In order to find out an anticariogenic substance, antibacterial activities of some medical herbs and spices against Streptococcus mutans were investigated. The essential oils of oregano, thyme, sage, fennel, nutmeg, rosemary, calamus and cassia cortex were shown antibacterial effect against S. mutans. The essential oil of oregano among other tested medical herbs and spices showed the most active antimicrobial activity. The essential oil of oregano inhibited the activity of glucosyltransferase from S. mutans. The minimal inhibition concentration of oregano essential oil was determined as 0.05nl/ml. The activity of glucosyltransferase from S. mutans was inhibited in the presence of oregano essential oil.
충치 형성 과정에 중요한 불용성 글루칸의 합성과 관련된 sucrose-glucan glucosyltransferase (Gtf)를 Streptococcus mutans Ingbritt 의 배양액에서 염석과, Sephadex G-150, CM-Sephadex, DEAE-Sephadex column을 통과시켜 정제하였다. 회수율 6.3%였으며, 정제율 13배였다. sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE)에서 이 효소의 분자량은 66 kDa이며, 최적 pH와 온도는 각각 6.0과 $40^{\circ}C$이였다. 이 효소는 0.1 mM $Hg^{2+}$, $Cu^{2+}$, $Al^{3+}$에 의하여 22-59% 저해되었다. 이 효소는 2 mM 자이리톨에 의하여 40% 저해 받았으며, 0.05% 수용성 키토산, 글리콜 키토산, 글리콜 키틴에 의하여 35-45% 저해되었다. 키틴 유도체가 Gtf 활성을 억제한다는 보고는 본 연구가 최초이며, 이는 키틴 유도체를 구강청결제의 소재로 활용할 수 있음을 제시한다.
마, 꿀풀 추출물의 용매 분획별 구강병인균에 대한 항균 및 항우식 효과를 알아본 결과 다음과 같은 결과를 얻었다. S. mutans에 대한 마, 꿀풀 헥산 추출물의 상대성장률과 산 생성 억제 및 GTase 활성 저해효과을 알아본 결과, 마 헥산 추출물의 0.25 mg/ml 농도에서 100%, 꿀풀헥산 추출물의 0.5 mg/ml 농도에서 100% 성장을 억제하였다. 따라서 농도가 증가함에 따라 성장이 억제되는 것을 볼 수 있었다. 2.0 mg/ml 농도에서 마가 pH 7.2, 꿀풀이 pH 7.0로 나타나 pH 5.6, pH 5.2인 대조군과 비교하여 볼 때 마, 꿀풀 헥산 추출물을 첨가물이 산 생성을 억제하여 중성으로 보여주고 있으며, GTase 활성 저해효과는 마와 꿀풀의 헥산 추출물의 2.0 mg/ml농도에서 35%, 25%로 각각 활성을 저해하였다.
The NCS inhibited the activity of glucosyltransferase which was produced by Streptococcus mutans JC-2, and the rate of inhibition at $100\muM<$ and $200\muM$ were 74.0% and 99.8%, respectively. It was stable in alkali condition, but unstable in acid condition. It was also stable up to $80^{\circ}C$. The kinetic study of the inhibition by NCS was carried out by Lineweaver-Burk plot and Dixon plot. It was non-competitive inhibition, determined by the two plots and $K_i$ and $K_i$ values were $15\muM$ and $19.3\muM$ respectively. The NCS did not show cytotoxicity against human gingival cells at $K_i$ ($15\muM$, $150\muM$, $1,500\mu$ M) concentrations. It had less cytotoxicity than chlohexidin, which has usually been used as the agent of anticaries. To evaluate the industrial applicability of the NCS, human pluck tooth was used. The inhibitory rates of tooth calcification and calcium ion elution by the NCS were 41 % and 2.5 times, respectively. These results suggested that NCS from Bacillus sp. S-1013 is an efficient anticaries agent.
고삼에서 치아우식원인세균인 S. mutans에 대한 항세균효과와 GTase의 활성을 저해하는 물질을 탐색, 개발하여 식품 또는 치아우식예방제로 응용하기 위하여 연구를 수행하였다. 고삼 에틸 아세테이트추출물의 3차 분획의 소분획에서 S. mutans에 대한 최소억제농도가 3.13 $\mu$g/ml으로 나타나, 높은 항세균효과를 관찰할 수 있었다. GTase 활성은 고삼의 에틸 아세테이트 추출물에 의하여 glucan의 형성을 저해하였으며, 100 $\mu$g/ml의 농도에서 77%의 저해율이 나타났고, 통계학적으로 유의한 효과가 나타났다 (p<0.05), 이상의 결과로 고삼은 치아우식예방제로 개발 가능성이 있다고 기대된다.
오배자 등 민간생약제와 포도과피 추출물의 항균활성과 GTase 활성저해능에 대하여 조사하였다. 항균활성과 GTase 저해 활성능은 오배자와 적포도 과피의 물추출물이 가장 우수한 것으로 나타났다. 오배자와 적포도 과피 추출물의 methanol 분획물은 B. subtilis와 E. coli 균주에 대해서 강한 항균활성을 나타내었다. 오배자 추출물의 methanol 분획물은 B. subtilis와 E. coli에 대한 최소 저해 농도가 각각 1.0mg/ml과 3.0mg/ml이었고, 포도과피 추출물 추출물의 methanol 분획물의 GTase활성의 80% 저해율에 대한 농도는 각각 1.08$\times$10-3mg/ml과 1.08$\times$10-2mg/ml이었다. 두 추출물의 항균활성과 GTase활성 저해의 주요 화합물은 polyphenol 화합물 계통으로 추정된다.
The present study was performed to investigate the excellent microbial anticaries substance, aminoglycoside antibiotic, which is more effective than chlorhexidine for the treatment of dental caries. The aminoglycoside antibiotic against Streptococcus mutans JC-2 from a novel alkaliphilic Bacillus alkalophilshaggy JY-827 exhibited no significant difference at the treatment concentration of $2.5{\times}10^{-7}M$, however, it inhibited the activity of the Streptococcus mutans glucosyltransferase by 70.2% and 99.8% at the concentrations of $2.5{\times}10^{-7}$M\;and\;2.5{\times}10^{-6}M$, respectively. Lineweaver-Burk plot of the inhibitory aminoglycoside antibiotic showed competitive inhibition, with $K_i$ value of $6.4{\times}10^{-6}$ M. The aminoglycoside antibiotic did not show any cytotoxicity against human gingival cells. To evaluate the industrial applicability of the aminoglycoside antibiotic, a toothpaste containing this substance was prepared and tested on the extracted human teeth. The inhibitory rate of tooth calcification and calcium ion elution by the aminoglycoside antibiotic were 50% and 2.5 times, respectively. These results suggested that the aminoglycoside antibiotic from Bacillus alkalophilshaggy JY-827 is an effective agent against dental caries.
솔잎과 소나무 가지의 항충치 효과와 기능성 소재로서의 활용 가능성을 조사하기 위하여 추출물과 용매 분획의 S. mutans에 대한 항균효과, GTase 활성 억제효과 그리고 열과 pH 에 대한 안정성을 측정하였다. 열수추출물 보다는 70% EtOH 추출물이, 솔잎보다는 가지 추출물이 S. mutans에 대한 생육저해 효과가 큰 것으로 나타났으며, 특히 n-hexane 분획의 MIC 는 0.6 mg/mL로서 S. mutans에 대해 가장 높은 항균효과를 나타내었다. 그리고 솔잎과 가지 추출물의 GTase 활성 억제 효과는 S. mutans에 대한 생육억제 효과 결과와 마찬가지로 열수추출물 보다는 70% EtOH 추출물이, 솔잎 보다는 가지 추출물이 GTase 활성 억제 효과가 큰 것으로 나타났다. 한편 솔잎의 n-hexane은 열처리 온도가 증가함에 따라 S. mutans에 대한 항균력이 크게 감소하였고 pH의 변화에도 크게 영향받는 것으로 나타났다.
옛부터 민간 약제로 사용했던 감나무 잎을 식품, 화장품 기능 생물 신소재로 활용하기 위해 감나무잎의 주성분으로 알려진 폴리페놀 화합물을 분리하고 생리활성 기능을 조사하였다. 감나무 잎을 60%의 아세톤으로 추출한 용액을 동결 건조시켜 농도별로 조제하고 glucosyltransferase, tyrosinase 효소저해를 관찰한 결과 glucoslytransferase는 $1.8{\times}10^{-1}$ mg/ml에서 82.84% 저해를, tyrosinase는 0.8 mg/ml에서 21,65% 저해 활성이 확인되었다. Sephadex G-50으로 gel filtration한 결과 fraction 1, 2, 3, 4, 5로 분획되었고 이중 fraction 1, 2에서 효소 저해 활성을 나타내었다. 활성 분획물의 물질군을 확인하기 위해 proteinase K 처리와 멸균처리한 결과 효소저해에 영향은 없어 활성물질군은 단백질군이 아니며, UV spectrum에서 자외선 영역에 최대 흡광치를 보여주므로 페놀링을 갖는 화합물로 추정하게 되었다. 추정화합물을 Sephadex LH-20, MCI-gel 및 Bondapak $C_{18}$ column에서 분리한 결과 F1 fraction에서 compound $1{\sim}4$가지 4종류의 화합물, F2 fraction에서는 compounds 5, 6, F3 fraction에서 compound 7, 8, 9를 순수 정제하여 재결정하였다. 분리된 화합물은 TLC 발색반응에서 flavan-3-ol 골격을 기본으로 하는 축합탄닌 반응을 보였고 전개정도에서 monomer가 2종류, dimer가 3종류, trimer가 1종류로 확인되었다.
To separate anticaries and antiinflammation from Aloe vera peel, we investigated a inhibited effect of Streptococcus mutans JC-2 that was antibiosis, glucosyltransferase activity about aloe-emodin and barbaloin. Aloe-emodin and barbaloin had strong antibiosis activity against Streptococcus mutans JC-2, they were especially antibiosis effect to low growth and prolong lag phase at attachment concentration 100$\mu\textrm{g}$/mL. The reduction rate of a culture fluid became to lessen than the comparison group for aloe-emodin and barbaloin. The intracellular materials of Streptococcus mutans JC-2 were to leakage as much as attachment concentration addition of aloe-emodin and barbaloin but there was no significant difference membrane demage between two active substances. The activity of GTase was inhibited by aloe-emodin and barbaloin and their inhibition rate was respectively 99.8%, 98.4% at the attachment concentration 100$\mu\textrm{g}$/mL.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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