• 한국잠사곤충학회지
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• 제36권1호
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• pp.62-68
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• 1994

뽕나무 추기벌채 후 피해가 큰 가지썩음 증상에서 빙핵활성세균의 분리, 생물검정 및 동정과 밀도를 조사하여 본 결과 1. 총 36개의 분리세균 중 -1$0^{\circ}C$ 이상 온도에서 동결이 되는 세균은 12개였으며, -5$^{\circ}C$ 이상의 온도에서는 2개균주였다. 2. 공시세균의 생물검정에 있어서 토마토와 옥수수에서는 -1$0^{\circ}C$ 이상의 동결균주에서는 일정한 경향을 볼 수 없었으나 뽕나무에서는 -5$^{\circ}C$ 이상에서 동결이 되는 세균에서만 육안으로 확실한 동상해피해를 볼 수 있었다. 3. 뽕나무, 옥수수, 토마토유묘에 피해를 주며 -5$^{\circ}C$ 이상에서 영핵활성이 있는 균주 SE9316, SE9338을 동정해 본 결과 gram음성, 간상형, 운동성이 있고 극모를 가지고 호기성균인 Pseudomonas syringae로 동정되었다. 4. 5cm, 10cm 이병뽕나무가지에서 Pseudomonas 속 영핵활성세균의 밀도는 2월과 4월이 가장 높았고, 5월에는 감소하는 경향이었으며 병반에서 멀어질수록 밀도는 감소하였다. 또한 그 밀도는 105cfu/g 이상으로서 동상해를 유발시키기에 충분한 밀도였다.

• 한국식품과학회지
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• 제29권2호
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• pp.326-336
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• 1997

INP를 포함한 빙핵활성세균을 식품 가공 단계에 직접 이용하기 위해 빙핵활성을 최대한 유지시키면서 완전 살균하는 방법을 찾기 위해 가열, 고압, 방사선으로 처리한 후 생균수 및 빙핵활성을 측정하였다. 균주는 Pseudomonas syringae, Xanthomonas campestris와 INP유전자를 포함한 plasmid가 재조합된 Escherichia coli JM109/pEIN229, Gluconobacter oxydans/pKIN230를 사용하였다. 빙핵활성을 T90 (drop의 90%가 어는 온도)으로 나타내었을 때 방사선 조사시 $0.3^{\circ}C{\sim}0.7^{\circ}C$, 초고압 처리시 $1^{\circ}C{\sim}2^{\circ}C$, 가열 처리시 $4^{\circ}C{\sim}7^{\circ}C$가 감소하여 방사선 조사에 의한 살균시 빙핵활성의 감소가 가장 적은 것으로 나타났다. 각 살균점에서의 cumulative ice nucleation activity spectra를 측정한 결과 A부류의 빙핵($-5^{\circ}C$ 이상에서 빙핵으로 작용)의 수는 방사선처리시 거의 감소가 없었으며 초고압처리시 90% 이상 감소하였으며 가열처리시 존재하지 않았다. 증류수에 방사선조사로 살균된 빙핵활성세균을 첨가한 후 DSC를 이용해 thermogram을 얻었다. 빙핵활성세균을 첨가하지 않은 증류수보다 $11^{\circ}C{\sim}15^{\circ}C$ 정도 높은 온도에서 발열 피크가 형성되기 시작했으나 흡열 피크는 큰 차이를 보이지 않았으며, 발열량 및 흡열량은 감소했다. 한편, DSC를 이용해 측정된 빙핵활성은 drop freezing method에 의해 측정된 값과 높은 연관성$(R^{2}>0.993,\;p<0.0001)$을 보여 간편하고 정확한 빙핵활성 측정법으로의 사용 가능성을 제시했다.

• 식물병과 농업
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• 제5권1호
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• pp.27-33
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• 1999

Frost injury of crops is closely related to the epiphytic population dynamics of ice nucleation-active (INA) bacteria, and the injury can be reduced by decreasing the INA bacterial population. In order to predict the epiphytic population of INA bacteria on crops, a rapid and accurate detection method has to be developed. In the previous report, we produced some antibodies against INA proteins purified from the outer membrane of INA bacteria. However it was difficult to produce the antibodies because the purification procedures of the INA proteins were complicated, and the final yield was too low. We designed a specific peptide from the N-terminal region of INA protein by computer analysis and synthesized the peptide in vitro in this experiment. The peptide sequence was Asp-Ser-Por-Leu-Ser-Leu-His-Ala-Asp, that is corresponding to the highly conserved region in several INA proteins, with predicted beta turn, coiling, and hydrophilic region. A polyclonal anti-INA peptide antiserum produced specifically recognized INA bacteria as few as 10 colony-forming units (CFU) in the ELISA reactions and did not respond to other non-INA bacteria. Serological specificity of the anti-INA peptide antiserum will facilitate the forecasting of the INA bacterial population dynamics on crops.

• 한국식물병리학회지
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• 제12권1호
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• pp.99-108
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• 1996

3종의 빙핵세균 Peudomonas syringae 8401, Pseudomonas fuorescens 8701, Erwinia herbicola 8701의 세포 외막으로부터 아무런 변성제도 사용치 않고 sucrose density gradient centrifugation, Sephacryl gel filtration chromatography, DEAE-cellulose ion exchange chromatography, non-denaturing buffer를 이용한 PAGE, electroelution, SDS-PAGE를 통해 빙핵활성 단백질을 고도로 정제할 수 있었다. P. suringae와 P. fluorescens에서는 각각 3종류(155 kD, 75 kD, 50 kD)의 빙핵활성 단백질이, E. herbicola에서는 155 kD를 제외한 2종류(75 kD, 50 kD)의 빙핵활성 단백질은 이 연구를 통해 처음 밝혀진 것으로 , 지금까지 보고된 빙핵활성 단백질(150 KD 이상)보다는 훨씬 작은 것이다. 이는 빙핵활성을 나타내는 단백질의 기본단위는 이 실험의 결과만에 의하면 최대 50 kD임을 시사한다. 이들 단백질은 그 유래된 세균의 종류나 또는 단백질 분자량의 크기에 관계없이 모두 -5.5~7.5$^{\circ}C$에서 물을 동결시키는 높은 빙핵활성을 갖고 있었다. 이는 지금까지 보고된 어느 정제단백질의 빙핵활성보다 높은 것이다. 정제된 단백질의 빙핵활성은 trypsin 처리에 의해 상실되었고, pH6~8범위에서는 안정하였으며, pH5이하, pH9이상에서는 활성을 상실하였다. 보존온도에 대한 영향은 3$0^{\circ}C$이상이 되면 점차 활성이 감소하는 경향을 보이다 37$^{\circ}C$이상에서는 활성이 완전히 상실되었다. 금속이온으로서 Hg\ulcorner이온과 SDS에 의해 활성이 상실되었으나 phosphatidylinositol의 첨가에 의해서는 활성이 약간 증가(-1$^{\circ}C$)하였다.

• 한국식물병리학회지
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• 제3권3호
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• pp.180-186
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• 1987

단감나무와 차나무의 표면에서 분리한 Pseudomonas syringae 2계통 PS8401, PS8402를 $2.5\%$ glycerol이 첨가된 nutrient agar에서 배양한 다음, 증류수로 세포현탁액($10^8$ colony forming unit/ml)을 조제하여 마이크로피펫법으로 동결온도를 측정하여 본 결과, 각각 -2.5와 $-3.8^{\circ}C$에서 동결하여 빙핵활성이 인정되었다. 한편 동일한 방법에 의한 증류수의 동결온도는 $-21.8^{\circ}C$였고 옥수수를 비롯한 8가지 작물즙액의 동결온도는 $-11.6^{\circ}C$ 이하였다. PS 8401의 nutrient broth 현탁액$(10^8\;cfu/ml)$을 살포한 옥수수유묘는 $-2^{\circ}C$에서부터 얼기 시작하여 $-4^{\circ}C$가 되면, 거의 전체 식물이 상해를 입었으나 nutrient broth만 살포한 대조구의 유묘는 온도가 $-9^{\circ}C$로 내려가기 전까지는 피해를 입지 않았다. PS8401 현탁액을 살포한 후 48시간에 측정한 유묘의 피해는 살포한 세균의 량이 증가함에 따라 심해지는 경향이었다. 상기 PS 8401의 빙핵활성은 현탁액내 세포의 수가 많아짐에 따라 증가하였으며 세균을 배양한 배지의 조성이 배양온도에 따라서도 빙핵활성이 변하였는데 $2.5\%$ glycerol 혹은 $2.5\%$ glucose를 첨가한 nutrient agar와 탄소원을 별도로 첨가하지 않은 nutrient agar에서 자란 세균현탁액$(10^2\;cfu/ml)$의 동결온도는 각각 -4.0, -4.4, $-7.2^{\circ}C$였고, 배지를 $2.5\%$ glycerol을 함유한 nutrient agar로 고정하고 온도를 달리하여 생육시킨 세균현탁액 $(10^2\;cfu/ml)$의 동결온도는 $-4.0^{\circ}C$(생육온도가 $15\~25^{\circ}C$인 경우)와 $-7.6^{\circ}C$(생육온도가 $30^{\circ}C$인 경우)였다.