This study was undertaken to evaluate antioxidative activities of substances isolated from marine resources against human low density lipoprotein (LDL). Methanol-water extract(80 : 20, v/v) of Sargassum ringgoldianum had the highest antioxidant activity and the active substance was purified by silica gel column chromatography by eluting chlorform : methanol mixture (80 : 20 v/v). The active fraction was seperated to several spots on the TLC in chlorofrom : methanol (10 : 1, v/v) mixture. Antioxidative activity of band 4 of fraction 2 on TLC was highest than that of $\alpha$-tocopherol against human LDL oxidation by the method of thiobarbituric acid reactive substance (TBARS). The band 4 of fraction 2 inhibited the copper mediated oxidation of human LDL with almost completely at 1 or 2 mg/ml.
본 연구는 유용식물로부터 DPPH free radical scavenger및 사람의 low density lipoprotein(LDL)의 산화에 대한 항산화 효과를 조사하기 위하여 25종의 식물로부터 메탄올로 추출하여 조사하였다. 각종 유용식물 중 항산화 활성은 우수한 달맞이꽃이 가장 높았으며 다시 메타놀로 추출하여 조사한 결과 $\alpha$-tocopherol과 항산화능이 거의 비슷하였다. 메타놀 추출물을 ethylacetate로 추출한 획분이 항산화 활성이 높았으며 ethylacetate 층 중 acidic soluble 획분을 다시 분리한 후 Sepadex LH-20 column chromatography로 추출한 결과 Fraction F-2가 전자공유능이 가장 높았다. 따라서 항산화 활성이 높은Fraction, F-2의 구조를 동정한 결과 3,4-dihydroxybenzoic acid와 3-hyoxycinnamic acid로 확인되었다.
This study was initiated to antioxidant activity of silybin on oxidation of human low density lipoproteins(LDL). Siltbin was extracted from Silybum marianum by the combination of fractionation and it was futher purified by silica gel column chromatography, and isolated active substances were identified silybin by IR, NMR and GC-MS. siltbin inhibited the ozidation of human low density lipoprotein(LDL) mediated by 5$^{\mu}$m CU $^{2+}$ ion in a dose dependent manner. LDL oxidation by congugated dines formation was completely inhibited by silybin at a concentration of 5$^{\mu}$M. The results provide a possibility that silybin might protect LDL against oxidation in atherosclerotic lessions.
This study was performed to evaluate the antioxidant activity of silymarin against human low density lipoproteins(LDL) oxidation. Silymarin extracted from Silybum marianum was successively purified with solvent fractionation and followed by silica gel column chromatography. The active substances were separated by HPLC and the isolated active substances, silymarin were identified by IR, NMR, GC-MS as silymarin. Silymarin inhibited at the 5 $\mu$M Cu2+-mediated oxidation of human low density lipoprotein (LDL) in a dose dependent manner. Silymarin completely inhibited LDL oxidation at 50 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$ concentration. These findings suggest that silymarin may protect LDL against oxidation in atherosclerotic lessions.
마늘을 발효시켜 만든 흑마늘의 지질 산화 억제 및 사람 Low Density Lipoprotein (LDL)에 대하여 항산화 활성을 실험하였다. 표준품으로서 마늘의 주성분인 alliin과 흑마늘의 에탄올과 물 추출물의 전자공여능을 각각 비교하여 측정한 결과 흑마늘 에탄을 추출물이 효능이 가장 높았다. 사람 LDL을 $Cu^{2+}$유도 LDL로 산화시킬 때 그 항산화능은 각 시료를 $10\;{\mu}g/ml$ 및 $20\;{\mu}g/ml$ 씩 첨가하며 TSARS를 측정한 결과 에탄을 추출물이 항산화 활성이 가장 높았으며 용량 의존형으로 나타났다. 흑마늘의 에탄올과 물추출물을 $10\;{\mu}g/ml$ 및 $20\;{\mu}g/ml$ 첨가한 후 J774 유도 산화에 대한 항산화 효과를 측정한 결과 각 추출물은 항산화 효과가 있었고 용량 의존형의 항산화 활성을 나타내었다. 흑마늘의 각 추출물을 이용한 실험에서 전기영동 이동상은 대조구에 비하여 $10\;{\mu}g/ml$ 및 $20\;{\mu}g/ml$에서 산화를 억제하였고 공액 2중 결합에 의한 실험에서도 항산화 효과가 있었으며 $20\;{\mu}g/ml$의 농도에서 거의 억제되었다.
해양에서 분리한 Streptomyces sp. BH-405의 배양액으로부터 정제하여 얻은 항산화 활성이 우수한 획분 band 2 에 대하여 사람 Low Density Lipoprotein(LDL)의 산화 억제 효과에 대하여 실험하였다. Streptomyces sp. BH-405의 배양액으로부터 분리 정제한 획분 band 2는 LDL에 대한 $5\mu\textrm{m}$$CuSO_4$ 의 유도 산화를 측정한 결과 100 및 200 $\mu\textrm{g}$/mL에서 LDL의 산화억제 효과가 높았다. 그리고, band 2를 이용한 macrophage 및 J774 유도 LDL의 수식에 대한 항상화 효과도 native LDL에 비하여 높았다. 이때 같은 농도의 band 2를 첨가하여 산화 LDL의 전기영동의 이동거리를 측정한 결과 native LDL보다는 약간 높았으나 Oxid LDL의 대조군보다는 이동거리가 낮으며 공액2중결합의 생성억제 효과도 있었다. 사람 LDL의 산화에 대하여 macrophage 및 내피세포를 이용하여 125I-LDL 산화에 대하여 band 2를 각각 100 및 200 $\mu\textrm{g}$/mL씩 첨가하여 실험한 결과 사람 LDL의 분해는 대조구보다 낮았으며 용량 의존형의 결과를 나타내었다.
Antioxidative activity of fraction extracted from cultivation of Aspergillus sp. A-5 against oxidation of human low density lipoprotein(LDL) was investigated. Fractions of Aspergillus sp. A-5 cultivation was sucessively purified with ethyl acetate and silica gel column chromatography. The concentration of fraction 4 inhibited Cu$^{2+}$-induced oxidation of LDL almost completely. Band 3 isolated by the further purification of fraction 4 was higher than that of same concentration of $\alpha$-tocopherol, BHA and BHT. The elcetrophoretic mobility of oxidized LDL by addition of Band 3 was faster than that of native LDL, but slower than that of oxidzed LDL. It is concluded that fraction of Aspergillus cultivation contained antioxidants with the capacity to inhibit oxidative modification of LDL.
해양미생물로부터 사람 Low Density Lipoprotein(LDL)에 대한 항산화 활성 균주를 검색 하였든 바 부산 인근연안에서 항산화 활성이 높은 Bacillus sp. RH-5를 분리 동정하였다. Bacillus sp. RH-5의 항산화 활성물질의 생산 최적 배지는 1.0% glucose, 0.25% polypeptone, 0.25% yeast extract, 0.01% $FeSO_4{\cdot}7H_2O$, 50% sea water 이였다. 이때 최적 조건은 pH 7.0, 배양오도는 $30^{\circ}C$ 및 배양시간은 48시간에서 항산화 활성이 가장 높았다. 사람 LDL을 $1~5\;\mu\textrm{M}\;CuSo_4$ 존재하에서 산화 시킨 결과 Bacillus sp. RH-5 배양액의 ethyl acetate 추출물의 500 및 $1,000\;\mu\textrm{g}/ml$에서 산화가 억제되었으며 또 $5\;\mu\textrm{M}\;CuSo_4$ 존재하에서 산화 시킨 LDL의 전기 영동거리는 native LDL 보다 다소 높았으나 LDL에 ethyl acetate 추출물을 첨가한 경우 그 이동거리는 native LDL과 거의 비슷하였다.
This study was undertaken to evaluate an antioxidative activity of silymarin and silybin obtained from Silybum marianum against oxidation of human low density lipoprotein (LDL). The electrophoretic mobility observed apparently was higher phase for LDL oxidized by macrophages compared to native LDL. Silymarin and silybin inhibited the copper-catalysed oxidation of human LDL in a dose-dependent manner. Silymarin and silybin at the concentration of 50 $\mu$M/ml also inhibited the copper catalysed oxidation of LDL induced by the cell J774 and macrophages. LDL reisolated from the cell incubation in the presence of silymarin or silybin was degraded at rates similar with native LDL. Silymarin or silybin found to be potential inhibitors against oxidation of $^{125}$I-LDL by macrophages and endothelial cells.
Low density lipoprotein (LDL)의 산화는 동맥경화의 유발과 진행에 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 본 연구는 숙성 마늘 유래 유황화합물인 S-allylmercaptocysteine의 항산화 효과를 실험하였다. S-allylmercaptocysteine의 항산화 효과는 $Cu^{2+}$ 유도 LDL에 대하여 thiobarturic acid substance (TBARS)와 전기영동 이동거리, 공액 이중결합으로 측정하였다. 사람 LDL을 $Cu^{2+}$ 유도로 산화시킬 때 S-allylmercaptocysteine은 용량 의존형으로 나타났으며, 농도가 $20{\mu}g/ml$ 일 때 거의 완전한 억제 효과를 나타내었다. S-allylmercaptocysteine에 대한 전기영동 이동거리로 $20{\mu}g/ml$ 일 때 가장 낮았으며 공액 2중결합 형성도 $20{\mu}g/ml$ 일 때 거의 억제되었다. 한편 S-allylmercaptocysteine을 항산화제인 $d{\ell}-{\alpha}$-tocopherol과 LDL에 대한 항산화력을 비교한 결과 같은 농도에서 S-allylmercaptocysteine이 약간 높았다. 따라서 S-allylmercaptocysteine이 동맥경화의 발병과 진행을 예방하는 역할을 할 것으로 생각된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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