Total carbohydrates, amino acids and peptide-like substances in two kinds of Korean lager beers have been analyzed by the calorimetric method of Dreywood's anthrone reagent and Fowden's ninhydrin reagent. The samples were fractionated with column of ion-exchange resin. The experimental results are as follows; 1. Amounts of non-hydrolyzed carbohydrates in the part of column processed is 1. 82% and 1. 96 % (the value was measured by Bertrand's method). But the amounts of those measured by Dreywood's anthrone method are 5.57% and 4.25%, this values are much more than those of Bertrand's method. 2. It can be estimated the amounts of gum and dextrin are 3.75% and 3.30% in both two beers, by comparison of samples with the above mentioned two method. 3. The amounts of carbohydrates by anthrone reagent in acid-hydrolyzed beers are much increased than those of non-hydrolyzed, so it is suggested the presence of polymer carbohydrates which couldn't be detected by Bertrand's method. 4. Total amounts of amino acids are 0.015% and 0.025% (as glycine) in non-hydrolyzed beers measured by ninhydrine color reaction method, on the other hand the amount of amino acids in acid hydrolyzed beers are 0.06% and 0.056%, this is much more than those of nonhydrolysis. The different amounts means that of peptide-like substances. 5. It is necessary to determine the constituent of amino acid for the better taste of beer, and also it is desirable to check the role of carbohydrates in the course of fermentation, mashing and on lager beer for effective utilization of carbohydrate materials to eliminate the losses.
미생물이 생산하는 대사길항물질을 screening한 결과 최소검정배지에서 Gram 양성균에 항균활성을 나타내고 L-leucine에 의하여 그 항균활성이 길항당하는 182-27 물질을 생산하는 방선균을 토양에서 새로이 분리하였다. 본 생산균을 분류 동정한 결과, 유연균을 찾아볼 수가 없고 신 균종으로 동정하기에는 많은 type culture와의 비교분류를 하여야만 하므로 여기서는 다만 기균사의 포자형성과 세포벽 성분의 조성, 형태학적 성상 등으로 보다 Streptomyces sp.로만 동정하였다. 182-27 균주의 배양조건을 검토하고 최적조건에서 대량 배양하여 그 배양여액으로부터 이온교환수지, silica gel column chromatography 등에 의하여 활성 물질을 분리 정제하였으며 배양액 약 20$\ell$에서 약 20mg의 백색분말을 얻었다. 182-27 물질은 그의 이화학적 성질로 보아 아미노산 유연물질로 추정할 수가 있으나 그의 화학구조는 아직 밝히지 못했다. 생물학적 성질은 최소검정배지상에서 Gram 양성균에 항균력을 나타냈고 이러한 항균력은 L-leucine의 첨가에 의해 저해 당했다.
원자력 발전소에서 발생하는 고체 방사성 폐기물인 이온교환수지, 제올라이트, 활성탄 및 슬러지 에 포함된 성분 원소 분석을 위한 산분해 조건을 확립하였다. 방사성 폐기물의 분해 에는 흔합산을 이용한 밀폐형 극초단파 산분해법을 사용하였으며, 제안한 방법에 따른 산분해 후의 용액은 맑고 색이 없는 투명한 상태임을 확인할 수 있었다. 또한, 산분해 과정을 거친 각각의 용액 시료는 ICP-AES와 AAS를 사용하여 분석하였고, 모의 방사성 폐기물에 첨가한 5종의 금속 원소들은 $94{\%}$ 이상의 높은 회수율을 보여주었다. 화학적 특성을 고려하여 제안된 산분해 조건에 의해 용액화된 중${\cdot}$저준위 방사성 폐기물의 성분 원소 분석은 최적의 유리화 기술 개발을 위한 기초 자료로 유용하게 사용될 수 있을 것으로 판단된다.
녹차중(綠茶中)의 L-ascorbic acid를 정량(定量)함에 있어서 흔히 사용되고 있는 DNP법(法)을 적용할 때 불순물(不純物)에 의한 방해(妨害)여부와 그의 제거방법(除去方法)에 대하여 검토(檢討)한 결과(結果)는 다음과 같다. 즉, DNP법(法)으로 AsA를 측정시 ethyl glyoxal, diacetyl, caffeine둥 불순물질 및 아미노산(酸)들이 방해하였으며, 이들 물질을 제거하는 수단으로 브롬산화(酸化)후 o-phenylenediamine을 반응시킨 다음 chloroform으로 추출제거(抽出除去)하고 Amberlite $IR-120(H^{+})$로 아미노산(酸)을 제거(除去)한 후에 DNP법(法)으로 비색정양(比色定量)하면 L-ascorbic acid 함량(含量)을 정확히 측정(測定)할 수 있었다. 또한 분석소요시간(分析所要時間)이 TLC법(法)에 비해서 현저히 단축되고 재현성(再現性)도 좋아서 녹차중(綠茶中)의 ascorbic acid 정량(定量)에는 본법(本法)이 적합함을 확인하였다.
약 염기성 이온교환 수지에 cellulase를 고정화하였고 고정화 cellulase는 흡착 특성이 Langmuir 흡착 등온선을 잘 따랐다. pH와 온도에 대한 효소 활성은 고정화 효소가 우수한 특성을 보였다. 열에 대한 효소 활성은 1차식으로 감소하였고 고정화 효소가 자유 효소에 비해 열 안정성이 우수하였다. 초기 속도법을 통해서 자유 효소와 고정화 효소의 Michaelis-Menten 속도 상수를 결정하였고 속도상수 Km은 고정화 효소가 큰 값을 나타내었다. 충진층 반응기에서 셀룰로스의 전환 공정을 재순환에 의해 측정하였다. 투입되는 셀룰로스의 유량 변화에 대한 셀룰로스의 변환을 연속 공정에서 조사하였다. 장기 운전의 성능을 평가하기 위해 7일 통한 연속공정을 실시하였고 고정화 효소는 48%의 활성을 유지하였다.
연구배경: 본 연구는 결핵의 조기검출을 위하여, PCR을 이용하는데 있어서의 중요한 문제점의 하나인 임상검체로부터 결핵균을 분리 방법을 개선하여, 교차오염의 가능성을 최소화하고 PCR에 의한 결핵균의 DNA검출을 보다 쉽고 안전하게 실시하여 대량의 검체를 처리해야하는 일상 임상검사법으로 정착시키고자 하는데 그 목적이 있다. 방법: 다양한 방법으로 DNA를 검출하여 동일한 방법으로 PCR을 수행하여 이차 PCR 산물의 전기영동 결과를 AFB도말 및 배양검사 결과와 함께 비교하여 감수성, 특이성, 양성예측도 및 음성예측도의 항목으로 비교분석하였다. 실험 1은 Proteinase K 처리후 phenol로 추출하는 방법과 Chelex 100 이온교환 수지를 이용한 InstaGene법을 100예에서 비교하였으며, 실험 2에서는 Microwave 처리후 원침 상청액을 직접 시용하는 방법과 Chelex 100 이온교환 수지를 이용한 InstaGene 법을 98예에서 비교하였다. 결과: 세 DNA 분리법으로 실시한 PCR결과에서 모두 특이성과 양성예측도가 매우 낮았다. 실험 1에서 Proteinase K 법에 의한 경우 보다 Insta Gene을 이용한 경우에 약 20% 높은 감수성과 10%~20% 높은 음성예측도를 보이고 있으며, 특이성은 2%~8% 낮고, 양성예측도는 2.5%~4% 높은 것으로 나타났다. 실험 2에서는 Microwave법과 Insta Gene을 이용한 경우에 거의 비슷한 결과를 보였다. 결론: 결핵진단시 PCR을 위한 객담검체에서의 DNA 분리시에 Microwave법과 $InstaGene^{TM}$ DNA분리 kit가 매우 효율적이며, 특히 InstaGene법이 교차오염의 가능성이 거의 없고, 처리 시간이 짧으며, 조작이 매우 간단하며 매우 경제적인 것으로 나타났다. 다만 특이성을 더욱 높일 수 있도록 연구가 추가되어야 할 것이며 일반 인구집단에서 충분한 임상검체를 대상으로 연구가 추가되면 InstaGene법의 유용성이 더욱 확실히 검증 될 것으로 사료된다.
Glycomacropeptide(GMP) was purified from cheese whey which is obtaining as a byproduct in cheese producing. Cheese whey was first concentrated 10 times with a ultrafiltration aparratus, and then heated at 95℃ for 5 min. The concentrated fraction was centrifuged at 20,000×g for 30 min to remove fat layer. The supernatant layer enriched GMP protein was fractionated by ion exchange chromatography on DEAE-Sepharose Fast Flow column. GMP was bound to DEAE resin and eluted with 0.1∼0.25 M NaCl when using a linear NaCl gradient from 0 M to 0.5 M. The purified GMP gave a single band of 24 kDa which seems to be trimer molecular weight in SDS-PAGE, and migrated to the same molecular weight with control GMP obtained commercially. Its amino acid composition were consistent with that of standard GMP. About 0.71 g of GMP was recovered from 1 L of cheese whey. These results indicate that glycomacropeptide could be simply purified from cheese whey by using ultrafiltration and DEAE column chromatography. 본 연구에서는 치즈 제조시의 부산물인 치즈 유청으로부터 glycomacropeptide(GMP)를 정제하려고 하였다. 치즈 유청을 한외여과 장치를 이용하여 10배로 농축하여 공시시료로 하였고, 95℃에서 5분간 가열한 후 20,000rpm에서 30분간 원심분리하였다. 원심분리 후 혼입된 지방층을 제거하였고, GMP를 포함하고 있는 상청액은 DEAE-Sepharose Fast Flow 크로마토그래피 칼럼에 주입하였다. GMP는 DEAE 수지의 관응기에 결합하였으며, 0에서 0.5M의 NaCl 직선농도 구배를 실시하였을 때 약 0.1∼0.25M에서 용출되었다. 정제한 GMP는 SDS-PAGE에서 단일한 band를 나타냈으며, 분자량은 24kDa으로 trimer 형태로 상업적으로 제공받은 대조 GMP와 같은 분자량 위치로 영동하였다. 정제한 GMP의 아미노산 조성은 대조GMP의 결과와 비교하였을 때 Ser, Val이 약간 적었으며 Gly은 반대로 2배의 함량을 나타냈으나 전체적인 조성비에서는 거의 일치하였다. 단백질의 회수율은 유청 1L에서 약 0.71g의 GMP를 효과적으로 분리한 것으로 나타났다. 이 결과로부터 한외여과와 DEAE-Sepharose Fast Flow chromatography를 이용하여 GMP를 산업적으로 대량 정제할 수 있는 것이 확인되었다.
장독성대장균은 영유아설사 및 여행자설사의 주요한 원인균의 하나로서 이들이 생산하는 내열성장독소는 설사 유발 원인물질로 이들 생산균주는 비병원성 대장균과 비교하여 검정할 수 있다. 본 실험에서는 이러한 내열성장독소를 순수정제하였다. 저자들이 보고한 바 있는 형질전환균주 eKT-53을 사용하여 10L의 succinate salts 배지에 배양한 배양액을 30,000g로 원심분리하여 조 ST 용액을 사용하여 몇 단계의 정제과정을 통하여 정제하였다. 즉 Amberlite XAD-2 chromatography, DEAE-Sephacel anion exchange chromatography, Bio-Gel P-6 get filtration, Polyacrylamide slab gel 전기영동을 통하여 정제하고 장독소의 정제도 및 장독소의 생물학적 최소단위량을 조사하였다. 최종적으로 정제되어진 ST는 조 ST 용액에 비해 113배 더 정제되었고 회수율은 11%였다. 또한 생물학적 최소단위량이 2.8ng이였고 SDS-polyacrylamide disc gel상에서 단일 band를 나타내어 거의 순수정제된 것으로 보이며 면역을 위한 항원으로 이용할 수 있을 것으로 생각된다.
담수식물의 근계(根界) 부착하는 미생물 군집에서 중금속 제거능이 있는 균주인 Pseudomonas. cepacia KH410 을 분리하여 이 균주의 납과 카드윰, 구리에 대한 생흡착 특성을 조사하였다. 최적 흠착조건은 1.0 g-biomass, pH 4, 그리고 온도는 $40^{\circ}C$일 때이었다. 흡착평형은 120분에서, 1000 mg/1농도에서 이루어 졌다. 흡착용량(K)은 납이 카드뮴에 비해 5.6배, 구리에 비해서는 4.0배 높았으며 흡착강도(1/n)는 납>구리>카드뮴의 순이었다. 흠작강도에 따른 등온식 적용은 납은 Langmuir등온식, 그리고 구리와 카드뮴은 Freundlich 등온식 적용이 오차가 적었다. 건조 균체를 이용한 최대 흡착은 납과 카드뮴, 구리에 대하여 각각 83.2, 42.0, 65.2 mg/g-biomass 이었다. 중금속 회수를 위한 탈착 실험에서는 납은 0.1 M HCl에서 그리고 카드뮴과 구리는 0.1 M $HNO_3$에 의하여 높은 탈착율을 나타내었다. 고정화 균체의 강도를 높이기 위한 전처리는 각각의 세 가지 중금속에 대하여 0.1 M KOH가 가장 효율적이었다. 고정화 균체에 의한 최대 흡착은 납, 카드뮴, 구리가 각각 77.8, 58.5, 71.2 mg/g-biomass 이었으며 경금속 혼재시에도 비교적 안정한 상태를 나타내었으며 중금속 제거효율을 비교한 결과 고정화 균체가 이온교환수지에 의한 제거보다 높았다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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