Sex determination in genomic DNA from human blood leucocytes was performed by amplification of human Y chromosome-specific DNA sequences using PCR technique. A clear DNA fragment(154 nucleotides long) was appeared only in the male genomic DNA, but no specific band was observed in the case of female genomic DNA and negative control. To know the sensitivity of this method, the amplification reaction was performed in genomic DNA diluted to 2pg equivalent to the amonut present in the single human cell, and clear band also observed. The PCR amplification was so succesfully performed in the single leucocyte separated from human blood using micromanipulator that this techniqe is assumed to be applied to single blstomere before embryo transfer.
Behcet's disease (BD) is a chronic, multisystemic disorder which is more frequently seen in the Mediterranean basin, Middle East, and Far East. The causes and pathogenesis of BD are unknown although many possibilities are being investigated. The diagnosis of BD is based on clinical manifestations because there are no pathognomonic laboratory tests. So, the purpose of this study was to examine the prevalence of HLA-B51 in patients with BD. We used the whole blood of 33 patients diagnosed with BD at Chosun University Hospital from August 2003 to January 2006. For the HLA-B51 test, we extracted the DNA from the whole blood of 33 BD patients, and we investigated it through the nested PCR method. Data were analyzed using the SPSS/PC 10.0. The frequencies of gender of the 33 cases diagnosed as BD were male 13 (39.4%) and female 20 (60.6%). The frequencies of age group of the 33 cases diagnosed as BD were 20 yrs 8 (24.2%), 30 yrs 12 (36.4%), 40 yrs 8 (24.2%), 50 yrs 1 (3.0%), and 60 yrs and 70 yrs 2 (6.1%), respectively. The frequencies of HLA-B51 of the 33 cases diagnosed as BD were HLA-B51-negative 18 (54.5%) and HLA-B51-positive 15 (45.5%). In conclusion, BD occurred more often in women than men (1: 1.53), and the mean age of the BD patients was 39.8 years old. HLA-B51 was positive in 45.5% of patients with BD, and was statistically significant in age (p<0.05).
The recombinant human epidermal growth factor(DWP 401) was investigated on the pharrnacological actions. DWP 401 had no effects on the hexobarbital-induced sleeping time, locomotor activity, rotarod test, body temperature, analgesic action and anticonvulsant action in mice. It also had no influences on the isolated tracheal muscle and ileum of guinea-pig, isolated uterus and fundus strip of rats. Slight hypotensive action with effect on respiration was revealed at a dose of 8 g/kg i.v. of DWP 401 in rabbits. DWP 401 exhibited a weak inhibitory action of glucose tolerance in normal rats, significantly lowered the blood glucose contents in adrenalectomized rats at .a concentration of 160 g,/kg, and produced a significant inhibitory effect on leucocyte migration in CMC-pouch of rats at a concentration of 32 g/rat. Furthermore, DWP 401 showed a significant decrease on gastric juice volume and acidity. However. DWP 401 had no intestinal propulsion rate and influence on urine excretion.
Rheumatoid arthritis (RA) is an autoimmune/inflammatory disorder with a complex genetic component. RA is characterized by chronic inflammation of the synovial membrane in the joint, which leads to the progressive destruction of articular cartilage, ligament and bone. Several cytokines such as tumor necrosis $factor-{\alpha}\;TNF-{\alpha}\;and\;interleukin-1{\beta}\;(IL-1{\beta})$ and interleukin-6 (IL-6) have been implicated in the pathological mechanisms of synovial tissue proliferation, joint destruction and programmed cell death in rheumatoid joint. Genome wide screening of subjects suffering from autoimmune diseases especially arthritis revealed linkage to inflammatory molecules like $TNF-{\alpha},\;IL-1{\beta}$ and IL-6, inducible nitric oxide synthase (iNOS), cyclooxygenase-2 (COX-2), nuclear factor-kappaB $(NF-{\kappa}B)$ and human leucocyte antigen/major histocompatibility complex (HLA/MHC) locus. The status of the pharmacological mechanism of herbal drugs in the light of genome wide screening results has been discussed to reinforce the therapeutic potential and the pharmacological basis of the herbal drugs.
The general pharmacological tests with rhGM-CSF indicated that it had no influences on rotarod and locomotor activity tests, but shortened hexobarbital-sleeping time at the large dose of 3 mg/kg s.c. in mice. It elicited no hypothermic, analgesic and antiepileptic action. No influences on blood pressure and respiration in rabbits were observed at the dose of 1 mg/kg, i.v. and it did neither affect the receptors of adrenaline, acetylcholine, serotonin, histamine, kinin and oxytocin, nor antagonize the actions of histamine, serotonin and oxytocin at its concentrations of 1$\times$$10^{-6}$g/ml. However, this substance was demonstrated to stimulate the formation of leucocytes in rats.
In this study, antioxidant activity of methanol extract of Glycyrrhiza uralensis Fisch (GUE) against $H_2O_2$-induced DNA damage in human leucocytcs and cell death in PC12 cells was determined. The effect of GUE on $H_2O_2$-induced DNA damage in human leucocytcs was evaluated by the comet assay, where GUE ($1-50\;{\mu}g/mL$) was a dose dependent inhibitor of DNA damage induced by $H_2O_2$. The protective effect of GUE against $H_2O_2$-induced damage on PC12 cells was investigated by MTT reduction assay and lactate dehydrogenase release assay. A marked reduction in cell survival induced by $H_2O_2$ was significantly prevented by $1-50\;{\mu}g/mL$ of GUE. The enzyme activity of caspase-3 was elevated in $H_2O_2$-treated PC12 cells, while preincubation with GUE for 30 min inhibited $H_2O_2$-induced caspase-3 activation in a dose-dependent manner. In conclusion, GUE ameliorates $H_2O_2$-induced DNA damage in human leucocytes and has neuroprotective effect by preventing cell death in PC12 cell, suggesting that GU may be a potential candidate for novel therapeutic agents for neuronal diseases associated with oxidative stress.
The present study was conducted to examine the antioxidant activities and neuroprotective effects of methanolic extracts from Schizonepeta tenuifolia Briquet (STE). STE ($100\;{\mu}g/mL$) showed $43.33\;{\mu}M$ of total phenolic content, 64.43% of radical scavenging activity, and 0.157 of reducing power. In addition, the effect of STE on $H_2O_2$-induced DNA damage in human leucocytes was evaluated by the comet assay, where STE was a dose dependent inhibitor of DNA damage induced by $200{\mu}M$ of $H_2O_2$. The protective effect of STE against $H_2O_2$-induced oxidative damage on PC12 cells was investigated by an 3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT) reduction assay and lactate dehydrogenase (LDH) release assays. After 2 hr of cell exposure to $H_2O_2\;(500\;{\mu}M)$, a marked reduction in cell survival was observed. However, this reduction was significantly prevented by $1-50\;{\mu}g/mL$ of STE. Therefore, these results suggest that STE could be a new antioxidant candidate against neuronal diseases.
Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition
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v.40
no.5
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pp.635-641
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2011
Anti-atherogenic effects in tumor necrosis factor-${\alpha}$ (TNF-${\alpha}$)-stimulated human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) are involved with suppressed oxidative stress, cell adhesion molecules, and pro-inflammatory factors. The aim of this study was to determine whether green tea seed coat ethyl acetate fraction (GTSCE) could modulate cell adhesion molecules and inflammatory mediators in HUVEC stimulated with TNF-${\alpha}$. Nitric oxide (NO) production was significantly increased in TNF-${\alpha}$-stimulated HUVEC compared to TNF-${\alpha}$ only treated cells. The NO that is produced by endothelial nitric oxide synthase dilates blood vessels and has protective effects against platelet and leucocyte adhesion. GTSCE at 25, 50, 75, and $100\;{\mu}g$/mL significantly (p<0.05) reduced TNF-${\alpha}$ production. GTSCE significantly (p<0.05) inhibited soluble vascular cell adhesion molecule-1 level, in a dose-dependent manner. Monocyte chemoattractant protein-1 level was also significantly (p<0.05) inhibited by GTSCE treatment at $75\;{\mu}g$/mL compared to the TNF-${\alpha}$-only treated group. Total antioxidant capacity by GTSCE was significantly (p<0.05) enhanced compared to the TNF-${\alpha}$-only treated group. These results suggest that GTSCE can inhibit the production of cell adhesion molecules and inflammatory mediators and could be used as a candidate bioactive material to prevent the development of atherosclerosis.
Leucocyte extravasation has been known to play an important role in inflammatory reactions including contact dermatitis. Previous studies suggested that CD99 regulates ${\beta}1$ integrin activity and may be a novel therapeutic target molecule for inflammatory diseases. In this study, the effects of CD99-derived peptide, CD99CRIII3, on inflammatory reactions in contact dermatitis mouse model were investigated. CD99CRIII3 decreased ${\beta}1$-integrin activity in human monocytic U937 cells. CD99CRIII3 inhibited the adhesion of U937 monocytes to human umbilical vein endothelial cells and their extravasation through human umbilical vein endothelial cells. CD99CRIII3 reduced inflammation in the phorbol myristate acetate-induced contact dermatitis mice in a dose-dependent manner. These results indicate that CD99CRIII3 suppresses the extravasation of monocytes and inflammatory reactions in the animal model of the contact dermatitis, suggesting that CD99CRIII3 could be a new drug candidate against inflammatory skin diseases.
The studies were conducted to investigate the combined effects of several combined preparation of crude drugs and mitomycin C(MMC). The combined effects on the proliferation of Molt-4 cells and activation of human lymphocytes were estimated by MTT colorimetric assays. The drugs itself enhanced the proliferation of Molt-4, but the inhibitory action of MMC was not affected by the combined treatment of the drugs and MMC. Among 9 kinds of the drugs, Sip Jeon Dae Bo Tang(SDT), Saeng Maek San(SMS) and Kwi Bi Tang(KBT) did not inhibit the action of MMC, but activated lymphocytes. When the mice were treated by MMC, the number of leukocytes was decreased significantly at the 1st day, but recovered at the 7th day. In the groups of MMC treated with SDT or KBT, the number of leukocytes was increased significantly than the group of MMC treated only at the 3rd day. The combined treatment of SDT, SMS and MMC retained the body weight of mice at the level of normal mice. The SDT, SMS and KBT did not change the number of plaque forming cells(PFC) and the proliferation of T cells. The combined treatment of SDT and MMC increased the number of PFC significantly than the MMC treated group. The combined treatment of SDT, SMS, KBT and MMC increased the T cell proliferation significantly than the MMC treated group. In conclusion, it is suggested that SDT, SMS and KBT can recover the side effects of MMC, such as weight loss, leukopenia and immunosuppression, without any intercalating the anti-proliferative action of MMC in vivo.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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