This study was performed to determine the effect of maternal protein intake on 1) the concentration of immune substances in milk 2) degree of passive immunity to pups via lactation, and 3) specific antibody production to a specific antigen, $\beta$-lactoglobulin(BLG). 4) the effect of passive immunity that pups received from mother during lactation on the production of antibodies when the pups were challenged to the same antigen. Part of the female rats were immunized with BLG before and during pregnancy. The pregnant rats were placed into either 25% or 10% isolated soy protein diet throughout gestation and lactation. After weaning, pups from each group continued to be fed the same diet. At 18 weeks of age, all the pups were challenged with BLG. Total IgA and IgG, lysozyme, BLG-specific IgA and IgG were measured in dam's serum, dam's milk, and pup's serum. Total IgG, and lysozyme in dam's serum and milk were higher in high protein group. Total IgA and IgG in pup's serum remained higher in high protein group from 5 to 18 weeks of age. BLG-specific antibodies were found in the milk and serum of immunized dams, and in serum of pups born to immunized dams but not in the non-immunized group. BLG-specific IgA and IgG were again higher in high protein group and declined with time. The concentration decreased faster in the low proetein group than in the high protein groups. After immunization the pups with LBG, serum BLG-specific antibodies were not differ between rats born to immunized dams and those born to non-immunized dams. Therefore passive immunity rats received via milk as a pup had no effect on the BLG-specific antibody production later in life. This study shows the importance of protein status of mother and strongly support to the endorsement of breast feeding.
Anti-H pylori 항체를 함유한 면역우유를 $60^{\circ}C$에서 30분 열처리한 것과 열처리하지 않은 Anti-H. pylori 항체를 함유한 원유의 면역활성 비교시 99.99(100)%의 면역 활성을 나타내었으며, $75^{\circ}C$ 이상의 열처리에 의해서는 면역 활성이 급격하게 감소하여 약 50%이하로 감소하였다. 열처리 온도가 높을수록, 열처리 시간이 증가할수록 총균수의 감소율이 증가하였다. Coliform bacteria의 경우는 원유에서 $10^2\;CFU/mL$이 관찰되었으나 모든 열처리 구에서는 관찰되지 않았다. 면역우유를 $2^{\circ}C,\;4^{\circ}C$ 그리고 $10^{\circ}C$에서 21일 동안 저장한 결과 면역우유의 저장 중pH의 변화는 저장 21일 동안 $2^{\circ}C$와 $4^{\circ}C$에 저장한 경우 저장온도에 따른 뚜렷한 변화는 관찰할 수 없었으며, $10^{\circ}C$에 저장한 경우 저장 7일 이후 급격히 감소하였다. 총균수의 변화는 저장 초기 $10^3\;CFU/mL$에서 $2^{\circ}C$와 $4^{\circ}C$에 저장한 열처리 면역우유의 총균수는 저장 21일 동안 뚜렷한 증가현상을 관찰할 수 없었으며, $10^{\circ}C$에 저장하였을 경우 7일 이후 급격히 증가하여 저장 14일째 $10^8\;CFU/mL$로 부패현상을 나타내었다. 면역우유의 저장 중 면역 활성의 변화는 저장 온도에 관계없이 저장 14일까지는 저장초기의 활성에 비해 뚜렷한 차이는 나타나지 않았으나 14일 이후 급격히 감소하는 경향을 나타내었다.
Naegleria fowleri로 면역시킨 마우스의 혈청이나 비장세포를 다른 마우스에 주입시켜 N. fowleri 감염에 대한 면역효과가 나타나는지 살펴보았다. 또 어미 마우스를 N. fowleri로 면역시 킨 다음 면역시키지 않은 어미에서 태어난 새끼 마우스에게 면역시킨 마우스의 모유를 먹게한 뒤 모유를 통한 면역 효과의 전달 여부를 관찰하였다. 면역시킨 마우스의 비장세포나 정상 마우스의 혈청을 다른 마우스에 주입시킨 경우 감염 후 사망률이 감소하였으나 혈중 IgG는 증가되지 않았다. 한편, 면역시킨 마우스의 혈청이나 정상 마우스의 비장세포를 준 경우 혈중 보G가 증가되고 감염 후 생존 기간은 연장되었으나 결국은 모든 마우스가 사망하였다. 즉 면역시킨 마우스 또는 정상 마우스의 혈청이나 비장세포를 다른 마우스에 주입시키면 사망률이 감소되거나 생존 기간이 연장됨을 알 수 있었다. 또 면역시킨 어미 마우스의 혈중, 모유 내, 또는 그 모유를 먹은 새끼 마우스의 혈 중에서, N. fowleri에 대한 IgG는 증가되었으나 IgA는 증가하지 않았으며 증가된 항체도 감염 후 의 사망률이나 생존 기간에는 큰 영향을 주지 않았다.
Anti-H. pylori 항체를 함유한 면역우유의 다양화와 기능성강화를 위해 면역요구르트 제조 가능성을 검토하였다. 발효 중 pH는 배양 6시간째 pH 6.4에서 4.5로 감소하였고 그 이후는 뚜렷한 변화는 관찰되지 않았다. 산도는 배양 6시간째 0.4%에서 1.27%까지 급격히 증가하였으며, 배양 24시간까지 1.34%를 유지하였다. 유산균의 변화는 배양 6시간째 $10^9\;CFU/mL$이었으며, 배양 24시간 동안 $10^9\;CFU/mL$이상을 유지하였다. 열처리 전후의 면역우유와 면역우유로 제조한 요구르트의 IgG 함량은 각각 $11.10\;{\mu}g/mL$, $10.76\;{\mu}g/mL$, $10.38\;{\mu}g/mL$이었으며, 열처리 후 면역우유의 면역 활성은 열처리 전에 비해 약 97%, 요구르트 제조 후는 93.5%를 유지하였다. 면역우유로 제조한 요구르트의 $2^{\circ}C$, $4^{\circ}C$, $10^{\circ}C$에서 저장 중 pH의 변화는 $2^{\circ}C$와 $4^{\circ}C$에서 저장한 경우 배양 전 기간에 걸쳐 저장초기 pH 4.2 범위를 유지하였다. 적정산도는 $2^{\circ}C$와 $4^{\circ}C$에서 저장한 경우 저장초기 1.42%에서 저장기간 동안 뚜렷한 변화가 관찰되지 않았다. $10^{\circ}C$에서 저장한 요구르트의 유산균수는 저장 7일째 $10^8\;CFU/mL$, 저장 14일째 $10^9\;CFU/mL$이었다. $2^{\circ}C$, $4^{\circ}C$에 저장한 경우 저장 전 기간 동안 저장초기의 $10^8\;CFU/mL$와 유사한 유산균수를 나타내었다. 면역우유로 제조한 요구르트의 저장 중 IgG 함량의 변화는 저장하기 전 $10.11\;{\mu}g/mL$이었으며, $2^{\circ}C$와 $4^{\circ}C$에서 저장한 경우 저장 7일째까지는 저장초기와 유사한 함량을 나타내었으며, 저장 14일 이후 급격히 감소하여 배양 21일째는 각각 $7.65\;{\mu}g/mL$, $5.75\;{\mu}g/mL$을 나타내었다. $10^{\circ}C$에서 저장한 경우도 이와 유사하였으며, 저장 21일째 $5.51\;{\mu}g/mL$로 급격하게 감소하였다.
Bovine respiratory syncytial virus (BRSV) and bovine viral diarrhea virus (BVDV) are the main viral contributors to bovine respiratory disease (BRD) with high mortality and morbidity. BRD control measures include vaccination that modulates immunological profiles reflected in blood cells, serum, and body secretions, such as milk. This study evaluated the immune responses to an inactivated BRD vaccine in lactating cows reared in a natural environment on a dairy farm. The cows were intramuscularly inoculated with the vaccine, and serum, blood, and milk were collected pre-and post-vaccination. Our study revealed a prominent increase in BRSV-specific antibodies both in serum and milk, while the change in BVDV-specific antibodies was insignificant. Serum interleukin (IL)-1β and IL-6 levels significantly decreased, but this change was not reflected in milk. Evaluation of pattern recognition receptors (PRRs) via RT-qPCR revealed downregulation of nucleotide-binding oligomerization domain 2 (NOD2). The concentrations of BRSV antibodies, BVDV antibodies, IL-2, and IL-17A in serum and milk were strongly correlated, implying a concurrent influence on both body fluids. Thus, immunological factors modulated as a result of vaccination generally measured in serum were reflected in milk, demonstrating the suitability of milk evaluation as an alternative approach for immunological observations. Furthermore, the correlation between BRSV antibodies and NOD2 and that between BVDV antibodies and toll-like receptor (TLR) 2, TLR3, TLR4, and TLR5 imply the possible role of PRRs for the assessment of the immune response developed in immunized cows reared on the farm.
For a survey of the occurrence of aflatoxin M$_{1}$ (AFM$_{1}$) in domestic cow's milk, we developed an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) system, and quantitated the toxin in cow's milk. In order to produce specific antibodies AFM, conjugated to bovine serum albumin (AFM$_{1}$-BSA) and Freund's adjuvant were immunized subcutaneously to rabbits. By use of the antiserum showing the highest titer and AFB$_{1}$-HRP conjugate, we established a competitive direct ELISA (cdELISA) for AFM$_{1}$, whose detection limit was 0.003 ppb. The cross-reactivities of the antiserum against aflatoxin M$_{1}$ M$_{2}$, B$_{1}$, B$_{2}$, G$_{1}$, G$_{2}$, B$_{2a}$, and G$_{2a}$, were 100, 29.9, 25.0, 2.7, 13.0, 0.65, 0, and 0%, respectively. When the cdELISA was applied to the cow's milk spiked with AFM$_{1}$ and followed by cleanup with C$_{18}$ cartridge, the mean recovery of the assay was 104% (mean of CV, 6.4%) in the final concentration of 0.01-1 ppb (10-1, 000 ppt). When cow's milk samples gathered from markets and farms were assayed by the cdELISA, the mean concentration and SD of AFM$_{1}$ was 80.4 $\pm$ 55.0 ppt (n=64; range, 5.6-280 ppt).
Kim, J.Y.;Cho, K.K.;Chung, M.I.;Kim, J.D.;Woo, J.H.;Yun, C.H.;Choi, Y.J.
Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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제15권4호
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pp.570-575
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2002
Effects of active immunization against native 14-mer somatostatin (SRIF, somatotropin releasing inhibiting factor) and its two 14-mer-somatostatin analogues on the milk production in rat mammary cells were studied. Native SRIF, Tyr11-somatostatin (Tyr11-SRIF), and D-Trp8, D-Cys14-somatostatin (Trp8Cys14-SRIF) were conjugated to bovine serum albumin (BSA) for immunogen preparation. Twenty-four female Sprague-Dawley rats were divided into four groups and immunized against saline (Control), SRIF, Tyr11-SRIF, and Trp8Cys14-SRIF at five weeks of age. Booster immunizations were performed at 7, 9, and 11 weeks of age. SRIFimmunized rats were mated at 10 weeks of age. The blood and mammary glands were collected at day 15 post-pregnancy and -lactation. To measure the amount of milk protein synthesis in the mammary gland, mammary cells isolated from the pregnant and the lactating rats, were cultured in the presence of $^3H$-lysine. No significant differences in growth performance, concentration of growth hormone in the circulation, and the amount of milk protein synthesis were observed among the groups. Inductive levels of serum anti-SRIF antibody in the SRIF and Tyr11-SRIF groups but not in the Trp8Cys14-SRIF group, were significantly higher than that of the control group during the pregnancy and lactation periods. The result suggests that active immunization against native 14-mer SRIF and Tyr11-SRIF was able to induce anti-SRIF antibodies, but did not affect the milk protein synthesis.
가공식품중의 우유단백질 분석을 위하여 효소면역측정법, ELISA를 개발하였다. 특이 항체를 생산하기 위해 열에 안정하고 우유의 주요한 단백질인 ${\alpha}_{s1}-CN$을 토끼에 면역하였다. 항${\alpha}_{s1}-CN$ 항체를 이용하여 간접경합 ELISA를 실시한 결과 검출한계는 $0.1\;{\mu}g/mL$ 이었고 ${\alpha}_{s1}-CN$, skim milk, ${\beta}-CN$과 whey protein isolate에 대한 특이항체의 반응성은 각각 100%, 37%, 0.14%과 0.04% 이었다. 그러나 다른 우유단백질인, ${\beta}-lactoglobulin,\;{\alpha}-lactalbumin$, bovine serum albumin 과 대두단백질인 isolated soy protein 에 대해서는 거의 반응성을 보이지 않았다. 샌드위치 ELISA 결과는 검출한계가 $0.01\;{\mu}g/mL$로 간접경합 ELISA 에 비하여 10배 정도 민감해져 따라서 이를 시료 분석에 이용하였다. 시유에 1-10%의 whole CN을 첨가한 spike test 결과 whole CN의 평균 회수율이 94.8%(CV, 8.2%)으로 나타났다. 식품재료와 유가공 제품에 대한 whole CN의 정량분석을 실시한 결과 탈지유는 29%, WPI는 0.03%, 농후 요구르트는 0.25%였으며 가공치즈는 6.9%로 나타났다.
본 연구는 축산농가에서 가축의 세균성 질병의 예방과 치료 및 성장촉진을 목적으로 주로 사용되고 있으며, 축산물과 유가공품에 잔류 가능성이 높은 sulfamethazine(SMZ)을 검출할 수 있는 직접경쟁 효소면역분석법(direct competitive ELISA)의 개발과 이를원유 및 시판우유 분석에 이용하는 것을 목적으로 하였다. 면역항원의 합성은 hemiglutarate와 hemisuccinate를 이용하여 SMZ-hemiglutarate(SMZ-HG)와 SMZ-hemisuccinate(SMZ-HS) hapten을 유도한 후 단백질 KLH와 STI를 결합시켜 마우스 면역에 사용하였고, SMZ-HG-KLH를 이용하여 면역한 마우스에서 가장 높은항체 생성정도를 나타내었다. 세포융합과 cloning을 실시하여 총15종의 hybridoma cell line을 확보하였고 그 중 가장 경쟁성이 뛰어나고 민감도가 높은 1H11-5 hybridoma를 선택하고 대량 생산하였다. 생산된 항체는 sulfamethazine에만 54%의 교차 반응성을 나타내었고, 다른 설파계 항생제와는 반응을 하지 않는 특이성이 높은 항체로 확인되었고 이를 이용하여 확립된 direct competitive ELISA법은 검출범위가 0.1-100 ppb 수준으로 기존에 보고된 ELISA보다 민감도가 높았다. 민감도와 특이성이 높은 direct competitive ELISA를 이용하여 원유와 시판우유를 분석하기 위한 전처리법을 확립하여 회수율을 확인한 결과 원유의 경우 82-121%까지 회수가 되는 것으로 나타났으며, 시판유의 경우는 82-97%까지 회수가 되는 것으로 나타나 우유 샘플 중에 미량 잔류하는 SMZ를 신속하고 정확하게 분석할 수 있을 것으로 사료되었다. 이러한 연구결과를 종합해 볼 때 확립된 direct competitive ELISA법은 우유 시료뿐만 아니라 모든 축산물에 잔류 가능성이 높은 SMZ의 분석을 신속하고 정확하게 분석이 가능할 것으로 사료되었고 확립된 direct competitive ELISA법의 안정화 조건을 확립하고 응용한다면 외국으로부터 생산 및 수입되는 ELISA kit을 대체할 수 있는 저가형 국산화 ELISA kit의 상용화가 가능할것으로 사료되었다.
본 연구는 위염, 위궤양, 위림프종 및 위암과 같은 소화기 질환의 원인균으로 알려진 Helicobacter pylori균을 항원으로 하여 젖소에 면역시킨 후 생산된 우유의 anti-H. pylori 항체 생성능을 검토하고, 백신 투여량과 항체 생성과의 관계, 비유시기에 따른 항체생성과의 관계 그리고 백신투여가 젖소에 미치는 영향을 알아보았다. 백신 투여량에 따른 혈청과 유청내의 anti-H. pylori항체의 함량은 10 mL, 20 mL, 30 mL 백신투여 모든 군에서 대조구에 비해서 높은 항체 생성량을 확인하였으며, 그 중 20 mL 투여가 항체 생성에 가장 큰 영향을 미친 것으로 조사되었다. 백신 투여량에 따른 유청내의 antl-H. pylori항체 생성량은 혈청에서 나타난 결과와 유사한 결과를 나타내었다. 백신투여에 따른 비유시기별 항체함량은 혈액내에서는 $2\~4$주까지 증가하는 경향을 보이다가 $6\~12$주 사이에는 대조구와 유의성 있는 차이를 보였고, 처리구간 항체생성량은 비유초기>비유중기>비유 후기 순으로 유의성있는 차이를 나타내었다(p<0.05). 그리고 유청내 항체 함량은 혈액과 유사한 경향을 나타내며 항체함량이 증가하였으나, 처리구간의 유의적인 차이는 나타나지 않았다. 백신투여로 인하여 백신투여 1일째의 산유량은 $12\%$ 감소하는 경향을 나타냈고, 최장 1주일 정도 지나면서 회복되었다. 백신투여 후 젖소의 체온을 측정한 결과 정상적인 범위 내에서 체온이 상승하여 백신투여가 젖소의 생리적 변화에 큰 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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