Objectives : Scutellariae Radix (Hwanggeum in Korean) is the root of Scutellaria baicalensis Georgi. Scutellariae Radix is well known to be used as a medicine for common cold, upper respiratory infections, and to strengthen and regulate the immune system and anemia etc. Little is understood about the roles of Scutellariae Radix in the cytokine and chemokine secretion by immune cells. This study was designed to find out the effects of Scutellariae Radix on the cytokine and chemokine secretion in human mast cells (HMC-1). Methods : We treated hwanggeum according to consistency on HMC-1 and measured cytokines and chemokines levels using flow cytometry CBA system. Results : In hwanggeum treated group, the expression of interferon-inducible protein 10 (IP-10), monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1), chemokine (C-X-C motif) ligand 9 (CXCL9, MIG), interleukin 8 (IL-8), interleukin 2 (IL-2), interleukin 4 (IL-4), interleukin 5 (IL-5), interleukin 10 (IL-10), and interferon ${\gamma}$ (IFN-${\gamma}$) were decreased significantly. Conclusion : These results suggest that hwanggeum may support some of immune diseases by means of amiliorating some chemokines or cytokines such as IP-10, MCP-1, MIG, IL-8, IL-2, IL-4, IL-5, IL-10, and IFN-${\gamma}$.
In the present study, we investigated whether Houttuynia cordata Thumb (Saururaceae; HC) extracts have an anti-inflammatory effect in human monocytic THP-1 cells and human eosinophilic EoL-1 cells. The dried and powdered whole plants of HC were extracted with 80% EtOH. The combined extract (HC-1) was concentrated under reduced pressure. The residue was diluted with water, and then successively partitioned with n-hexane, EtOAc, and BuOH to produce the n-hexane (HC-2), EtOAc (HC-3), BuOH (HC-4), and the water-soluble fractions (HC-5), respectively. HC extracts have no cytotoxicity on THP-1 cells and EoL-1 cells at a high concentration of $10\;{\mu}g/ml$ for 24 h, except HC-2 extract ($10\;{\mu}g/ml$). Interleukin-6, Interleukin-8 and Monocyte chemoattractant protein-1 in THP-1 cells were increased after the treatment with the extract from house dust mite or LPS. The increase of cytokine production was strongly suppressed by HC-3 extract, in comparision with other extracts. HC-3 also had inhibitory effect on Interleukin-6 production increased by mite extract and LPS in EoL-1 cells. However, HC-3 extract increased Interleukin-8 production induced by mite extract and LPS in EoL-1 cells. These results suggest that HC extracts may be used as useful agents for treating allergic disorders such as asthma and atopic dermatitis.
The partitioning of recombinant human interleukin-2(rhII-2) in PEG 8000-dextran 38800 aqueous two-phase system has been investigated using three different sources of rhIL-2. In the case of pure rhIL-2, the solubility in a PEG-dextran two-phase system was low and most of rhIL-2 was partitioned into the bottom phase. For the recovery of rhIL-2 from insoluble protein aggregates, the inclusion bodies of recombinant E. coli were solubilized by the treatment with sodium dodecyl sulfate (SDS). The addition of SDS significantly enhanced not only the solubility of rhIL-2 but also the partitioning of rhIL-2 to the top phase. When the ratio of SDS to rhIL-2 was 2.0, the partition coefficient(K) and the recovery yield(Y) at the top phase were 4.5 and 88%, respectively, at pH 6.8. In order to reduce the recovery steps further, SDS was directly added to the intact recombinant E. coli cells and then partitioned into the PEG/dextran aqueous two-phase system. The observed partition coefficient ($K{\cong{3.0$) and recovery yield ($Y{\geq}80%$ )of this method were comparable to the rhIL-2 recovery from insoluble protein aggregates. The results obtained in this work indicate that PEG-dextran two-phase partitioning might provide a simple way for the recovery and partial purification of recombinant proteins which are produced as inclusion bodies.
DNA 자동합성기를 이용하여 오릴고뉴클레오타이드들을 합성하였으며 이로부터 인간 인터루킨-2를 코드하는 유전자를 제조하였다. 합성 유전자의 염기서열은 대장균에서 사용빈도가 높은 코돈을 고려하여 결정하였으며, 이때 인터루킨-2의 아미노산 서열은 변화시키지 않았다. 합성된 유전자는 람다 피엘 프로모터를 사용하여 대장균에서 발현시켰다. 인터루킨-2는 대장균에서 불용성의 침전물로 생성되었다. 생성된 인터루킨-2는 인터루킨-2 요구 배양세포주의 성장을 촉진하였다.
Interleukin-2 (IL-2) is a vital cytokine secreted by activated T lymphocytes, and plays an important role in the regulation of cellular functions and immunity of animals. In this study, the recombinant duck IL-2 (rduIL-2) was secretory expressed in Pichia pastoris (P. pastoris). The recombinant P. pastoris strain was cultured in shake flasks and then scaled up in a 5.0-l bioreactor. The result showed that the maximal fresh-cell-weight of 594.1 g/l and the maximal $OD_{600}$ of 408 were achieved in the bioreactor. The rduIL-2 was purified by two steps of purification procedures, and approximately 311 mg of rduIL-2/L fermentation supernatant was obtained. SDS-PAGE showed that the purified rduIL-2 constituted a homogeneous band of ~16 kDa or ~14 kDa corresponding to the glycosylated or non-glycosylated duIL-2 protein in size, respectively. The bioactivity of rduIL-2 was determined by lymphocyte proliferation assay. The result indicated that the rduIL-2 greatly promoted the proliferation of ConA-stimulated lymphocytes in vitro. The P. pastoris expression system described here could provide promising, inexpensive, and large-scale production of the rduIL-2, which lays the foundation for development of novel immunoadjuvants to enhance both the immunity of ducks against various infectious pathogens and vaccine efficacy.
Recombinant inteileukin-2 (IL-2) is a potent inductive stimulus for nitric oxide synthesis (NO.) and has been demonstrated as an antineoplastic agent in mice and human. But it is not let clear whether NO. can contribute to IL-2-induced therapeutic responses. Therefore, the current experiment was undertaken to clarify the effect of IL-2 on antitumor response against subcutaneous Meth-A tumor in mice. At the beginning of each experiment, normal BALB/c mice were injected subcuta-neously with $5{\times}10^6 Meth-A$ tumor cells. Some mice were implanted with osmotic minipumps con- taining 225 $\mu$l of 3.38 M $N^{\gamma}$ -monomethyl-L-arginine (MLA. an NOS inhibitor). Beginning on day 7, experimental groups were treated with a f-day course of IL-2 (50,000 lU,75,000 nJ,100,0007, 50,000 IU+MLA, 75,000 IU+MLA, 100,000 IU+MLA intraperitoneal injection every 12 hours for 5 days). The result of this experiment revealed that Meth-A tumor grew progressively in control mice. Intraperitoneal IL-2 treatment decreased tumor growth and prolonged survival. compared with con-trol mice. But no significant differences among 50.000 lU.75.000 lU and 100,000 lU of 7-2 treat-ment were observed. MLA administration prevented partially the decrease tumor growth and prolong survival of IL-2 treated mice compared with mice receiving IL-2 alone.
골관절염에 대한 참당귀 추출분말의 치료효과를 검토하고자 흰쥐의 monosodium iodoacetate(MIA)로 유발된 골관절염 부위에서 시료를 채취하여 염증관련 효소 및 염증성 cytokines의 발현에 대하여 참당귀 추출분말의 억제효능을 검토하였다. 고농도의 참당귀 추출분말 (50 μg/mL) 투여에서도 독성이 관찰되지 않았으며, 동일조건하에서 interleukin-1α (IL-1α)로 유발된 nitric oxide (NO)의 생성을 효과적으로 억제하였다. 특히, 관절연골 조직의 inducible nitric oxide synthase (iNOS) 및 cyclooxygenase-2(COX-2)의 발현을 농도 의존적으로 억제하였다. 따라서 참당귀 추출분말은 항염증 효능을 나타내는 농도에서 독성 없이 사용할 수 있으며, iNOS발현을 억제하여 방출되는 신호전달 물질인 NO의 생성을 억제하였다. 또한 참당귀 추출분말의 처리로 염증유발 부위에서 염증성 cytokines으로 알려진 tumor necrosis factor-α (TNF-α), interleukin-1β (IL-1β) 및 interleukin-6 (IL-6)의 발현이 억제됨을 확인하였다. 참당귀 추출분말의 항 염증효과는 TNF-α, IL-1β 및 IL-6의 혈중농도를 낮추어 염증부위뿐만 아니라 전체적으로 항염증효과를 나타내었다. 본 실험결과, 참당귀 추출분말의 투여는 MIA 또는 IL-1α로 유발되는 골관절염 동물모델에서 염증인자, 관련 효소의 발현 및 관련 신호전달 물질의 생성을 효과적으로 억제하여, 슬관절의 활액 내 glycosaminoglycan (GAG) 및 관절연골의 proteoglycan (PG)의 분해를 방지하여 골관절염의 발생을 억제할 것으로 추정되었다. 한편, 참당귀 추출분말의 주성분인 decursin은 혈중에서 2시간이내에 decursinol로 전환되어 8시간이상 LC-MS/MS로 검출되었다, 따라서 참당귀 추출분말에 의한 염증성 사이토카인 TNF-α, IL-1β 및 IL-6의 억제활성은 항염증활성이 큰 decursinol에 의한 것으로 추정된다.
Objectives : Daucus carota sativa has been frequently used as food supplements in many of the Asian countries, and a nutritional medical drug in traditional medicine. This research investigated the effects of Daucus carota sativa extract (DCE) on acute phases of inflammation in Raw 264.7 cells treated with lipopolysaccharide (LPS) in terms of the inhibition of nitric oxide (NO), prostaglandin $E_2$ ($PGE_2$) and pro-inflammatory cytokines production. Methods : NO, $PGE_2$, tumor necrosis factor (TNF)-${\alpha}$, interleukin-$1{\beta}$ and interleukin-6 contents were assayed by ELISA, and expressions of inflammation-related proteins such as inducible NO synthase (iNOS) were determined by immunoblot analyses. Results : DCE treatment attenuated the LPS ability to increase the productions of NO and $PGE_2$ as well as the protein level of iNOS in a concentration-dependent manner. Consistently, treatment of the cells with DCE suppressed the production of TNF-${\alpha}$, interleukin-$1{\beta}$ and interleukin-6. DCE also caused decreases of inhibitor of ${\kappa}B{\alpha}$ phosphorylation induced by LPS in the cells, which means DCE inhibition of NF-${\kappa}B$ activity. Furthermore, DCE blocked LPS-induced phosphorylation of p38 and SAPK/JNK. Conclusion : This study showing here may be of help to understand the action mechanism of DCE, and provide the information for the medical use of Daucus carota sativa for the inflammatory disease.
Motawi, Tarek M.K.;Zakhary, Nadia I.;Salman, Tarek M.;Tadros, Samer A.
Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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제13권11호
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pp.5399-5403
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2012
Aims and Background: Human leukocyte antigen-G and interleukin-2 receptor play pivotal roles in the proliferation of lymphocytes, and thus generation of immune responses. Their overexpression has been evidenced in different malignant hematopoietic diseases. This study aimed to validate serum soluble human leukocyte antigen-G (sHLA-G) and serum soluble interleukin-2 receptor (sIL-2R) as an additional tool for the diagnosis and follow up of acute lymphoblastic leukemia (ALL). Subjects and Methods: Both markers were determined by ELISA in the serum of 33 ALL pediatric patients before treatment and after intensification phase of chemotherapy as well as in the serum of 14 healthy donors that were selected as a control group. Results: ALL patients showed abnormal CBC and high serum lactate dehydrogenase, which were improved after chemotherapy. Also, there was a non-significant increase in serum sHLA-G in ALL patients compared with the control group. However, after chemotherapy, sHLA-G was increased significantly compared with before treatment. On the other hand, serum sIL-2R in ALL patients was increased significantly compared with the control group. After chemotherapy, sIL-2R decreased significantly compared with before treatment. Conclusions: From these results it could be suggested that measurement of serum sHLA-G might be helpful in diagnosis of ALL, while sIL-2R might be useful in diagnosis and follow-up of ALL in pediatric patients.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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