These studies were performed to approach the precise pathway inducing the meiotic inhibitory action of hypoxanthine on mouse follicular oocytes and to identify the cause of detrimental effect of hypoxanthine on viability of the oocyte in vitro. In addition, a correlation between the meiotic inhibitory effect and the detrimental effect of hypoxanthine was investigated. Mouse follicular oocytes at germinal vesicle(GV) stage were collected from the ovaries of ICR mice by puncturing the antral follicles with a fine needle, at 48 hours after PMSG injection. Oocytes were cultured in Modified Whittingham's T6 media containing hypoxanthine and several materials that involved in metabolism of hypoxanthine, and the effects of the materials on the actions of hypoxanthine were investigated by observing germinal vesicle breake down (GVBD), 1st polar body (PB) extrusion and viability of the oocytes. Phophodiesterase significantly reduced the meiotic inhibitory effect of dbcAMP but did not influence on the inhibitory effect of hypoxanthine. Allopurinol and 6-MP significantly enhanced the meiotic inhibitory effect of hypoxanthine, but the materials themselves also showed the meiotic inhibitory action like hypoxanthine. Hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase significantly enhanced the meiotic inhibitory effect of hypoxanthine, on the contrary HGPRT itself promoted meiotic resumption of the oocytes. Catalase did not induce any change in the meiotic inhibitory effect of hypoxanthine, but SOD increased the GVBD rate suppressed by hypoxanthine. The detrimental effect of hypoxanthine on viability of the oocytes was significantly reduced by allopurinol and catalase, but SOD increased the GVBD rate suppressed by hypoxanthine. The detrimental effect of hypoxanthine on viability of the oocytes was significantly reduced by allopurinol and catalase, but SOD did not reduce the deterimental effect of hypoxanthine. In conclusion, the meiotic inhibtory effect of hypoxanthine may be caused by guanyl dervartives converted from hypoxanthine via salvage pathway, and superoxide anion may partially participate in the inhibitory effect of hypoxanthine. The detrimental effect of hypoxanthine on viability of the oocytes be cused by hydrogen peroxide produced during the metabolism of hypoxanthine.
The influence of hypoxanthine and ovarian steroids on the meiotic maturation process of mouse oocytes was investigated for the qualified application of culture medium in in vitro fertilization(IVF). Mouse oocytes were cultured in hypoxanthine and various ovarian steroids(progesterone, estradiol-17${\beta}$ and testosterone) and their effects on the oocyte maturation had been observed. When mouse oocytes were cultured in the various concentration(1-4mM) of hypoxanthine, meiotic maturation of cumulus cell-enclosed oocytes was inhibited by presence itself, which was a dose-dependent effect in meiotic arrest of mouse oocytes. The presence of progesterone, estradiol-17${\beta}$ and testosterone have made the mouse oocyte mature properly. Meanwhile maturation of cumulus cell-enclosed oocyte was severely inhibited by 3 hoursculture in the media of progesterone supplemented with hypoxanthine. However the continuous presence lasting 24 hours of progesterone even supplemented with hypoxanthine had got rid of the inhibition of oocytes maturation. Not only estradiol-17${\beta}$ supplemented with hypoxanthine but also testosterone supplemented with hypoxanthine exert the severe inhibition of the maturation of cumulus cell-enclosed oocytes for 3-hours culture. However the continuous presence lasting 24 hours of estradiol-17${\beta}$ and testosterone even supplemented with· hypoxanthine had relieved the inhibition of oocytes maturation. These results make us suggest that hypoxanthine inhibits the mouse oocyte maturation, particularly markedly in conjunction with ovarian steroids for short period, which indicated some sort of the synergistic inhibitory retationship between the ovarian steroids and hypoxanthine.
In the previous study, we observed that Purine has a time dependent effect in maintaining the oocytes in meiotic arrest, and human fetal cord serum(HFCS) and human mature follicular fluid(HMFF) reverse the GVBD suppressed by purines. And it was reported that purine has a harmful effect on the development of oocytes or embryos, when they were cultured for a long time, in vitro. Therefore this study was performed to investigate the effects of purine on extrusion rates of 1st pb and viability of oocytes cultured for a long time, in vitro. Immature oocytes(GV stage) were collected from ovaries of 25~28 day old ICR mice at 48 hrs after PMSG injection. Cumulus-enclosed and denuded oocytes collected were assigned randomly to one of several culture conditions. Some of the oocytes were cultured in 4mM hypoxanthine for 24hr, and the extrusion rates of 1st pb and viability of the oocytes were assessed at every 12 hrs. In the viability, the oocytes showed granulation, pigmentation of cytoplasm or lysis of 1st pb extruded were regarded as degenerating oocytes. Also some of the oocytes were cultured in hypoxanthine for 12 hrs then the resulting oocytes were transferred to hypoxanthine-free medium and cultured for 12 hrs to determine whether the inhibitory effect of hypoxanthine on the 1st pb extrusion was reversible. The rest of the oocytes were cultured in medium containing hypoxanthine and adenosine for 18 hrs to compare the 1st pb extrusion be attendant upon hte concentration of HFCS or HMFF supplemented. Hypoxanthine suppressed the extrusion of 1st pb and viability of the oocytes significantly, when they were cultured for more than 12 hrs and the harmful effect of hypoxanthine was showed in denuded oocytes, prominently. The suppressive effect of hypoxanthine was reversed by just removal of the hypoxanthine from the cultrue medium. Also there was no difference in reverse the pb extrusion rate suppressed between HFCS and HMFF. The extrusion rate of 1st pb in medium containing adenosine and hypoxanthine was increased in line with the concentration of HFCS or HMFF supplemented. Hypoxanthine suppressed the extrusion of 1st pb and viability of the oocytes significantly, when they were cultured for more than 12 hrs and the harmful effect of hypoxanthine was showed in denuded oocytes, prominetly. The suppressive effect of hypoxanthine was reversed by just removal of the hypoxanthine fromthe culture medium. Also there was no difference in reverse the pb extrusion rate suppressed between HFCS and HMFF. The extrusion rate of 1st pb in medium containing adenosine and hypoxanthine was increased in line with the concentration of HFCS or HMFF supplemented.
For the production of Nucleic acid derivatives by microorganisms, adenineless mutants were induced from Bacillus subtilis with the mutagens, ultraviolet rays and diethylsulfate. And total strains of 62 adenineless mutants were isolated. These mutants were found to have an ability of accumulating u. v. absorbing substances in the culture broth. They were analyzed to be hypoxanthine, uracil, and other unknown compound by means of two dimensional thin layer chromatography, u. v. absorption spectra, and I. R. absorption spectrum. Mutant BS-137 was screened out to accumulate hypoxanthine, which was isolated from the culture broth through activated carbon column and recrystallize from cold water. The effect of the medium compositions on hypoxanthine accumulation were examined for the mutant BS-137. Glucose appeared to be the best carbon source, but molasses could be substitute for it, NaNO$_3$ and yeast extract were especially good sources of nitrogen.
Gulbi were made by salting Yellow corvenia (Pseudosciaena manchurica) with the in three ways: the dry salting method with bay salt, the dry salting method with purified salt or with the abdominal brine injection method with purifie salt. The half of the sample was dried by the control system of temperature and humidity: the other part was dried by the natural condition. In fresh muscle, the content of IMP, hypoxanthine, inosine and AMP were $13.40,\;9.28,\;3.01{\mu}mole/g$ and trace amount, dry basis, respectively. In fresh egg, the content of AMP, hypoxanthine, inosine and IMP were 13.98, 6.56, 1.98 and $1.93{\mu}mole/g$, dry basis, respectively. During the drying process of Yellow corvenia, the content of hypoxanthine increased remarkably, while the content of AMP, IMP and inosine decreased ana remained as trace amount. It can be suggested that the characteristic flavor of Gulbi is not attributed to the nucleotides and their related compounds but rather to free amino acids.
Proceedings of the Korean Society of Applied Pharmacology
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1992.05a
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pp.21-21
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1992
녹용은 한방에서 신경조절 약화, 신체발육부진, 허약체질 등에 사용되는 강장제로서 인삼과 더불어 중요한 약재 중의 하나이지만 아직까지 유효 성분이 밝혀져 있지 않다. 알려진 녹용의 성분으로 collagen, acid mucopolysaccharide, 중성지질, 당지질, ganglioside, 인지질, proteolipid, prostaglandins, estrone, estradiol, cholesterol, its ester, 7-keto-cholesterol, 7$\alpha$-hydroxycholesterol , 7$\beta$-hydroxycholesterol , p-hydroxy-benzaldehyde, uracil, uridine, hypoxanthine, nicotinic acid, creatinine urea 등이 보고되었다. 이와 같은 성분들은 동물조직에서 공통적으로 발견되는 것들로서 녹용의 특이성분이라 부르기 어렵다. 그러나 uracil, uridine, hypoxanthine과 같은 핵산염기 관련 성분은 녹용에 비교적 함량이 많고, 이중에서 hypoxanthine은 monoamine oxidase-B에 대한 저해작용이 있으므로 주목할 필요성이 있다.
Yang Sang Cheol;Kwon Kang Beam;Cho Hyun Ik;Min Young Gi;Heo Jae Hyuk;Kim Gu Hwan;Ryu Do Gon
Journal of Physiology & Pathology in Korean Medicine
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v.16
no.5
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pp.955-959
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2002
To test the protective effect of herbal medicine on myocardial damage against oxygen free radical-induced myocardiotoxicity, cytotoxicity was examined using MTT, Beating rate and TSARS assay in the presence of water extract of Rhizoma Coptidis. Myocardial toxicity was evaluated in neonatal rat myocardiocytes in cultures. The results of these experiments were obtained as follows: Xanthine oxydase/hypoxanthine resulted in a decrease in viability, beating rate and in a increase in lipid peroxidation in Cultured myocardial cells. Rhizoma Coptidis water extract shows effects of protection from the cardiocyte toxicity induced by xanthine oxydase/hypoxanthine treatment such as increases in beating rate. Rhizoma Coptidis water extract shows effects of protection from the cardiocyte toxicity induced by xanthine oxydase/hypoxanthine treatment such as decreases in lipid peroxidation. These results show that xanthine oxydase/hypoxanthine elicits toxic effects. in cultured myocardial cells derived from neonatal rat, and suggest that water extract of Rhizoma Coptidis is very effective in the prevention of xanthine oxydase/hypoxanthine-induced cardiotoxicity.
Hwang In Jin;Kwon Kang Beom;Cho Hyun Ik;Min Young Gi;Heo Jae Hyuk;Kim Gu Hwan;Ryu Do Gon
Journal of Physiology & Pathology in Korean Medicine
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v.16
no.6
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pp.1117-1121
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2002
To test the protective effect of herbal medicine on myocardial damage against oxygen free radical-induced myocardiotoxicity, cytotoxicity was examined using MTT, Beating rate and DNA synthesis assay in the presence of water extract of three kinds of Radix Rehmanniae. Myocardial toxicity was evaluated in neonatal rat myocardiocytes in cultures. The results of these experiments were obtained as follows : Xanthine oxydase/hypoxanthine resulted in a decrease in viability, beating rate and DNA synthesis in cultured myocardial cells. Radix Rehmanniae Recens(生地黃, RRR) water extract shows effects of protection from the cardiocyte toxicity induced by xanthine oxydase/hypoxanthine treatment such as increases in beating rate. Radix Rehmanniae Preparat(熟地黃, RRP) water extract shows effects of protection from the cardiocyte toxicity induced by xanthine oxydase/hypoxanthine treatment such as increases in DNA synthesis. These results show that xanthine oxydase/hypoxanthine elicits toxic effects in cultured myocardial cells derived from neonatal rat, and suggest that water extract of three kinds of Radix Rehmanniae is very effective in the prevention of xanthine oxydase/hypoxanthine-induced cardiotoxicity.
Octopus Octopus vulgaris was dried with open air at $17{\sim}20^{\circ}C$ for 90 hours. Nucleotides and related substances were collected by extraction with cold perchloric acid, and their amounts were determined by ion exchange column chromatography. The contents of inosine, hypoxanthine and ADP in raw sample were 9.4, 5.1 and 4.1 ${\mu}mole/g{\cdot}dry\;wt.$ respectively. ATP and AMP were very low in content. But IMP was not detected in Octopus muscle. ATP, ADP and inosine tended to degrade rapidly during sun drying while AMP and hypoxanthine were increased. Especially, hypoxanthine were increased about three times during sun drying and also it was increased about two times during three months storage after sun drying.
The purpose of this study was to elucidate protective effect of Fructus Schsandrae(FS) water extract against xanthine oxidase/hypoxanthine(XO/HX)-induced cardiotoxicity in myocardial cells this experiment was performed. Cardiotoxicity of XO/HX was examined by MTT(MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2.5,-diphenyl tetrazolium bromide) assay. XO/HX induced the decrease of cell viability. Also XO/HX induced the increase of LDH activity and the decrease of beating rate on cultured myocardial cells in a dose-dependent manner. To investigate cardioprotective effect of FS water extract cultures were preincubated with FS water extract for 3 hours. Cultures were then exposed to XO/HX for 72 hours. FS water extract have an efficacy in decreaasing LDH activity and increasing heart beating rate on cultured myocardial cells damaged by XO/HX. From the results it is suggested that XO/HX may show toxic effect in cultured myocardial cells derived from neonatal mouse and FS water extract is effective in the prevention of XO/HX-induced cardiotoxicity.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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