The aim of this study was to investigate effects of hyaluronidase during IVM on oocyte maturation, oxidative stress status, expression of cumulus expansion-related (PTX, pentraxin; GJA1, gap junction protein alpha 1; PTGS2, prostaglandin-endoperoxide synthase 2) and fatty acid metabolism-related (FADS1, delta-6 desaturase; FADS2, delta-5 desaturase; PPARα, peroxisome proliferator-activated receptor-alpha) mRNA, and embryonic development of porcine oocytes. The cumulus-oocyte complexes (COCs) were incubated with 0.1 mg/mL hyaluronidase for 44 h. Cumulus expansion was measured at 22 h after maturation. At 44 h after maturation, nuclear maturation, intracellular glutathione (GSH) and reactive oxygen species (ROS) levels were measured. Gene expression in cumulus cells was analyzed using real time PCR. The cleavage rate and blastocyst formation were evaluated at Day 2 and 7 after insemination. In results, expansion of cumulus cells was suppressed by treatment of hyaluronidase at 22 h after maturation. Intracellular GSH level was reduced by hyaluronidase treatment (p < 0.05). On the other hand, hyaluronidase increased ROS levels in oocytes (p < 0.05). Only PTGS2 mRNA was enhanced in COCs by hyaluronidase (p < 0.05). Population of oocytes reached at metaphase II stage was higher in control group than hyaluronidase treated group (p < 0.05). Both of cleavage rate and blastocyst formation were higher in control group than hyaluronidase group (p < 0.05). Our present results showed that developmental competence of porcine oocytes could be reduce by hyaluronidase via inducing oxidative stress during maturation process and it might be associated with prostaglandin synthesis. Therefore, we suggest that suppression of cumulus expansion of COCs could induce oxidative stress and decrease nuclear maturation via reduction of GSH synthesis and it caused to decrease developmental competence of mammalian oocytes.
The study was conducted to assess the effect of milk production, parity, stage of lactation, season and individual milk components themselves on milk urea nitrogen (MUN) concentration and other milk components of 3,219 Holstein dairy cows in Korean dairy farms. The MUN concentrations in Korean dairy cows were estimated to 16.68$\pm$5.87 mg/dl. Milk yield was negatively correlated with fat and protein contents and somatic cell counts (SCC) in milk (p<0.01). The increasing MUN concentration has positive correlation with yield and fat content. By increasing somatic cell, milk yield was reduced and MUN level was increased. Cows in spring and winter produced more milk over 1.43 and 0.93 kg/day, respectively, than cows in summer (p<0.01). Milk urea nitrogen concentrations of milk produced in summer and fall were significantly lower (p<0.01) than those in spring and winter. Both MUN concentration and somatic cell counts were highest in winter. Milk yield was lower (p<0.01) in the first calving than other calving time and was tended to increase until the fifth parity and then decrease. Milk urea nitrogen and SCC were not related to parity of cows in this study. Milk yield and SCC were positively related to lactation period while MUN concentrations and milk fat and protein contents were negatively influenced by stage of lactation. In the present study, the relationship between MUN and reproduction of dairy cows was also investigated. Cow produced milk in high MUN concentrations (greater than 18 mg/dl) had more open days than cows in MUN concentrations less than 18 mg/dl. However, no significant difference between MUN concentration levels and frequency of artificial insemination was found in this study. It is suggested that although MUN values for nutritional management and measures of production or reproduction are used, non-nutritional factors should be considered.
A nation wide sero-epidemiological survey of porcine reproductive and respiratory syndrome(PRRS) was carried out to analyze the current status of the PRRS virus infections in the field using the indirect immunofluorescent antibody assay(IFA) with the field isolate PL96-1. Since the first report of the antibody detection to PRRSV in 1993, the prevalence of seropositive pigs has increased dramatically and the data indicate that over 21% of the pigs and around 60% of the farms showed seropositives to the PRRS virus. A slightly higher positive rate was recognized in breeders than fattenings and it might be due to the higher age at the time of testings. No significant regional differences were detected in the sero-epidemiological survey. Higher sero-positive rate in growers indicates that PRRSV infection in the field was common after weaning(around 40 days). However, the number of seropositive pigs were declined in fattening pigs. Sows showed around 26% of sero-positive rate that there is a higher chance of continuous virus circulation in the infected farms. Low rate of sero-positivity in boars(9.8%) implies that there is high demand in proper control measures to prevent virus spreading through breeding procedures such as natural or artificial insemination. Therefore it was concluded that PRRSV infection in domestic swine herds is endemic and the positive rate and economic loses will be increased by spontaneous infections in naive farms.
Up-to-date artificial insemination (AI) using frozen sperm consider as the most widely using technology for improvement of Korean Native Cow (Hanwoo) embryo production. However, it is time consuming, required at least 15~20 years to make more than 6 generations, and their offspring number is limited. To overcome such limitations, superovulation and in vitro fertilization have been developed. For superovulation, the number of produced embryos are not enough for commercialization and donor cows need rest period. This led to use of slaughterhouse ovary for in vitro fertilization, but it is impossible to repeat the collection from the same individual and it only can improve the genetic merits of offspring for one generation. Production of embryos using Ovum Pick-Up (OPU) technique, where oocytes can be repeatedly collected from living elite donor, might overcome these limitations. In this study, we investigated the possibility of using OPU technique from donors at different age and different session periods for mass-embryo-production. Oocytes were collected from 26 donor cows twice per week, 3 - 4 months per year, between 2013 and 2016. Results showed that, the average number of embryo produced in first year used donor was significantly higher than that in second year used donor ($3.89{\pm}2.85$ vs $3.29{\pm}2.70$), however, there was no significant difference between third year used donor ($3.51{\pm}3.32$) and other groups. Taken together, our data showed that repeated using of donor up to three years is possible for in vitro embryo mass-production. Moreover, OPU can be used as suitable embryo producing technique for livestock breed improvement.
The first purpose of this study is to evaluate the usefulness of pork traceability data, which is monthly time-series data, and to draw implications with regard to its usefulness. The second purpose is to construct a dynamic ecological equation model (DEEM) that reflects the biological characteristics at each growth stage, such as pregnancy, birth and growth, and the slaughter of pigs, using traceability data. With the monthly pig model devised in this study, it is expected that the number of slaughtered animals (supply) that can be shipped in the future is predictable and that policy simulations are possible. However, this study was limited to traceability data and focused only on building a supply-side model. As a result of verifying the traceability data, it was found that approximately 6% of farms produce by mixing great grand parent (GGP), grand parent (GP), parent stock (PS), and artificial insemination (AI), meaning that it is necessary to separate them by business type. However, the analysis also showed that the coefficient values estimated by constructing an equation for each growth stage were consistent with the pig growth outcomes. Also, the model predictive power test was excellent. For this reason, it is judged that the model design and traceability data constructed with the cohort and the dynamic ecological equation model system considering biological growth and shipment times are excellent. Finally, the model constructed in this study is expected to be used as basic data to inform producers in their decision-making activities and to help with governmental policy directions with regard to supply and demand. Research on the demand side is left for future researchers.
Park, C.H.;B.S. Koo;Kim, M.G.;J.I. Yun;H.Y Son;Lee, S.G.;Lee, C.K.
한국발생생물학회:학술대회논문집
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한국발생생물학회 2003년도 제3회 국제심포지움 및 학술대회
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pp.110-110
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2003
The high incidence of polyspermic fertilization is one of the major causes lowering the overall efficiency of porcine IVF. The common procedure for IVF involves the co-culture of both gametes in the medium drop, which increases sperm concentration and incidence of polyspermy. Therefore, the present study was carried out to increase the efficiency of porcine IVF by reducing polyspermy using a modified swim-up method. This method modifies conventional swim-up washing by placing oocytes directly at the time of washing. Sperm pellet was prepared in the tube and mature oocytes were placed on cell strainer with $70 \mu m$ pore size (Falcon 2350) at the top of the tube. After insemination, the oocytes were stained for examination. Also, the developmental potential of fertilized embryos was measured to evaluate for the feasibility of this method. While having similar penetration rates in both methods ($86.67 \pm 2.36% to 83.33 \pm 1.36%$), there was a significant reduction of polyspermy in modified swim-up method ($17.50 \pm 1.60%$) compare to the control ($44.1 \pm 3.70%$ (p<0.05). Subsequent culture showed higher rate of blastocyst formation in modified swim-up method (20.44$\pm$0.99%) than the control ($15.73 \pm 3.26%$) (P<0.05), even though there was no significant difference. These results suggest that, by controlling the number of spermatozoa reaching the oocytes, porcine oocytes might be protected from polyspermy in vitro. Also, the developmental potential of the fertilized embryos using this method could be improved by increasing the pool of spermatozoa with better quality. Further optimization of the procedure required to implicate this method in routine porcine IVF.
This study determined the effect of ovarian status at the beginning of the modified Double-Ovsynch program on reproductive performance in dairy cows. In the study, 1,302 cows were treated with a modified Double-Ovsynch program at 56 days after calving. This program comprises administering gonadotropin-releasing hormones (GnRH), prostaglandin F2α (PGF2α) 10 days later, GnRH 3 days later, GnRH 7 days later, and GnRH 56 h later, followed by timed artificial insemination (TAI) 16 h later. At the beginning of the program, cows were categorized according to the size of the largest follicle and the presence of a corpus luteum (CL) in the ovaries as follows: 1) small follicle (<5 mm, SF group, n = 100), 2) medium follicle (8-20 mm, MF group, n = 538), and 3) large follicle (≥25 mm, LF group, n = 354) without a CL, or 4) the presence of a CL (CL group, n = 310). The pregnancies per AI after the first TAI were analyzed by logistic regression using the LOGISTIC procedure, and the logistic model included the fixed effects of the herd size, parity, body condition score (BCS) at the first TAI, TAI period, and ovarian status. A larger herd size, higher BCS at the first TAI, and TAI period with no heat stress increased (p < 0.05) the probability of pregnancy per AI after the first TAI. However, ovarian status at the beginning of the program did not affect (p > 0.05) the pregnancies per AI (ranges of 37.9% to 42.9%). These results show that the modified Double-Ovsynch program can be used effectively while maintaining good fertility regardless of the ovarian status in dairy herds.
Objective: This study aimed to assess the impact of the dilution ratio of Tris diluent, storage at 0℃, and long-distance transportation on the spermatozoa of Simmental cattle. It also validated the feasibility of the regional distribution of fresh semen. Methods: In experiment 1, semen was diluted at four dilution ratios (1:6, 1:9, 1:12, and 1:15) to determine the optimal dilution ratio of Tris diluent. In experiment 2, we assessed sperm viability, progressive motility (objectively assessed by computer-assisted sperm analyzer), and acrosome intactness in Tris dilutions kept at constant 0℃ for 1, 3, 6, 9, and 12 days. We compared them to Tianshan livestock dilutions (Commercial diluent). In experiment 3, semen was diluted using Tris diluent, and sperm quality was measured before and after long-distance transport. Artificial insemination of 177 Simmental heifers compared to 156 using Tianshan Livestock dilution. Results: The outcomes demonstrated that 1:9 was the ideal Tris diluent dilution ratio. The sperm viability, Progressive Motility, and acrosome integrity of both Tris and Tianshan dilutions preserved at 0℃ gradually decreased over time. sperm viability was above 50% for both dilutions on d 9, with a flat rate of decline. The decrease in acrosome integrity rate was faster for Tianshan livestock dilutions than for Tris dilutions when stored at 0℃ for 1 to 6 days. There was no significant difference (p>0.05) in sperm viability between semen preserved in Tris diluent after long-distance transportation and semen preserved in resting condition. The conception rates for Tris dilution and Tianshan livestock dilution were 49.15% and 46.15% respectively, with no significant difference (p>0.05). Conclusion: This shows that Tris diluent is a good long-term protectant. It has been observed that fresh semen can be successfully preserved for long-distance transport when stored under 0℃ conditions. Additionally, it is feasible to distribute semen regionally.
본 연구는 $2001{\sim}2005$년(5년간) 제주도에서 사육중인 제주 한우와 흑우를 체내 수정란의 생산과 수정란 이식 기술을 통하여 조기 증식하고자 실시하였다. 한우 고등 등록우 286두와 흑우 경산우 69두(총 355두)에 대하여 발정 주기에 관계없이 CIDR를 질내에 삽입 후 7일째부터 성선 자극 호르몬($Folltropin^{(R)}-V$) 400 mg을 50 mg씩 균등하게 나누어 4일간 12시간 간격으로 근육주사하였다. 투여 6회째에 CIDR를 제거하였으며, 동시에 $PGF_{2{\alpha}}$ 25mg을 근육 주사하여 과배란을 유기하였다. 공란우의 인공수정은 $PGF_{2{\alpha}}$투여 후 발정을 확인하고 12 시간 간격으로 3회 인공 수정하였으며, 2회 인공 수정시 GnRH $250{\mu}g$을 근육 주사하였다. 수정란 회수는 1차 인공 수정 후 $7{\sim}8$일째에 비외과적 방법으로 채란하였다. 수란우는 CIDR를 7일간 삽입하였다가 제거하는 동시에 $PGF_{2{\alpha}}$ 25 mg을 근육 주사하여 공란우와 발정을 동기화 시켰다. 수정란 이식은 발정이 동기화된 수란우 1,219두에 대하여 6명의 수정란 이식 시술자가 비외과적 방법으로 황체가 존재하는 자궁각에 이식하였다. 한우 및 흑우 공란우의 평균 회수 총 난자수 및 이식 가능 수정란 수는 각각 7.4개 및 4.7개 였으며, 회수 총 난자수는 2 품종간에 차이가 없었으나, 이식 가능 수정란 수는 한우(5.0개)가 흑우(3.5개)에 비해 많았다(p<0.05). 공란우의 반복 과배란 처리에 따라 흑우에서는 과배란처리 두수 대비 수정란 채란우 비율이 감소되었으며(p<0.05), 한우에서는 회수 총 난자수 및 이식 가능 수정란 수의 감소가 나타났다(p<0.05). 과배란 처리 계절에 따른 수정란 회수 성적은 여름(5.6개)이 겨울(2.9개)에 비해 이식 가능 수정란의 수가 많았다(p<0.01). 수정란 이식 후 수태율은 평균 40%를 나타내었으며, 공란우의 품종간 차이가 없었으며, 이식년도가 2001년에서 2004년으로 경과될 때 수태율이 증가하였으며(p<0.05), 수정란 이식 시술자에 따른 수태율의 차이가($33.0{\sim}45.9%$) 인정되었다(p<0.01). 본 연구의 결과는 제주 한우 및 흑우에서 CIDR를 이용한 과배란 처리 및 수란우의 발정동기화 처리는 한우 체내 수정란의 안정적인 생산과 수란우의 준비가 가능함을 보여 주었다.
본 연구는 한우의 생리적인 번식적령기를 구명하는 기초자료를 확보하여 조기번식에 따른 번식능력의 감소를 방지하고 한우 암소의 번식능력을 증진하여 농가의 소득증대에 이바지할 목적으로 각 처리구당 4구로 나누어 총 32두를 공시하여 얻어진 연구결과는 다음과 같다. 분만후 송아지의 평균 생시 체중은 전 구간에서 평균 23.5$\pm$0.6kg으로 나타났으며 암송아지는 21.8$\pm$0.8kg에 비해 수송아지는 평균 25.0 $\pm$0.8kg으로 다소 높게 나타났다. 또한 송아지 성장단계별 체중은 T2구에서 유의적인 증가 추세를 보였다. 따라서 송아지의 체중변화는 어미소의 영양상태에 따라 중요하게 작용하는 것으로 나타났다. 초발정일령은 전 구간에서 평균일령과 평균체중은 각각 263.3$\pm$6.4일과 181.1$\pm$11.3일로 나타났다. 1회째 인공수정에 의한 수태율은 T1구에서 25%로 가장 낮았으며 T4구에는 75.0%로 가장 높았다. 수태당 종부회수는 T1와 T2구의 2.3, 2.4회에 비해 T3, T4구가 1.5회로 낮았다. 초임 월령별 분만후 발정재귀일수는 T1구에서는 평균 66.2일, T2구에서는 76.7일, T3구에서는 62.4일, T4구에서는 68.5일이었으며 전 구간의 평균 발정재귀일수는 65.7일로 나타났다. 초발정 전후의 혈중 progesterone 농도는 전 구간에서 거의 유사한 결과를 보였다. 즉, 혈중 progesterone 분비는 생후 12개월령이 지나야만이 전 개체에서 정상적인 호르몬 분비상태가 나타나고 있다. 본 연구의 결과로는 12개월 이전에 난포의 배란과 정상 발정주기가 반복되는 개체는 총 32두중 5두만(15.6%)으로 확인되었다. 임신기간중 혈중 progesterone 농도는 임신 중기 이후에 비해 착상과 태반형성이 이루어지는 시기인 임신 초기에 다소 높은 경향이었으며 임신중기에는 다소 감소되었다. 분만 전후 혈중 progesterone 농도는 전 구간에서 분만 7일전부터 급격하게 감소되었으며 분만후부터 포유 약40일까지 progesterone이 거의 검출되지 않았으며 분만후 35일부터 본격적으로 progesterone이 분비되고 있음이 확인되었다. 따라서 분만후 정상 발정주기의 반복은 분만후 약 40일 이후 비로소 시작되는 것으로 사료된다. 이상으로 본 연구의 결과를 요약하여 한우의 초임유도시 최적 초임시기의 결정요소는 14개월령과 체고 약 110cm, 체중 약 265kg 정도의 3가지 요건을 갖춘 후 초임유도를 시키는 것이 바람직하다고 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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