融合)에 있어서도 역시 PEG의 분자량(分子量), 농도(濃度)가 높을수록 높았다. Dimethyl sulfoxide의 첨가(添加) 효과(效果)는 DMSO를 5%에서 10%첨가(添加) 시(時), 감자와 petunia의 융합(融合)에서 2~4% 융합율(融合率)이 증가(增加)되었다.

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Bioactivity-guided isolation of ginsenosides from Korean Red Ginseng with cytotoxic activity against human lung adenocarcinoma cells

  • Yu, Jae Sik;Roh, Hyun-Soo;Baek, Kwan-Hyuck;Lee, Seul;Kim, Sil;So, Hae Min;Moon, Eunjung;Pang, Changhyun;Jang, Tae Su;Kim, Ki Hyun
    • Journal of Ginseng Research
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    • 제42권4호
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    • pp.562-570
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    • 2018
  • Background: Lung cancer is the leading cause of cancer-related death worldwide. In this study, we used a bioactivity-guided isolation technique to identify constituents of Korean Red Ginseng (KRG) with antiproliferative activity against human lung adenocarcinoma cells. Methods: Bioactivity-guided fractionation and preparative/semipreparative HPLC purification were used with LC/MS analysis to separate the bioactive constituents. Cell viability and apoptosis in human lung cancer cell lines (A549, H1264, H1299, and Calu-6) after treatment with KRG extract fractions and constituents thereof were assessed using the water-soluble tetrazolium salt (WST-1) assay and terminal deoxyribonucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling (TUNEL) staining, respectively. Caspase activation was assessed by detecting its surrogate marker, cleaved poly adenosine diphosphate (ADP-ribose) polymerase, using an immunoblot assay. The expression and subcellular localization of apoptosis-inducing factor were assessed using immunoblotting and immunofluorescence, respectively. Results and conclusion: Bioactivity-guided fractionation of the KRG extract revealed that its ethyl acetate-soluble fraction exerts significant cytotoxic activity against all human lung cancer cell lines tested by inducing apoptosis. Chemical investigation of the ethyl acetatesoluble fraction led to the isolation of six ginsenosides, including ginsenoside Rb1 (1), ginsenoside Rb2 (2), ginsenoside Rc (3), ginsenoside Rd (4), ginsenoside Rg1 (5), and ginsenoside Rg3 (6). Among the isolated ginsenosides, ginsenoside Rg3 exhibited the most cytotoxic activity against all human lung cancer cell lines examined, with $IC_{50}$ values ranging from $161.1{\mu}M$ to $264.6{\mu}M$. The cytotoxicity of ginsenoside Rg3 was found to be mediated by induction of apoptosis in a caspase-independent manner. These findings provide experimental evidence for a novel biological activity of ginsenoside Rg3 against human lung cancer cells.

창이자(蒼耳子)로부터 안지오텐신 전환효소 억제 유효 성분의 분리 (Isolation of Angiotensin Converting Enzyme Inhibitory Component from the Seeds of Xanthium strumarium)

  • 이윤미;강대길;김명규;장지연;이호섭
    • 동의생리병리학회지
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    • 제19권1호
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    • pp.119-123
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    • 2005
  • In the courses of in vitro screening for the angiotensin converting enzyme (ACE) inhibitory activity of the various extracts from medicinal plants, n-BuOH soluble extract of the seeds of Xanthium strumarium was found to exhibit distinctive angiotensin converting enzyme (ACE) inhibitory activity. Bioassay-guided fractionation and purification of the n-BuOH soluble extract of the seeds of Xanthium strumarium afforded a new $xanthiazone-11-{\beta}-glucopyranoside$. The ACE activity was significantly inhibited by the addition of a new $xanthiazone-11-{\beta}-glucopyranosidein$ a dose-dependent manner of which $IC_{50}$ value was $21.8\;{\mu}g/ml$.