L. acidophilus를 면 제조 시에 첨가할 목적으로 MRS broth 배지를 이용하여 $37^{\circ}C$에서 3일 동안 배양시킨 후 면의 주원료인 밀가루, 물, 소금의 혼합액에 L. acidophilus를 선택 접종시켜 72시간 배양 발효시킨 결과 발효물에 젖산이 6.821mg/g, 초산이 0.191 mg/g 생성되어 발효물에서 젖산의 함량이 높았다. 배양기간 중 발효물의 pH는 저하되며 총산도가 증가되었다. 식염첨가 발효물의 점도는 발효시간의 경과에 따라 증가되었으나, 식염을 첨가하지 않은 발효물의 점도는 감소하였다. 한편 식염을 첨가하지 않은 발효물은 변질이 되어 식염이 보존성에 미치는 효과를 알 수 있었고 형태적 관찰에서 발효물에서 L. acidophilus의 전형적인 간균 형태를 보이고 있음을 확인할 수 있었다.
본 연구에서는 생체재료 표면개질의 방법으로 유-무기 박막 형성에 관한 방법을 연구하였다. Collagen의 분해 시 얻어진 gelatin을 polystyrene 배양접시에 2 h 동안 흡착시켜 gelatin 흡착층을 형성하였다. Gelatin 흡착중에 calcium과 phosphorus 과포화 이온용액을 주입하여 calcium phosphate (CaP) 박막을 제조하였다. 박막 형성 초기에 박막의 핵들이 나타나는 것을 관찰하였다. 처리시간에 따라 CaP 박막에 성장하여 배양접시의 바닥표면 전체에 형성된 것을 볼 수 있었다. 형성된 gelatin/CaP 복합 박막의 특징은 3차원 공간에서 다공성이 높은 표면 구조를 형성하였다. Attenuated total reflectance Fourier transform infra-red spectroscopy (ATR-FTIR)을 이용하여 CaP 박막의 화학적 성질을 분석한 결과, 박막 형성 초기에는 무결정 형태의 박막이 형성되고, 시간이 경과됨에 따라 결정성이 약간 증가하지만, 결정성이 낮은 CaP에서 나타나는 흡수피크의 존재 등을 통하여 본 연구에서 제조한 CaP 박막은 poorly crystalline CaP 박막임을 확인하였다.
Results on localization of growth hormone receptor (GHR), interaction of growth hormone (GH) with receptor in buffalo adipose tissue and identification of activated signaling molecules in the action of GH are presented. Bovine GH (bGH) was labeled with fluorescein or biotin. Fluorescein-labelled bGH was used for localization of GHRs in buffalo adipocytes. The receptors were present on the cell surface. The affinity of binding of GH to its receptor was determined by designing an experiment in which buffalo adipose tissue explants, biotinylated GH and streptavidin-peroxidase conjugate were employed. The affinity constant was calculated to be $2{\times}10^8M^{-1}$. The receptor density on adipose tissue was found to be 1 femto mole per mg of tissue. Signalling molecules generated in the action of GH were tentatively identified by employing Western blot and enhanced chemiluminescence techniques using anti-phosphotyrosine antibody. Based on molecular weights of proteins reactive to anti-phosphotyrosine antibody, three signaling molecules viz. insulin receptor substrate, Janus activated kinase (Jak) and mitogen activated protein were tentatively identified. These signaling molecules appeared in a time (incubation time of explants with growth hormone) dependent way. The activation of Jak2 was confirmed by employing anti-Jak2 antibody in a Western blot. The activation of Jak2 occurred during 5 min incubation of buffalo adipose tissue explants with GH and incubation for an additional period, viz. 30 min. or 60 min., resulted in a drastic reduction in activation. The results suggest that Jak2 activation is an early event in the action of GH in buffalo adipose tissue.
The aim of this study was to evaluate the effects of $Ca^{2+}$, $HCO_3{^-}$ and BSA on the in vitro capacitation-associated protein tyrosine phosphorylation, hyperactivation and acrosome reaction in guinea pig sperm. Caudal epididymal sperm were incubated in four different groups: modified TALP (Tyrode's albumin lactate pyruvate) or TALP without one of the medium constituents ($Ca^{2+}$, $HCO_3{^-}$ and BSA). After incubation for the required time (0 h, 0.5 h, 1 h, 3 h, 5 h, and 7 h), sperm were removed for further experiment. The capacitation effect was assessed by CTC (Chlortetracycline) staining. Western blotting and indirect immunofluorescence were used to analyze the level and localization of tyrosine phosphorylation. The results showed that guinea pig sperm underwent a time-dependent increase in protein tyrosine phosphorylation during the in vitro capacitation and the percentage of protein tyrosine phosphorylated sperm increased from 36% to 92% from the beginning of incubation to 7 h incubation. Also, there was a shift in the site of phosphotyrosine-specific fluorescence from the head of sperm to both the head and the flagellum. Moreover, an absence of $Ca^{2+}$ or $HCO_3{^-}$ inhibited in vitro hyperactivation and acrosome reaction and decreased the phosphorylation of the proteins throughout the period of in vitro capacitation. However, an absence of BSA could not influence these processes if substituted by polyvinyl alcohol (PVA) in the medium.
In the process of producing chitosan from crustacean shell, the use of excessive acid and alkli is causing the problems of environmental pollution and of production cost. In this study, one way to solve these problems is to cultivate fungi, then, to extract chitosan from the cell wall. By means of flask incubation and batch cultivation, the optimum cultivation conditions for mass production of continuous cultivation was found. Four strains used for the production of fungal chitosan were Gongronella butleri IF08080, Absidia coerulea IF05301, Rhizopus delemar IF04775, Mucor tuberculisporus IF09256. In flask incubation to select strain of producing much chitosan by means of experiment of the effect of initial pH, Absidia coerulea IFO 5301 had highest yield in FCs, 258.1 $\pm$ 47.3 mg/200 $m\ell$l at pH 6.5. In flask incubation under the optimum cultivation condition, temperature 27$^{\circ}C$, culture time 6days, glucose 2%, peptone 1%, (NH$_4$)$_2$ SO$_4$ 0.5%, $K_2$HPO$_4$ 0.1 %, Nacl 0.1 %, MgSO$_4$ㆍ7$H_2O$ 0.05%, CaCl$_2$ㆍ2$H_2O$ 0.01 %, the yield of DCW brought the highest yields. In batch bioreactor, the optimum cultivation condition was that cell suspended solution was 70 $m\ell$, aeration rate 0.5 l/min, agitation rate 800 rpm, culture time 36 hr. In continuous bioreactor, the optimum substrate flow rate was 4 ι/day.
Experimental conditions for evaluating chitosan antibacterial activities were established. The chitosan antibacterial activities were measured against the Staphylococcus aureus and evaluated for their application to antibacterial textile finishing. The strain of Staphylococcus aureus used in this experiments was KCTC 1916. The chitosan antibacterial activities were estimated from the bacterial densities or %reduction of bacteria in chitosan solutions and bacterial culture mixtures after incubation under specific conditions. Six parameters as follows were evaluated to optimize the experimental conditions for measuring antibacterial activities. The different combinations of mixtures according to the different ratios of chitosan solutions to the bacterial cultures showed different antibacterial activities. However, the chitosan antibacterial activities could be evaluated by comparing the data obtained from the same combinations of mixtures. The solvent influence on the chitosan solution antibacterial activities could be eliminated using control solution containing the same concentration of acetic acid. The initial pH of the chitosan -bacterial mixtures also affected the chitosan antibacterial activity; at a higher pH, higher activity in terms of %reduction of bacteria was observed. In case of the bacterial solution without either the acetic acid or chitosan, the initial pH of the solution did not significantly affect bacterial growth. The % reduction of bacteria increased when contact times of bacteria with chitosan in the chitosan -bacterial mixture were expended upto 24 hours. However, the chitosan antibacterial activities could be successfully evaluated at contact time 0 where the chitosan-bacterial mixture was plated immediately after mixing and incubated to measure the bacterial number to 24 hours. Evaluating %reduction of bacteria in the test mixtures after incubation were not changed when the inoculated bacterial concentrations were 2.3${\times}$10$\^$0/ml to 2.3${\times}$10$\^$6/ml. The optimal range of incubation time of the petri-Dish after plating the chitosan-bacterial mixture was 24 to 72 hours depending on the antibacterial activities of the test solutions.
When ginseng water extract was incubated at $60^{\circ}C$ in acidic conditions, its protopanaxadiol ginsenosides were transformed to ginsenoside $Rg_3$ and ${\Delta}^{20}$-ginsenoside $Rg_3$. However, protopanaxadiol glycoside ginsenosides $Rb_1, Rb_2$ and Rc isolated from ginseng were mostly not transformed to ginsenoside $Rg_3$ by the incubation in neutral condition. The transformation of these ginsenosides to ginsenoside $Rg_3$ and ${\Delta}^{20}$-ginsenoside $Rg_3$ was increased by increasing incubation temperature and time in acidic condition: the optimal incubation time and temperature for this transformation was 5 h and $60^{\circ}C$ resepectively. The transformed ginsenoside $Rg_3$ and ${\Delta}^{20}$-ginsenoside $Rg_3$ were metabolized to ginsenoside $Rh_2$ and $\Delta^{20}$--ginsenoside $Rh_2$, respectively, by human fecal microflora. Among the bacteria isolated from human fecal microflora, Bacteroides sp., and Bifidobacterium sp. and Fusobacterium sp. potently transformed ginsenoside $Rg_3$ to ginsenoside $Rh_2$. Acid-treated ginseng (AG) extract, fermented AG extract, ginsenoside $Rh_2$ and protopanaxadiol showed potent cytotoxicity against tumor cell lines. AG extract, fermented AG extract and protopanaxadiol potently inhibited the growth of Helicobacter pylori.
본 연구는 국내산 조사료인 IRG 사일리지의 이용성을 증진하기 위해 다양한 미생물제의 첨가 시 IRG 사일리지의 in vitro 반추위 발효특성 및 소화율에 미치는 영향을 조사하였으며, 미생물제의 접종 후 배양시간이 경과함에 따라 IRG 사일리지의 품질 및 in situ 반추위 소화율에 미치는 영향을 분석하였다. 미생물제로는 LC, BS 및 SC ($2.7{\times}10^7CFU/m{\ell}$)를 사용하였으며, IRG 사일리지에 $0.5{\times}10^4CFU/g$가 되도록 첨가하여 수행하였다. In vitro 실험 결과, 암모니아태 질소 함량은 12시간 배양 시 대조구보다 미생물제 처리구에서 높았고(p<0.05), 총 VFA 농도와 건물 분해율의 경우에도 유의적 차이는 없었지만, 대조구보다 미생물제 처리구에서 증가하였으며, 특히 L. casei에서 높게 나타났다. 미생물제를 접종한 후 5일간 배양한 결과, IRG 사일리지의 pH는 대조구보다 미생물제 처리구에서 낮았으며(p<0.05), 젖산 농도는 배양 1~5일 동안 대조구보다 미생물제 처리구에서 높았으며(p<0.05), 다른 처리구보다 LC-IRGS에서 접종 직후 가장 높았다(p<0.05). In situ 건물 분해율은 대조구보다 모든 처리구에서 증가하는 경향을 나타내었으며, 접종 직후에는 SC-IRGS에서 높았으나 이후 LC-IRGS에서 증가하였다. 본 연구결과를 보면, IRG 사일리지의 이용성을 제고하기 위해 LC, BS 및 SC을 활용한다면 IRG 사일리지의 반추위 내 소화율이 개선될 수 있으며, 특히 IRG 사일리지에 L. casei를 첨가하여 단시간 추가 발효하여 젖소에 급여한다면 IRG 사일리지 내 초산 및 낙산의 감소로 품질 및 소화율 개선에 효과가 있을 것으로 사료된다.
The aim of this experiments were to assess the time-interval change of motional characteristics in frozen-thawed semen of Korean native cattle (KNC) by using computer aided semen analysis (CASA) technology. Twenty-six KNC frozen semen straws were obtained from Korean KNC improvement department, livestock improvement main division, national livestock cooperatives federation in Korea. Specimens were allowed to thaw at $37^{\circ}C$ for 30 sec in water bath. Semen analysis was performed on semen image analysis system (SIAS, Medical supply, Korea) adjusted to the gate settings and used the semen droplet ($5{\mu}l$) placed on Makler counting chamber (Sefi medical instrument, Israel) prewarmed at $37^{\circ}C$. The same person used the same micropipette to fill the Makler counting chamber. A total of 150 or more of sperms were analysed in each specimen by a single trained person by scanning at least 5 to 10 fields. The measurement parameters in SIAS were as follows ; frame rate = 30 frames per sec, image capture = 1 sec, minimum motile speed = $10{\mu}m/s$, maximum countable sperm number = 400. Statistical analysis was done by Student t-test with use of the Sigma plot program on a IBM personal computer. The dancemean(DNM) and hyperactivated sperm(HYP) of frozen-thawed KNC semen kinematics were significantly decreased(p < 0.05) after 10 min of incubation at $37^{\circ}C$ water bath. But, wobble(WOB) of same sample semen was significantly increased(p < 0.05) after 10 min of incubation and significantly decrease(p < 0.05) after 60 min of same incubation. And, after 30 mim of incubation, significantly differences were found most of motion kinematics, motifity(MOT), curvilinear velocity(VCL), straight line velocity(VSL), average path velocity(VAP), amplitude of lateral head displacement(ALH), beat cross frequency(BCF), mean angular displacement(MAD), dance(DNC), on same sample semen. The DNM of KNC semen sample was variable kinematics after 30 min of incubation. Also, the linearity(LIN) and straightness(STR) was significantly decreased(p < 0.05) from 60 min of incubation. In conclusion, the AI within 30 min after thawing of frozen semen can be an effective method for obtaining high fertility rate in KNC reproductive program.
근육단백질과 카제인염 단백질간의 상호작용의 촉매제로서 TGase의 배양시간과 온도에 따른 물성효과를 측정하기 위하여 본 연구를 실시하였다. 돈육 등심부위의 근원섬유단백질을 추출하였고 배양온도는 $4^{\circ}C$, $37^{\circ}C$로, 배양시간은 0, 0.5, 2, 4시간으로 단백질의 열량분석, 점도, 겔 강도, 전기영동상 패턴의 변화를 측정하였다. 단백질열량변화는 각 단백질 별로 열량변화 패턴이 상이하게 나타났으며 근원섬유와 카제인염의 혼합액은 각각의 단백질 피크와 유사하게 나타났고 배양시간과 온도에 따라 차이를 보여 $4^{\circ}C$에 비하여 $37^{\circ}C$에서 열량변화의 차이가 크게 나타났다. 점도의 경우 배양하지 않은 것과 비교했을 때 $37^{\circ}C$에서 2시간 배양했을 때부터 유의적인 차이를 보이며 증가하였다. 근원섬유단백질을 4.5%의 농도로 가열에 의한 겔의 강도를 측정한 결과, 배양시간이나 온도에 따른 뚜렷한 차이를 보이지 않았다. 전기영동의 경우에도 $4^{\circ}C$ 와 $37^{\circ}C$의 배양의 경우 myosin heavy chain과 카제인 염 단백질 분획이 배양시간이 경과함에 따라 점차 감소하였고, 특히 $37^{\circ}C$에서 30분까지는 큰 변화를 나타내지 않았으나 2시간부터 32-34 kDa 분자량을 갖는 카제인 염단백질의 저분자의 밴드가 사라지고 고분자의 biopolymer를 형성하였다. 이상의 결과를 종합하면 $4^{\circ}C$보다 $37^{\circ}C$에서 단백질 분자간의 상호작용에 의한 TGase의 효과가 뚜렷하였으며 $37^{\circ}C$에서 2시간 이상 배양시 TGase에 의한 현저한 물성의 차이를 보인 것으로 평가된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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